2.3. TIA-1 and TIAR interact with t

2.3. TIA-1 and TIAR interact with the first stem-loop of viral RNA 5′-UTR

EV71 5′-UTR contains cloverleaf and IRES structure.


Fig. 2F illustrates the potential secondary structure of EV71 5′-UTR as predicted by M-FOLD [7]. In order to determine the binding sites of TIA-1 and TIAR, we generated two sequences recognized by endonuclease KpnI (105) and PstI (568) in complementary DNA of viral 5′-UTR from 5′-end and used them for mapping analysis. After transcribing DNA to biotin-labeled truncated RNAs (nt1-105 and nt1-568) using T7 RNA polymerase, we performed aforementioned RNA pull-down assay to examine the specific binding regions for TIA1 or TIAR and showed that these two proteins bound both truncated viral RNA fragments (Fig. 2G), suggesting that both TIA-1 and TIAR interact with nt 1–105 (stem-loop I). As a control for nonspecific binding of these two proteins to other sites of 5′-UTR and polyclonal sites of empty T vector, we also performed RNA pull-down assay using biotin-labeled 5′-UTR (105–745) and biotin-labeled RNA polyclonal sites of empty T-vector. As a result, we failed to detect interaction of these two proteins with viral RNA nt105-745 and empty T-vector RNA (Fig. 2H), suggesting that RNA nt1-105 at the 5′-UTR specifically mediated interaction with TIA-1 and TIAR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. เตี้ย-1 และ TIAR ติดต่อกับก้านวงแรกของอาร์เอ็นเอไวรัส 5′-UTREV71 5′-UTR ประกอบด้วย cloverleaf และโครงสร้าง IRES Fig. 2F แสดงโครงสร้างรองเป็นไปได้ของ 5′ EV71-UTR เป็นคาดการณ์โดย M-พับ [7] เพื่อกำหนดว่าไซต์ผูกเตี้ย-1 และ TIAR เราสร้างสองลำดับรู้จัก endonuclease KpnI (105) และ PstI (568) ในดีเอ็นเอฟรีของ 5′ UTR ไวรัสจาก 5′-สิ้นสุด และใช้สำหรับวิเคราะห์การแมป หลังจากวรรณยุกต์ดีเอ็นเอจะชื่อไบโอตินตัด RNAs (nt1 105 และ nt1 568) ใช้ T7 อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส เราทำการทดสอบดึงลงอาร์เอ็นเอดังกล่าวตรวจสอบภูมิภาครวมเฉพาะสำหรับ TIA1 หรือ TIAR และแสดงให้เห็นว่า โปรตีนเหล่านี้สองผูกทั้งตัดชิ้นส่วนอาร์เอ็นเอไวรัส (Fig. 2G), แนะนำว่า เตี้ย-1 และ TIAR โต้ตอบกับ nt 1-105 (ก้านวงฉัน) เป็นตัวควบคุมสำหรับผูกเจาะจงของโปรตีนเหล่านี้สอง 5′ UTR ไซต์อื่นและไซต์ polyclonal ของเวกเตอร์ T ว่าง เรายังดำเนินการทดสอบดึงลงอาร์เอ็นเอโดยใช้ชื่อไบโอติน 5′-UTR (105-745) และไบโอตินชื่ออาร์เอ็นเอ polyclonal ไซต์ของเวกเตอร์ T ว่าง ดัง เราไม่สามารถตรวจหาปฏิสัมพันธ์ของโปรตีนเหล่านี้สองกับไวรัสอาร์เอ็นเอ nt105 745 และว่างเปล่า T-เวกเตอร์อาร์เอ็นเอ (Fig. 2 H), แนะนำที่ 105 nt1 อาร์เอ็นเอที่ 5′ UTR mediated โต้ตอบกับเตี้ย-1 และ TIAR โดยเฉพาะ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 TIA-1 และ TIAR โต้ตอบกับต้นกำเนิดวงแรกของอาร์เอ็นเอไวรัส 5'-UTR EV71 5'-UTR มีโครงสร้างโคลเวอร์ลีและ IRES. รูป 2F แสดงให้เห็นถึงโครงสร้างทุติยภูมิที่มีศักยภาพของ EV71 5'-UTR เป็นที่คาดการณ์โดย M-FOLD [7] เพื่อตรวจสอบเว็บไซต์ที่มีผลผูกพันของ TIA-1 และ TIAR เราสร้างลำดับสองได้รับการยอมรับโดย endonuclease KpnI (105) และ PstI (568) ในดีเอ็นเอของไวรัสที่สมบูรณ์ของ 5'-UTR จาก 5'-end และใช้พวกเขาสำหรับการวิเคราะห์การทำแผนที่ . หลังจากที่ถ่ายทอดดีเอ็นเอไบโอตินที่มีข้อความที่ถูกตัดทอน RNAs (nt1-105 และ nt1-568) โดยใช้ T7 rna โพลิเมอร์เราดำเนินการดังกล่าวข้างต้น RNA ทดสอบดึงลงไปตรวจสอบพื้นที่ที่มีผลผูกพันเฉพาะสำหรับ TIA1 หรือ TIAR และแสดงให้เห็นว่าทั้งสองโปรตีนผูกพันทั้งที่ถูกตัดทอน ชิ้นส่วนอาร์เอ็นเอไวรัส (รูป. 2G) ชี้ให้เห็นว่าทั้งสอง TIA-1 และ TIAR โต้ตอบกับเอ็นที 1-105 (ต้นกำเนิดวง I) ในฐานะที่เป็นสำหรับการควบคุมที่มีผลผูกพันของทั้งสองโปรตีนเชิญชมไปยังเว็บไซต์อื่น ๆ ของ 5'-UTR และเว็บไซต์ของโพลีเวกเตอร์ T ที่ว่างเปล่าที่เรายังดำเนินการทดสอบ RNA ดึงลงโดยใช้ไบโอตินที่มีข้อความ 5'-UTR (105-745) และ biotin- เว็บไซต์ที่มีข้อความโพลีอาร์เอ็นเอของว่าง T-เวกเตอร์ เป็นผลให้เราล้มเหลวในการตรวจสอบการทำงานร่วมกันของทั้งสองโปรตีนที่มีอาร์เอ็นเอไวรัส nt105-745 อาร์เอ็นเอและว่างเปล่า T-เวกเตอร์ (รูป. 2H) บอกว่าอาร์เอ็นเอ nt1-105 ที่ปฏิสัมพันธ์ 5'-UTR ไกล่เกลี่ยโดยเฉพาะกับ TIA-1 และ TIAR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 tia-1 เทียร์และโต้ตอบกับวงต้นแรกของไวรัส RNA 5 ’ - UTR

