2.1.1. Protein IsolationProtein was

2.1.1. Protein Isolation
Protein was extracted from the DDSP using a phenol/trichloracetic acid (Ph/TCA) extraction procedure, based on the methods (with some modifications) proposed by Gomez-Vidal, Tena, Lopez-Liorca, and Salinas (2008) for olive and P. dactylifera L. leaves, respectively. Ten grams of defatted DDSP was mixed with 30 ml of ice-cold acetone, vortex mixed and then centrifuged at 10,000 rpm for 10 min at 4 C (Beckman Avanti J26-XP centrifuge). The supernatant was decanted and discarded, with the residual pellet being washed twice with ice-cold acetone and allowed to dry at room temperature. After the pellet had dried, it was ground to a fine powder using a pestle and mortar, rinsed with 15% (w/v) TCA in acetone, vortex mixed and then centrifuged at 10,000 rpm for 10 min at 4 C. The rinsing with TCA/acetone and centrifugation was repeated three times. The pellet was then rinsed with cold 15% (w/v) TCA in water and centrifuged. The rinsing with cold TCA and centrifugation was repeated three times. The pellet was then rinsed with cold 80% (v/v) acetone followed by centrifugation, and this was also repeated three times. The pellet was then air dried.
2.1.2. Protein purification
To purify the protein, 2 g of the dry pellet was suspended in a mixture of 10 ml of Ph/Tris-buffer at pH 8.0, and 10 ml of dense SDS buffer (2%[w/v] SDS, 5%[w/v] sucrose, 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0, 5% [v/v] b-mercaptoethanol). The mixture was vortex mixed and the pellet was obtained by centrifugation at 10,000 rpm for 10 min at 4 C, using a Beckman Avanti J26-XP centrifuge fitted with a JA25.50 rotor (Beckman-Coulter, High Wycombe, UK). The pellet was re-suspended in Ph/Tris-buffer and dense SDS solution, and centrifuged again under the same conditions. The pellets from both centrifugations were mixed and precipitated with five volumes of cold 0.1 M ammonium acetate in methanol, refrigerated at 4 C overnight and then centrifuged at 10,000 rpm for 10 min at 4 C. The pellet from this centrifugation was then washed three times with cold methanol, plus 0.1 M ammonium acetate and centrifuged as above, followed by the same process with cold 80% (v/v) acetone. Half a gram of the dried pellet was then mixed with 5 ml of cold aqueous 24% (w/v) TCA, vortex mixed and left to precipitate on ice for 30 min, followed by centrifugation at 13,000 rpm for 15 min at 4 C. The pellet was washed with 2 ml of ice cold acetone, incubated for 15 min on ice and then centrifuged at 13,000 rpm for 15 min at 4 C. The final pellet or date seed protein concentrate (DSPC) was air-dried in an oven at 30 C overnight (16 h) and stored at 20 C, until required for further analysis.
2.1.3. Protein content of DSPC
The crude protein content of the extracted DSPC and DDSP was determined by measurement of the nitrogen content using the Kjeldahl method (Lynch, Barbano, & Fleming, 1998).
