TA CloningTA Cloning exploits the t

TA Cloning
TA Cloning exploits the terminal transferase activity of some DNA polymerases. In TA Cloning Taq polymerase adds a 3'-A overhang to each end of the PCR product. TA Cloning makes it possible to clone the PCR product into a cloning vector with 3'-T overhangs. During TA Cloning the PCR products with dA overhang are mixed in high proportion with the vector. The complementary overhangs of T vector and PCR product are then ligated using T4 DNA ligase.
"TA cloning" is a popular method of cloning without the use of restriction enzymes; instead, PCR products are amplified with only Taq DNA polymerase and other polymerases. These polymerases lack 5'-3' proofreading activity and add an adenosine triphosphate residue to the 3' ends of the double-stranded PCR products. Such PCR amplified products can thus be cloned in a linearized vector that has complementary 3' thymidine triphosphate overhangs.
A recently described Quick Assemble PCR cloning protocol has been used to improve TA cloning. The new 2-day PCR-based method can be used to generate both circularized and linear final assembled products. The protocol circumvents the use of DNA ligase. The PCR-based protocol uses a TA cloning vector as the template for the linear vector backbone demonstrating the ability to improve this technique.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

TA โคลนTA Cloning นำกิจกรรม transferase เทอร์มินัลของบาง polymerases ดีเอ็นเอ ใน TA Cloning Taq พอลิเมอเรสเพิ่มส่วน 3 A แต่ละจุดสิ้นสุดของผลิตภัณฑ์ PCR TA โคลนทำให้สามารถโคลนผลิตภัณฑ์ PCR เป็นเวกเตอร์โคลนกับ 3'-T overhangs ผลิตภัณฑ์ที่ มีส่วนดาผสมในสัดส่วนที่สูงมีเวคเตอร์ระหว่าง TA Cloning การ PCR Overhangs เสริมเวกเตอร์ T และผลิตภัณฑ์ PCR มีแล้วควบใช้ T4 DNA ligase"TA โคลน" จะนิยมวิธีการโคลนโดยใช้เอนไซม์จำกัด แทน ผลิตภัณฑ์ PCR จะขยายเฉพาะ Taq DNA พอลิเมอเรสและ polymerases อื่น ๆ Polymerases เหล่านี้ขาด 5' - 3' กิจกรรมพิสูจน์อักษร และเพิ่มสารฟอสเฟตปลาย 3' ของผลิตภัณฑ์ PCR สองครั้งที่ควั่น นอกจากนี้ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ขยายดังกล่าวจึงสามารถลอกในเวกเตอร์ linearized ที่มีเสริม 3' overhangs triphosphate thymidineเพิ่งอธิบายด่วนประกอบ PCR โคลนโพรโทคอลมีการใช้การปรับปรุง TA โคลน วิธีการใช้ PCR 2 วันใหม่สามารถใช้ในการสร้างผลิตภัณฑ์ในการประกอบขั้นสุดท้ายที่ทั้ง circularized และเส้นตรง โพรโทคอล circumvents การใช้งานของ DNA ligase โพรโทคอลใช้ PCR ใช้ TA โคลนเวกเตอร์เป็นแม่แบบสำหรับกระดูกสันหลังเวกเตอร์เชิงเส้นแสดงให้เห็นถึงความสามารถในการปรับปรุงเทคนิคนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

TA โคลน
TA โคลนใช้ประโยชน์จากกิจกรรม transferase ขั้วของบางส่วนดีเอ็นเอ polymerases ใน TA โคลน Taq โพลิเมอร์เพิ่ม 3'-A ที่แขวนอยู่ที่ส่วนท้ายของแต่ละผลิตภัณฑ์ PCR TA โคลนทำให้มันเป็นไปได้ในการโคลนผลิตภัณฑ์ PCR เป็นพาหะด้วยกระเช้า 3'-T ในช่วง TA โคลนผลิตภัณฑ์ PCR กับ dA แขวนจะมีการผสมในสัดส่วนที่สูงกับเวกเตอร์ กระเช้าเสริมของ T เวกเตอร์และผลิตภัณฑ์ PCR จะผูกแล้วใช้ลิกาเซ T4 ดีเอ็นเอ.
"TA โคลน" เป็นวิธีที่นิยมของการโคลนโดยไม่ต้องใช้เอนไซม์ข้อ จำกัด ; แทนผลิตภัณฑ์ PCR จะขยายมีเพียง Taq DNA Polymerase และ polymerases อื่น ๆ polymerases เหล่านี้ขาด 5'-3 'กิจกรรมพิสูจน์อักษรและเพิ่มสารตกค้าง adenosine triphosphate ไป 3' ปลายของผลิตภัณฑ์เกลียวคู่ PCR ผลิตภัณฑ์ PCR ขยายดังกล่าวจึงสามารถโคลนในเวกเตอร์เชิงเส้นที่มีการเสริม 3 'ยื่น thymidine triphosphate.
อธิบายเมื่อเร็ว ๆ นี้อย่างรวดเร็วประกอบ PCR โปรโตคอลโคลนได้ถูกนำมาใช้ในการปรับปรุง TA โคลน 2 วันวิธีการใหม่ PCR-based สามารถใช้ในการสร้างผลิตภัณฑ์ทั้งสองประกอบขั้นสุดท้าย circularized และเชิงเส้น โปรโตคอลหลีกเลี่ยงการใช้ลิกาเซดีเอ็นเอ โปรโตคอล PCR-based ใช้โคลนเวกเตอร์ TA เป็นแม่แบบสำหรับกระดูกสันหลังเวกเตอร์เชิงเส้นแสดงให้เห็นถึงความสามารถในการปรับปรุงเทคนิคนี้