ev71 5 ’ - UTR ประกอบด้วยโคลฟเวอร์ ลีฟ และ IRES โครงสร้าง


รูปที่ห้อง 2F แสดงศักยภาพโครงสร้างทุติยภูมิของ ev71 5 ’ - UTR ที่คาดการณ์ไว้ โดย m-fold [ 7 ] ในการตรวจสอบเว็บไซต์การจับ tia-1 เทียร์และ ,เราสร้างสองลำดับรู้จักเอนโดนิวคลีเอส kpni ( 105 ) และโคลน ( 568 ) ในดีเอ็นเอของไวรัสจาก 5 ’ - UTR จาก 5 ’ - สิ้นสุดและใช้พวกเขาสำหรับการวิเคราะห์แผนที่ หลังจากศึกษาดีเอ็นเอ biotin ป้ายตัด RNAs ( และใช้ nt1-105 nt1-568 ) * * 3 RNA polymeraseเราดำเนินการดังกล่าว โดยศึกษาเฉพาะอาร์เอ็นเอทั้งการภูมิภาคสำหรับ tia1 หรือเทียร์และพบว่าทั้งสองโปรตีนผูกพันทั้งตัดทอนไวรัส RNA แตก ( ภาพที่ 2G ) แนะนำว่า ทั้ง tia-1 เทียร์และโต้ตอบกับ NT 1 – 105 ( ก้านห่วงฉัน ) ในฐานะที่เป็นสำหรับการควบคุมการติดเชื้อผูกพันของทั้งสองโปรตีนไปยังไซต์อื่น 5 ’ - UTR ของใช้เว็บไซต์และแม่แบบเวกเตอร์เสื้อยืดที่ว่างเปล่านอกจากนี้เรายังดำเนินการโดยการใช้ยีนทั้งไบโอติน ป้าย 5 ’ - UTR ( 105 ( 745 ) และไบโอตินติดป้ายอาร์เอ็นเอโพลีเว็บไซต์ของ t-vector ที่ว่างเปล่า เป็นผลให้เราล้มเหลวในการตรวจสอบการปฏิสัมพันธ์ของทั้งสองโปรตีน rna ไวรัส RNA nt105-745 และ t-vector ว่างเปล่า ( ภาพที่ 2H ) แนะนำว่า nt1-105 RNA ที่ 5 ’ - UTR โดยเฉพาะ ) และปฏิสัมพันธ์กับ tia-1 เทียร์ .