The percent yield of protein from the date palm seed was determined by calculating the protein recovered in the DSPC and comparing this to the maximum possible protein recovery from the DDSP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1.1. โปรตีนแยกโปรตีนถูกแยกจาก DDSP ที่ใช้ฟีนอ ล/trichloracetic กรด (Ph/TCA) แยกกระบวนการ ตามวิธีการ (มีปรับเปลี่ยนบางอย่าง) และเสนอ และโกเมซ-Vidal, Tena, Liorca นิเฟอร์โลเปซ ซาลินาส (2008) มะกอกและใบ P. dactylifera L. ตามลำดับ สกัดน้ำมัน DDSP สิบกรัมถูกผสมกับอะซิโตนฉ่ำ วนผสม และผลิตภัณฑ์ที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 C (Beckman งติ J26-XP เหวี่ยง) 30 มล. Supernatant การดีแคนติ้ง และ ทิ้ง มีเม็ดเหลือเป็นล้าง ด้วยอะซิโตนฉ่ำสอง และปล่อยให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง หลังจากที่มีแห้งเม็ด มันเป็นพื้นดินผงที่ใช้เป็นและสาก ล้าง ด้วย 15% (w/v) TCA ในอะซิโตน วนผสม และผลิตภัณฑ์ที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 c ล้าง ด้วย TCA/อะ ซีโตนและหมุนเหวี่ยงซ้ำสามครั้ง เม็ดจากนั้นล้าง ด้วยเย็น 15% (w/v) TCA ในน้ำ และผลิตภัณฑ์ ล้าง ด้วย TCA และหมุนเหวี่ยงซ้ำสามครั้ง เม็ดแล้วก็ล้าง ด้วยอะซิโตนเย็น 80% (v/v) ตาม ด้วยหมุนเหวี่ยง และนี้ยังซ้ำสามครั้ง เม็ดได้แล้วอากาศแห้ง2.1.2. โปรตีนบริสุทธิ์ให้บริสุทธิ์โปรตีน เม็ดแห้ง 2 กรัมถูกระงับใน 10 มล. Ph/ทริ บัฟเฟอร์ที่ pH 8.0 และ 10 ml ของบัฟเฟอร์ SDS หนาแน่น (2%[w/v] SDS, 5%[w/v] ซูโครส 0.1 M ทริสเรทติ้ง HCl, pH 8.0, b-mercaptoethanol 5% [v/v]) ส่วนผสมคือ ผสม vortex และเม็ดได้รับ โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 C ใช้เครื่องหมุนเหวี่ยง Beckman งติ J26-XP ที่ประกอบ ด้วยใบพัด JA25.50 (Beckman Coulter วิคคัมบ์สูง สหราชอาณาจักร) เม็ดที่ลอยอยู่ใน Ph/ทริ บัฟเฟอร์และแก้ไข SDS หนาแน่นอีกครั้ง และผลิตภัณฑ์อีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดจาก centrifugations ทั้งผสม และตกตะกอนกับห้าอะซิเตทแอมโมเนีย 0.1 M เย็นในเมทานอล ข่าวที่ 4 C และจากที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 c เม็ดจากนี้หมุนเหวี่ยงแล้วล้าง 3 ครั้ง ด้วยเมทานอลเย็น บวก 0.1 M แอมโมเนียอะซิเตท และผลิตภัณฑ์ดังกล่าวข้างต้น ตาม ด้วยกระบวนการเดียวกันกับเย็น 80% (v/v) อะซิโตน กรัมเป็นครึ่งหนึ่งของเม็ดแห้งแล้วถูกผสม ด้วย 5 ml ของสารละลายเย็น 24% (w/v) TCA วนผสม และทิ้งให้ตกตะกอนในน้ำแข็ง 30 นาที ตาม ด้วยหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาที 15 นาทีที่ 4 c เม็ดล้าง ด้วย 2 ml ของน้ำแข็งเย็นอะซิโตน 15 นาทีบนน้ำแข็งได้รับการกก และผลิตภัณฑ์ที่ 13,000 รอบต่อนาที 15 นาทีที่ 4 c สุดท้ายเม็ดหรือวันเมล็ดโปรตีนเข้มข้น (DSPC) เป็น air-dried ในเตาที่ 30 C ค้างคืน (16 ชั่วโมง) และเก็บไว้ที่ 20 C จนกว่าจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม2.1.3. โปรตีนเนื้อหาของ DSPCมีกำหนดเนื้อหาโปรตีนสกัด DSPC และ DDSP โดยวัดปริมาณไนโตรเจนที่ใช้วิธีเจลดาห์ลเมื่อต้องการ (Lynch, Barbano และเฟลมิ ง 1998)ผลผลิตที่เปอร์เซ็นต์ของโปรตีนจากเมล็ดปาล์มวันที่กำหนด โดยการคำนวณโปรตีนในการ DSPC และการเปรียบเทียบนี้เพื่อกู้คืนโปรตีนเป็นไปได้สูงสุดจาก DDSP กู้คืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1.1 โปรตีนแยก
โปรตีนสกัดจาก DDSP ใช้ฟีนอล / กรดไตรคลอโรอะซิติก (PH / TCA) ขั้นตอนการสกัดขึ้นอยู่กับวิธีการ (ที่มีการปรับเปลี่ยนบางคน) ที่เสนอโดย Gomez-วิดัล, Tena, โลเปซ Liorca และซาลินาส (2008) สำหรับมะกอก พี dactylifera ลิตรใบตามลำดับ สิบกรัมสกัด DDSP ผสมกับ 30 มล. ของอะซิโตนเย็น, น้ำวนผสมแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 C (centrifuge Beckman Avanti J26-XP) ใสถูก decanted และทิ้งกับเม็ดที่เหลือจะถูกล้างครั้งที่สองด้วยอะซิโตนเย็นและได้รับอนุญาตให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง หลังจากเม็ดแห้งมันก็พื้นดินให้เป็นผงละเอียดใช้สากและปูนล้างด้วย 15% (w / v) TCA ในอะซีโตนกระแสน้ำวนผสมแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสล้างด้วย TCA / อะซิโตนและการหมุนเหวี่ยงซ้ำสามครั้ง เม็ดได้รับการล้างแล้วกับความหนาวเย็น 15% (w / v) TCA ในน้ำและปั่น ล้างด้วย TCA หนาวเย็นและปั่นเหวี่ยงซ้ำสามครั้ง เม็ดได้รับการล้างแล้วกับความหนาวเย็น 80% (v / v) อะซีโตนตามด้วยการหมุนเหวี่ยงและนี่ก็เป็นซ้ำสามครั้ง เม็ดแล้วอากาศแห้ง.
