2.6. Determination of defense-relat

2.6. Determination of defense-related enzymes in pear fruit
For enzyme assays, pear fruit were wounded, and 15 lL of
1.5 g/L chitosan or oligochitosan was added to each wound as
described above, and fruits inoculated with sterile water in the
wound served as control. After treatment, the fruits were stored
at 25 C. Flesh samples surrounding the wounds of 10 fruits were
taken at 0, 1, 2 and 3 days. Each treatment contained three replicates
and the experiment was repeated twice.
PPO and POD were extracted and assayed by the method of
Meng, Tian, Li, and Liu (2008), with some modifications. Tissue
samples (10 g) of each treatment were homogenized with 25 mL
of 100 mmol/L sodium phosphate buffer (pH 6.4) containing 0.5 g
of polyvinyl polypyrrolidone (PVPP) and ground at 4 C. The
homogenate was centrifuged at 15,000g for 30 min at 4 C and
the supernatant was used for the enzyme assay. Specific activity
of enzymes was expressed as U mg1 protein, where one unit
was defined as DOD398 min1 mg1 protein for PPO and
0.01DOD460 min1 mg1 protein for POD.
For CHI and b-1,3-glucanase activity assay, fresh sample of pear
fruit (10 g) was mixed with 20 mL of sodium acetate buffer
(50 mmol/L, pH 5.0) and ground thoroughly at 4 C. The homogenate
was centrifuged as above. Activity of b-1,3-glucanase was
determined, with laminarin as substrate, following the method described
by Yao and Tian (2005). Chitinase was measured according
to the method of Wirth and Wolf (1990) with chitin as substrate.
Reducing sugars as reaction production were measured spectrophotometrically
at 550 or 500 nm using a UV-160 Spectrophotometer
(Shimadzu, Japan), respectively. Specific activity of enzymes
was expressed as U mg1 protein, where one unit was defined as
1 lmol h1 mg1 protein for CHI and b-1,3-glucanase.
Protein content was determined according to Bradford (1976)
with bovine serum albumin (Sigma Chemicals Co., St. Louis, USA)
as standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การกำหนดของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันในสาลี่สำหรับเอนไซม์ assays สาลี่ได้จะได้รับบาดเจ็บ และ 15 ของไคโตซาน 1.5 g/L หรือ oligochitosan ที่เพิ่มแต่ละแผลเป็นข้าง และผลไม้ inoculated น้ำฆ่าเชื้อในตัวแผลที่ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุม หลังการรักษา ผลไม้ถูกเก็บไว้ที่ 25 C. ตัวอย่างเนื้อรอบแผล 10 ผลไม้ได้นำมาในวันที่ 0, 1, 2 และ 3 ทรีตเมนท์อยู่เหมือนกับสามและทดลองได้ซ้ำสองPPO และ POD ได้สกัด และ assayed โดยวิธีการเม็งราย เทียน Li และหลิว (2008), มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เนื้อเยื่อตัวอย่าง (10 กรัม) ของแต่ละทรีทเม้นต์ได้ homogenized เป็นกลุ่มกับ 25 mL100 mmol/L โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.4) ประกอบด้วย 0.5 gโพลีไวนิล polypyrrolidone (PVPP) และดินที่ 4 