Successful cloning of an insert int

Successful cloning of an insert into the pGEM®-T or pGEM®-T Easy Vector interrupts the coding sequence of
β-galactosidase; recombinant clones can be identified by color screening on indicator plates. However, the characteristics
of the PCR products cloned into the vectors can significantly affect the ratio of blue:white colonies obtained.
Usually clones containing PCR products produce white colonies, but blue colonies can result from PCR fragments that
are cloned in-frame with the lacZ gene. Such fragments are usually a multiple of 3 base pairs long (including the 3´-A
overhangs) and do not contain in-frame stop codons. There have been reports of DNA fragments up to 2kb that have
been cloned in-frame and have produced blue colonies. Even if your PCR product is not a multiple of 3 bases long, the
amplification process can introduce mutations (deletions or point mutations) that may result in blue colonies.
The Control Insert DNA supplied with the pGEM®-T and pGEM®-T Easy Systems is a 542bp fragment from
pGEM®-luc Vector DNA (Cat.# E1541). This sequence has been mutated to contain multiple stop codons in all six
reading frames, which ensures a low background of blue colonies for the control reaction. Results obtained with the
Control Insert DNA may not be representative of those achieved with your PCR product.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ประสบความสำเร็จโคลนของใส่ pGEM ®-T หรือ pGEM ®-T เวกเตอร์ง่ายขัดจังหวะลำดับรหัสของΒ-galactosidase สามารถระบุโคลน recombinant โดยคัดกรองสีบนแผ่นตัวบ่งชี้ อย่างไรก็ตาม ลักษณะของ PCR ผลิตภัณฑ์โคลนเป็นเวกเตอร์มีมากผลต่ออัตราส่วนของอาณานิคมสีน้ำเงิน: สีขาวที่ได้รับปกติ fragments โคลนประกอบด้วย PCR ผลิตภัณฑ์ผลิตอาณานิคมขาว แต่อาณานิคมสีฟ้าสามารถทำจาก PCR ที่มีโคลนในเฟรม ด้วยยีน lacZ ชิ้นส่วนดังกล่าวมักหลายคู่ฐาน 3 ยาว (รวมถึง 3´-Aoverhangs) และไม่ประกอบด้วยการหยุดในกรอบ codons มีรายงานของดีเอ็นเอชิ้นส่วนถึงฐาน 2 ที่มีการโคลนในเฟรมและมีอาณานิคมสีน้ำเงิน แม้ว่าผลิตภัณฑ์ PCR ของคุณยาวไม่หลายฐานที่ 3 การกระบวนการขยายสามารถแนะนำการกลายพันธุ์ (ลบหรือกลายพันธุ์จุด) ที่อาจส่งผลในอาณานิคมสีน้ำเงินDNA แทรกตัวควบคุมที่ให้มาพร้อมกับ pGEM ® T และ pGEM ®-T ระบบกลายเป็นส่วน 542bp จากpGEM ®-ลุคเวกเตอร์ DNA (Cat. # E1541) ลำดับนี้มีการกลายมีหลาย codons หยุดในทั้งหมด 6อ่านเฟรม ซึ่งช่วยให้พื้นหลังอาณานิคมสีน้ำเงินสำหรับควบคุมปฏิกิริยาต่ำ ผลลัพธ์ที่ได้ด้วยการดีเอ็นเอแทรกตัวควบคุมอาจเป็นตัวแทนของผู้ที่ประสบความสำเร็จได้ผลิตภัณฑ์ PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคลนที่ประสบความสำเร็จของการแทรกเข้าไปในpGEM®-T หรือpGEM®-T