2.1.2 โปรตีนบริสุทธิ์
ในการชำระล้างโปรตีน 2 กรัมของเม็ดแห้งถูกระงับในส่วนผสมของ 10 มล. ของ ph / ทริสบัฟเฟอร์ที่ pH 8.0 และ 10 มล. ของบัฟเฟอร์ SDS หนาแน่น (2% [w / v] SDS, 5% [w / v] ซูโครส 0.1 M Tris-HCl พีเอช 8.0, 5% [v / V] B-mercaptoethanol) ส่วนผสมที่ถูกกระแสน้ำวนผสมและอัดเม็ดที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 C โดยใช้เครื่องปั่นแยก Beckman Avanti J26-XP พอดีกับโรเตอร์ JA25.50 (Beckman-โคลเตอร์สูงคัมบ์สหราชอาณาจักร) เม็ดเป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน Ph / ทริสบัฟเฟอร์และวิธีการแก้ปัญหา SDS หนาแน่นและปั่นอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดจากทั้ง centrifugations ถูกผสมและตกตะกอนกับห้าเล่มเย็นอะซิเตท 0.1 M แอมโมเนียมเมทานอลในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืนแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสจากการหมุนเหวี่ยงเม็ดนี้ถูกล้างแล้วสามครั้งด้วย เมทานอลเย็นบวก 0.1 M แอมโมเนียมอะซิเตทและปั่นข้างต้นตามด้วยกระบวนการเดียวกันกับความหนาวเย็น 80% (v / v) อะซีโตน ครึ่งกรัมเม็ดแห้งผสมกับ 5 มล. เย็นน้ำ 24% (w / v) TCA, Vortex ผสมและจากซ้ายไปตกตะกอนบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เม็ดถูกล้างด้วย 2 มิลลิลิตรของน้ำแข็งอะซีโตนเย็นบ่มเป็นเวลา 15 นาทีบนน้ำแข็งแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสเม็ดสุดท้ายหรือวันโปรตีนเมล็ดสมาธิ (DSPC) คืออากาศแห้งในเตาอบที่ 30 C ในชั่วข้ามคืน (16 ชั่วโมง) และเก็บไว้ที่ 20 องศาเซลเซียสจนจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป.
2.1.3 ปริมาณโปรตีน DSPC
เนื้อหาโปรตีนของ DSPC สกัดและ DDSP ถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณไนโตรเจนโดยใช้ Kjeldahl วิธี (ลินช์ Barbano และเฟลมมิ่ง 1998).