C.homogenate ถูก centrifuged ที่ 15000 g ใน 30 นาทีที่ 4 C และsupernatant ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์เอนไซม์ กิจกรรมเฉพาะเอนไซม์ถูกแสดงเป็น U 1 มิลลิกรัมโปรตีน ซึ่งหน่วยกำหนดเป็น DOD398 นาที 1 mg 1 โปรตีนสำหรับ PPO และ0.01DOD460 โปรตีน 1 มิลลิกรัมต่อ 1 นาทีสำหรับ PODชีและวิเคราะห์กิจกรรม b-1,3-คัด ลูกแพร์อย่างสดผลไม้ (10 g) ถูกผสมกับ 20 mL บัฟเฟอร์ acetate โซเดียม(50 mmol/L ค่า pH 5.0) และติดดินอย่างที่ค. 4 Homogenateถูก centrifuged ดังกล่าว มีกิจกรรมของ b-1,3-คัดกำหนด มี laminarin เป็นพื้นผิว วิธีการอธิบายต่อไปนี้โดยยาวและเทียน (2005) Chitinase ถูกวัดตามวิธีของ Wirth และหมาป่า (1990) กับไคทินเป็นพื้นผิวมีวัดน้ำตาลลดลงเป็นปฏิกิริยาผลิต spectrophotometricallyที่ 500 หรือ 550 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง UV-160(Shimadzu ญี่ปุ่น), ตามลำดับ กิจกรรมของเอนไซม์ถูกแสดงเป็นโปรตีนมิลลิกรัม 1 U ที่หน่วยหนึ่งถูกกำหนดเป็น1 lmol มิลลิกรัม 1 h 1 โปรตีนชีและบี-1,3-คัดโปรตีนถูกกำหนดตามแบรดฟอร์ด (1976)มีวัว serum albumin (ซิกเคมี จำกัด St. Louis สหรัฐอเมริกา)เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ความมุ่งมั่นของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันในผลไม้ลูกแพร์
สำหรับสมรรถนะของเอนไซม์ผลไม้ลูกแพร์ได้รับบาดเจ็บและ 15 lL ของ
1.5 กรัม / ลิตรไคโตซานหรือ oligochitosan ถูกบันทึกอยู่ในแผลแต่ละ
อธิบายไว้ข้างต้นและผลไม้เชื้อด้วยน้ำหมันใน
แผลทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม . หลังจากการรักษาผลไม้ถูกเก็บไว้
ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส ตัวอย่างเนื้อรอบ ๆ บาดแผลของ 10 ผลไม้ที่ถูก
นำมาที่ 0, 1, 2 และ 3 วัน การรักษาแต่ละคนมีสามซ้ำ
และการทดสอบซ้ำเป็นครั้งที่สอง.
PPO และ POD ถูกสกัดและวิเคราะห์จากวิธีการของ
เม้งเทียนหลี่และหลิว (2008) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เนื้อเยื่อ
ตัวอย่าง (10 กรัม) ของการรักษาแต่ละหดหาย 25 มิลลิลิตร
100 mmol / L โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.4) ที่มี 0.5 กรัม
ของ polypyrrolidone โพลีไวนิล (PVPP) และพื้นดินที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส
homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 15,000g เวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและ
สารละลายที่ใช้สำหรับการทดสอบการทำงานของเอนไซม์ กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง
ของเอนไซม์ถูกแสดงเป็น U mg 1 โปรตีนที่หน่วยหนึ่ง
ได้ถูกกำหนดให้เป็น DOD398 นาที? 1 มิลลิกรัมต่อ 1 โปรตีนสำหรับ PPO และ
0.01DOD460 นาที? 1 มิลลิกรัมต่อ 1 โปรตีนสำหรับ POD.
สำหรับ CHI และ B-1,3 ทดสอบกิจกรรม -glucanase ตัวอย่างของลูกแพร์สด
ผลไม้ (10 กรัม) ผสมกับ 20 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม
(50 mmol / L ค่า pH 5.0) และพื้นดินได้อย่างทั่วถึงที่ 4 องศาเซลเซียส homogenate
ถูกปั่นข้างต้น กิจกรรมของ B-1,3-glucanase ถูก
กำหนดด้วย laminarin เป็นสารตั้งต้นตามวิธีการที่อธิบาย
โดยเย้าและท่าเตียน (2005) ไคติเนสวัดตาม
วิธีการของเวิร์ ธ และหมาป่า (1990) กับไคตินเป็นสารตั้งต้น.