ง่ายเวกเตอร์ขัดจังหวะลำดับการเข้ารหัสของβ-galactosidase; โคลน recombinant สามารถระบุได้โดยการตรวจคัดกรองสีบนแผ่นตัวบ่งชี้ อย่างไรก็ตามลักษณะของผลิตภัณฑ์ PCR โคลนลงในเวกเตอร์อย่างมีนัยสำคัญสามารถส่งผลกระทบต่ออัตราส่วนของสีน้ำเงิน:. โคโลนีสีขาวที่ได้รับมักจะโคลนที่มีผลิตภัณฑ์PCR ผลิตโคโลนีสีขาว แต่อาณานิคมสีฟ้าเป็นผลมาจากเศษ PCR ที่มีการโคลนในกรอบlacZ ยีน ชิ้นส่วนดังกล่าวมักจะมีหลาย 3 ฐานคู่ยาว (รวมทั้ง 3'-A กระเช้า) และไม่ได้มี codons หยุดในกรอบ มีการรายงานของดีเอ็นเอถึง 2KB ที่ได้รับการโคลนในกรอบและได้มีการผลิตโคโลนีสีฟ้า แม้ว่าผลิตภัณฑ์ PCR ของคุณไม่ได้หลาย 3 ฐานยาวกระบวนการขยายสามารถแนะนำการกลายพันธุ์(การลบหรือการกลายพันธุ์จุด) ที่อาจส่งผลในอาณานิคมสีฟ้า. ควบคุมแทรกดีเอ็นเอมาพร้อมกับpGEM®-T และ T-pGEM®ง่าย Systems เป็นส่วน 542bp จากpGEM®-Luc เวกเตอร์ดีเอ็นเอ (Cat. # E1541) ลำดับนี้ได้รับการกลายพันธุ์จะมี codons หยุดหลายในทุกหกเฟรมอ่านซึ่งทำให้พื้นหลังที่ต่ำของโคโลนีสีฟ้าสำหรับปฏิกิริยาควบคุม ผลที่ได้รับกับการควบคุมแทรกดีเอ็นเอไม่อาจจะเป็นตัวแทนของผู้ที่ประสบความสำเร็จกับผลิตภัณฑ์ PCR ของคุณ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ประสบความสำเร็จการโคลนใส่เข้าไปใน pgem ® - T หรือ pgem ®เวกเตอร์ -- ง่ายไม่ขัดจังหวะนะครับ ลำดับ
บีตา - galactosidase ; โคลนยีนสามารถระบุได้โดยการบ่งชี้สีบนจาน อย่างไรก็ตาม ลักษณะของผลิตภัณฑ์โคลนเข้าดีเอ็นเอ
เวกเตอร์สามารถมีผลต่ออัตราส่วนของสีฟ้าขาว
อาณานิคมได้มักจะมีผลิตภัณฑ์ PCR ผลิตพันธุ์อาณานิคมอาณานิคม สีฟ้าขาว แต่ได้ผลจาก PCR ชิ้นส่วน
จะโคลนในกรอบที่มียีน lacz . ชิ้นส่วนดังกล่าวมักจะมีหลายฐาน ยาว 3 คู่ ( รวมทั้ง 3 ใหม่ -
เกินไป ) และไม่บรรจุในกรอบหยุดซิส . มีการรายงานของดีเอ็นเอขึ้น 2kb ที่
การโคลนและสร้างอาณานิคมในกรอบสีฟ้า แม้ว่าผลิตภัณฑ์ PCR ของคุณไม่ได้เป็นพหุคูณของ 3 ฐานยาว
กระบวนการขยายสามารถแนะนำการกลายพันธุ์ ( ลบหรือจุดกลายพันธุ์ ) ที่อาจส่งผลในอาณานิคมสีฟ้า
ควบคุมการแทรกดีเอ็นเอที่ให้มากับ pgem ® - T และ pgem ® - ระบบง่ายไม่เป็น 542bp fragment จาก
pgem ® - ลุค เวกเตอร์ ดีเอ็นเอ ( แมว # e1541 )ลำดับนี้ได้กลายพันธุ์มีซิสหยุดหลายในทั้งหมดหก
เฟรมอ่านซึ่งช่วยให้พื้นหลังน้อยของโคโลนีสีน้ำเงินสำหรับปฏิกิริยาที่ควบคุม ผลลัพธ์ที่ได้กับ
ควบคุมแทรกดีเอ็นเออาจจะไม่ใช่ตัวแทนของผู้ที่ประสบความสำเร็จกับผลิตภัณฑ์ PCR ของคุณ