อัตราผลตอบแทนร้อยละของโปรตีนจากเมล็ดปาล์มวันที่ถูกกำหนดโดย คำนวณโปรตีนกู้คืนได้ใน DSPC และเปรียบเทียบนี้การฟื้นตัวของโปรตีนที่เป็นไปได้สูงสุดจาก DDSP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1.1 . การแยกโปรตีนโปรตีนสกัดจาก ddsp ใช้ฟีนอล / trichloracetic กรด ( pH / TCA ) ขั้นตอนการแยก ขึ้นอยู่กับวิธีการ ( ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ) ที่เสนอโดย โกเมซ วิดาล เทน่า โลเปซ , liorca , ซาลินาส ( 2008 ) สำหรับมะกอกและหน้า dactylifera L . ใบ ตามลำดับ 10 กรัม สามารถผสมกับ ddsp 30 ml ของอะซิโตนเย็นน้ำแข็ง vortex ผสมแล้วที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีระดับ 10 นาทีที่ 4 C ( แบคแมนลุกขึ้น j26-xp centrifuge ) ส่วนนำคือรินทิ้งด้วยการล้างสองครั้งเหลือเม็ดน้ำแข็งด้วยอะซิโตนเย็นและอนุญาตให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง หลังจากที่เม็ดแห้ง มันบดให้ละเอียดเป็นผงใช้สากและครก ล้างด้วย 15 % ( w / v ) TCA ) , Vortex ผสมแล้วที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีระดับ 10 นาทีที่ 4 ค . ทําความสะอาดกับ TCA / อะซิโตนและปั่นกันสามครั้ง เม็ดแล้วล้างเย็น 15 % ( w / v ) TCA ในน้ำและไฟฟ้า . การล้างด้วย TCA เย็นและปั่นกันสามครั้ง เม็ดแล้วล้างเย็น 80 % ( v / v ) ) ตามด้วย ดังนี้ และยังซ้ำ 3 ครั้ง เม็ดแล้ว อากาศแห้ง2.1.2 . บริสุทธิ์โปรตีนบริสุทธิ์โปรตีน 2 กรัมเม็ดแห้งแขวนอยู่ในส่วนผสมของ 10 มิลลิลิตร pH / ทริสบัฟเฟอร์ ที่ pH 8.0 และ 10 มิลลิลิตร หนาแน่นเฉพาะบัฟเฟอร์ ( 2% [ w / v ] SDS , 5% [ w / v ] ซูโครส 0.1 M HCl ซึ่ง pH 8.0 , 5% [ 5 / 5 ] b-mercaptoethanol ) ส่วนผสมจะถูกน้ำวนผสมเม็ดได้โดยการเหวี่ยงแยกที่ 10 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ใช้แบคแมนลุกขึ้น j26-xp ซึ่งพอดีกับ ja25.50 ใบพัด ( Beckman Coulter , High Wycombe สหราชอาณาจักร ) เม็ดเป็นอีกครั้งที่แขวนลอยใน pH / ทริสบัฟเฟอร์และหนาแน่นเฉพาะสารละลายไฟฟ้าอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดจากทั้ง centrifugations ถูกผสมและตกตะกอนกับห้าเล่ม 0.1 โมลาร์เตตในเย็นแอมโมเนีย เมทานอล ตู้เย็นที่ 4 C ข้ามคืนแล้ว ระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 C . เม็ดจากปั่นก็ซักสามครั้งด้วยความหนาว เมทานอล บวก 0.1 M แอมโมเนียมอะซิเตท และไฟฟ้าตามข้างบน ตามด้วย กระบวนการเดียวกันกับเย็น 80 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) อะซิโตน ครึ่งกรัมเม็ดแห้งแล้วผสมกับน้ำ 5 มิลลิลิตร เย็น 24 % ( w / v ) TCA vortex ผสมและทิ้งให้ตกตะกอนแข็ง 30 นาที ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 13 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 C . เม็ดล้างด้วยอะซิโตนเย็นน้ำแข็ง 2 มิลลิลิตรบ่ม 15 นาทีที่ 13 , 000 รอบต่อนาทีระดับน้ำแข็งแล้ว 15 นาทีที่ 4 C . เม็ดสุดท้าย หรือโปรตีนเข้มข้นเมล็ดวันที่ ( dspc ) คืออากาศแห้งในเตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน ( 16 ชั่วโมง ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียส จนกว่าที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ต่อไปทาง . ปริมาณโปรตีน dspcมีปริมาณโปรตีนหยาบของ dspc ddsp สกัดและถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณไนโตรเจนโดยวิธีเจลดาห์ล ( ลินช์ barbano แอนด์เฟลมมิ่ง , 1998 )เปอร์เซ็นต์ของผลผลิตโปรตีนจากเมล็ดปาล์มวันที่ถูกกำหนดโดยการคำนวณโปรตีนได้ใน dspc เปรียบเทียบนี้เป็นไปได้สูงสุดโปรตีนการกู้คืนจาก ddsp .