ลดการผลิตน้ำตาลปฏิกิริยาถูกวัด spectrophotometrically
ที่ 550 หรือ 500 นาโนเมตรโดยใช้ Spectrophotometer UV-160
(Shimadzu, ญี่ปุ่น) ตามลำดับ กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของเอนไซม์
ถูกแสดงเป็น U mg 1 โปรตีนที่หน่วยหนึ่งได้ถูกกำหนดให้เป็น
1 lmol h? 1 มิลลิกรัมต่อ 1 โปรตีนสำหรับ CHI และ B-1,3-glucanase.
ปริมาณโปรตีนที่ถูกกำหนดขึ้นมาตาม Bradford (1976)
ด้วย ซีรั่มอัลบูมิวัว (Sigma Chemicals Co. , เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา)
เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การวิเคราะห์การป้องกันที่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์ในผลไม้ลูกแพร์ลูกแพร์
สำหรับตรวจเอนไซม์ผลไม้ , ได้รับบาดเจ็บ , และ 15 จะ
1.5 กรัม / ลิตร ไคโตซาน หรือ oligochitosan ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละบาดแผลเป็น
ที่อธิบายไว้ข้างต้นและผลไม้ที่ปลูกด้วยน้ำในแผลปลอดเชื้อ
ทำหน้าที่ควบคุม หลังการรักษา ผลไม้ที่ถูกเก็บไว้
ที่ 25  C ตัวอย่างเนื้อรอบแผล 10 ผลไม้
ถ่ายที่ 0 , 12 และ 3 วัน การรักษาแต่ละครั้งมี 3 ซ้ำ และทำการทดลองซ้ำ 2 ครั้ง
.
PPO และฝักถูกสกัดและปริมาณโดยวิธี
เมิง เถียนลี่ และ หลิว ( 2008 ) , มีการปรับเปลี่ยน ตัวอย่างเนื้อเยื่อ
( 10 กรัม ) ของการรักษาแต่ละครั้งเป็นโฮโมกับ 25 ml
100 mmol / L โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.4 ) ที่มี 0.5 g
ของพอลิไวนิล polypyrrolidone ( pvpp ) และพื้นที่ 4  C
อนคือระดับที่ 15000g สำหรับ 30 นาทีที่ 4  C
น่านใช้เอนไซม์ ( . . . กิจกรรมจำเพาะของเอนไซม์ถูกแสดงออก
u  1 มิลลิกรัมโปรตีน ที่หน่วยหนึ่งถูกกำหนดเป็น dod398
มิน  1 มิลลิกรัม  1 โปรตีนสำหรับ PPO และ
0.01dod460 มิน  1 มิลลิกรัมโปรตีน  1 ฝัก
สำหรับไคและ b-1,3-glucanase กิจกรรมการทดสอบตัวอย่างสดของลูกแพร์
ผลไม้ ( 10 กรัม ) ผสมกับ 20 ml ของโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์
( 50 มิลลิโมล / ลิตร pH 5.0 ) และบดอย่างละเอียดที่ 4  C
เป็นปริมาณไฟฟ้าตามข้างต้น กิจกรรมของ b-1,3-glucanase คือ
มุ่งมั่นกับลามินารินเป็นวัตถุดิบ ตามวิธีที่อธิบาย
และเถียนเหยา ( 2005 ) ( วัดจาก
วิธีการเวิร์ท และหมาป่า ( 2533 ) กับไค
เป็นสับสเตรทลดน้ำตาลที่ผลิตได้นี้
ปฏิกิริยาที่ 550 หรือ 500 nm ใช้ uv-160 Spectrophotometer
( Shimadzu ญี่ปุ่น ) ตามลำดับ กิจกรรมจำเพาะของเอนไซม์จะแสดงเป็น U
 1 มิลลิกรัมโปรตีน ที่หน่วยหนึ่งถูกกำหนด lmol
1 H  1 มิลลิกรัม  1 โปรตีนไคและ b-1,3-glucanase .
โปรตีนถูกกำหนดตาม ( 1976 )
แบรดฟอร์ดกับอัลบูมิน ( Sigma Chemicals Co . , เซนต์ หลุยส์ , USA )
เป็นมาตรฐาน