Microplate Assay. Compounds 1 and 2

Microplate Assay.

Compounds 1 and 2 were evaluated for AChE inhibition activity on 96-well microplates using Ellman’s method with a slight modification.

A mixture containing 100 µL of Tris buffer (pH 7.8), 20 µL of enzyme solution (0.5 U/mL in buffer), and 20 µL of sample diluted in 50% buffer-MeOH to give a range of concentration from 25 to 1600 µM was added to a microplate and incubated for 15 min at 37 ๐C.

Then 40 µL of 0.75 µM 5,5’-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) was added, and the addition of 20 µL of 1.5 µM acetylthiocholine started the reaction.

On account of the hydrolysis of acetylthiocholine, yellow 5-thio-2-nitrobenzoate anion was generated, and the absorbance was recorded at a wavelength of 406 nm after incubation at 37 ๐C for 30 min.

Galanthamine was used as the positive control. The percentage inhibition was evaluated using the equation I(%) = [1-(Asample-Abackground) / Ablank] × 100%, where Asample is the absorbance of each test compound, Ablank is the absorbance of the blank without test compound, and Abackground is the absorbance of the background without enzyme.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Microplate วิเคราะห์ สารที่ 1 และ 2 ถูกประเมินสำหรับกิจกรรมยับยั้งการปวด microplates 96-ดีด้วยวิธีการของ Ellman แก้ไขเล็กน้อยส่วนผสมประกอบด้วย 100 µL ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ (pH 7.8), 20 µL ของเอนไซม์ (0.5 U/mL ในบัฟเฟอร์), µL 20 ของตัวอย่างที่ทำให้เจือจางใน 50% บัฟเฟอร์ทานอให้ช่วงของความเข้มข้นจาก 25 ไป 1600 µM ได้เพิ่มเป็น microplate และ incubated สำหรับ 15 นาทีที่ 37 ๐ c 40 แล้ว µL ของ 0.75 µM 5, 5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) เพิ่ม และการเพิ่ม 20 µL ของ 1.5 µM acetylthiocholine เริ่มต้นปฏิกิริยาการ สร้างขึ้นในบัญชีไฮโตรไลซ์ของ acetylthiocholine เหลือง 5-thio-2-nitrobenzoate anion และบันทึกที่ absorbance ที่ความยาวคลื่นของ 406 nm หลังจากบ่มที่ 37 ๐ C ใน 30 นาที มีใช้ Galanthamine เป็นตัวควบคุมบวก ยับยั้งการเปอร์เซ็นต์ถูกประเมินโดยใช้สมการ I(%) = [1-(Asample-Abackground) / Ablank] × 100% ที่ Asample absorbance ของแต่ละการทดสอบผสม absorbance ของว่างเปล่าไม่มีทดสอบสารประกอบเป็น Ablank และ Abackground เป็น absorbance ของพื้นหลังโดยไม่มีเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไมโคร Assay. สารประกอบที่ 1 และ 2 ได้รับการประเมินว่าเป็นกิจกรรมที่ยับยั้งการเจ็บใน 96 หลุม microplates ใช้วิธีของ Ellman ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย. มีส่วนผสมที่มี 100 ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์ Tris (pH 7.8) 20 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ (0.5 U / มิลลิลิตรใน กันชน) และ 20 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างในการปรับลด 50% บัฟเฟอร์เมธานอลที่จะให้ช่วงของความเข้มข้น 25-1600 ไมครอนถูกบันทึกอยู่ใน microplate และบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่ 37 0C. แล้ว 40 ไมโครลิตร 0.75 ไมครอน 5,5 ' -dithiobis (กรด 2 nitrobenzoic) ถูกบันทึกและนอกเหนือจาก 20 ไมโครลิตร 1.5 ไมครอน acetylthiocholine เริ่มปฏิกิริยา. ในบัญชีของการย่อยสลายของ acetylthiocholine เหลือง 5 thio-2-nitrobenzoate ไอออนถูกสร้างขึ้นและการดูดกลืนแสงที่ถูกบันทึกไว้ ที่ความยาวคลื่น 406 นาโนเมตรของหลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 37 0C เป็นเวลา 30 นาที. Galanthamine ถูกใช้เป็นควบคุมบวก ยับยั้งอัตราร้อยละที่ได้รับการประเมินโดยใช้สมการที่ผม (%) = [1 (Asample-Abackground) / Ablank] × 100% ที่ Asample คือการดูดกลืนแสงของแต่ละสารทดสอบ Ablank คือการดูดกลืนแสงของสารประกอบที่ว่างเปล่าโดยไม่ต้องทดสอบและ Abackground คือการดูดกลืนแสงของพื้นหลังโดยไม่ต้องเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ตามลำดับ

สาร 1 และ 2 มาศึกษาฤทธิ์ยับยั้งอาการปวดใน 96 ก็ใช้วิธี microplates เอลเมิ่น กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย

ผสม ( 100 µ L ของทริสบัฟเฟอร์ pH 7.8 ) , 20 µ L ของสารละลายเอนไซม์ ( 0.5 U / ml ในบัฟเฟอร์ )และ 20 µ l ตัวอย่างเจือจาง 50% บัฟเฟอร์ที่จะให้ช่วงของปริมาณความเข้มข้น 25 จาก 1 , 600 µ M เพิ่มในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย และ บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที๐

แล้ว 40 µผม 0.75 µ M 5 , 5 ' - dithiobis ( 2-nitrobenzoic กรด ) คือการเพิ่มและเพิ่ม 20 µ L 1.5 µ M acetylthiocholine เริ่มต้นปฏิกิริยา

เนื่องจากการย่อยสลายของ acetylthiocholine ,แอน 5-thio-2-nitrobenzoate สีเหลืองถูกสร้างขึ้น และค่าการดูดกลืนแสงเท่ากับความยาวคลื่น 348 นาโนเมตรหลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที ๐

galanthamine ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก เปอร์เซ็นต์การยับยั้งถูกประเมินโดยใช้สมการ ( % ) = [ 1 - ( จำนวน abackground ) / ablank ] × 100 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งเป็นค่าจำนวนของแต่ละการทดสอบประกอบablank เป็นค่าว่างได้โดยไม่ต้องสอบ สารประกอบ และ abackground คือการดูดกลืนแสงของพื้นหลังโดยเอนไซม์