- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2.5. HMF assayThe analysis of HMF i
2.5. HMF assay
The analysis of HMF in undigested breakfast cereals was based
on the method ofRufián-Henares, Guerra-Hernández, and GarcíaJ.A. Rufián-Henares, C. Delgado-Andrade / Food Research International 42 (2009) 394–400 395
Villanova (2001)with slight modifications (Rufián-Henares, Delgado-Andrade, & Morales, 2006b). Ground sample (1.000 g) was
suspended in 7 ml of deionized water in a 10 ml centrifuge tube
and the tube was shaken vigorously for 1 min. The resulting mixture was centrifuged at 4500gfor 10 min at 4C. The supernatant
was collected on a 10 ml volumetric flask and another two extractions were performed by adding 2 ml of deionized water. The
supernatants were mixed and clarified with 0.250 ml each of Carrez I (potassium ferrocyanide, 15% w/v) and Carrez II (zinc acetate
30% w/v) solutions. After a final centrifugation, the volume was
completed up to 10 ml with deionized water. Then 2 ml were filtered (0.45lm) to analyse the HMF content. The same procedure
was used for measuring HMF in the insoluble fraction after digestion whereas the amount of soluble HMF was performed directly
with only a filtration step of the aqueous fraction.
The HPLC system was similar to that used for furosine analysis.
The mobile phase was made up of a mixture of acetonitrile in
water (5% v/v) delivered at the flow rate of 1 ml/min under isocratic conditions through a C18analytical column (Novapack C18,
2504.6 mm, 4lm particle size, Waters, MA, USA) termostatized
at 32C. The UV detector was set at 284 nm and 20lL were injected. The analysis was performed in duplicate and HMF was
quantified by the external standard method within the range
0.01–50.00 mg/l.
2.6. Antioxidant activity assays
All the antioxidant methods assayed were performed as stated
previously (Rufián-Henares & Morales, 2007b). The antioxidant
activity was measured from the aqueous extract obtained for the
HMF analysis (sample named raw cereal), before adding Carrez I
and II, and from the soluble and non-soluble fractions after the
in vitro digestion.
2.6.1. DPPH method
A 500ll aliquot of sample or trolox standard was added to 1 ml
of DPPH (74 mg/l in methanol). A daily-prepared solution of DPPH
gave a final absorption at 520 nm of 1.8 AU. Mixture was shaken
for 1 h, and then absorption was measured at 520 nm. Temperature in the measurement chamber was set at 30C. Aqueous solutions of trolox at various concentrations were used for calibration
(0.15–1.15 mM). The results were expressed both as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.2. ABTS method
ABTS
+
was produced by reacting 7 mM ABTS stock solution
with 2.45 mM potassium persulphate and allowing the mixture
to stand in the dark at room temperature during 12–16 h before
use. The ABTS
+
working solution (stable for 2 days) was diluted
with 5 mM phosphate buffered saline (pH 7.4) to an absorbance
of 0.70 ± 0.02 at 730 nm. After addition of 100lL of sample or trolox standard to 1 ml of diluted ABTS
+
solution, absorbance reading
was taken at 20 min. using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). Calibration was performed, as described previously, with trolox stock solutions. Results were expressed as mmol equivalents of trolox per kg of
sample.
2.6.3. FRAP method
Briefly, 900ll of FRAP reagent, prepared freshly and warmed at
37C, was mixed with 150ll of test sample, trolox standard or
water as appropriate reagent blank. The FRAP reagent contained
2.5 ml of a 10 mM TPTZ solution in 40 mM HCl plus 2.5 ml of
20 mM FeCl3H20 and 25 ml of 0.3 M acetate buffer, pH 3.6. Readings at the absorption maximum (595 nm) were taken every 15 s
using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible spectrophotometer
(Massachusetts, USA) equipped with a thermostated automatic
sample positioner. Temperature was maintained at 37C and the
reaction was monitored up to 30 min. Trolox stock solutions were
used to perform the calibration curves. Results were also expressed
as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.4. Total antioxidant activity by the direct ABTS method
Direct measurement of total antioxidant activity of the raw cereal and the non-soluble fraction was based on the procedure described previously (Serpen et al., 2007). The ABTS solution was
prepared as stated above, although the working solution was prepared by diluting with a mixture of ethanol:water (50:50). Then,
6 ml of ABTS was added to a 10 mg portion of the sample and
the mixture was vortexed for 2 min to facilitate the surface reaction with the ABTS reagent. Following centrifugation at 10,500g
for 3 min, the absorbance of the optically clear supernatant was
measured at 730 nm using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). All measurements were
performed exactly 30 min after mixing the sample with the ABTS
reagent. Quantization was performed as stated above for the standard ABTS method.
2.7. Total protein content
Samples (0.800–1.000 g) were heated to 1050C, following
AOAC 992.15 (AOAC, 1995) in a LECO model FP-2000 (Leco Instruments, Madrid, Spain) protein/nitrogen analyser calibrated with
EDTA (Dumas method). The nitrogen-to-protein conversion factors
considered was 6.25%. Results were expressed as grams of protein/
100 g of products.
2.8. Statistical treatment
All of the analyses were performed at least in duplicate. Oneway Anova, followed by Duncan test, was conducted to analyse significant differences between data (p< 0.05). The Statgraphics v5.1
statistical software was employed for the comparisons.
The analysis of HMF in undigested breakfast cereals was based
on the method ofRufián-Henares, Guerra-Hernández, and GarcíaJ.A. Rufián-Henares, C. Delgado-Andrade / Food Research International 42 (2009) 394–400 395
Villanova (2001)with slight modifications (Rufián-Henares, Delgado-Andrade, & Morales, 2006b). Ground sample (1.000 g) was
suspended in 7 ml of deionized water in a 10 ml centrifuge tube
and the tube was shaken vigorously for 1 min. The resulting mixture was centrifuged at 4500gfor 10 min at 4C. The supernatant
was collected on a 10 ml volumetric flask and another two extractions were performed by adding 2 ml of deionized water. The
supernatants were mixed and clarified with 0.250 ml each of Carrez I (potassium ferrocyanide, 15% w/v) and Carrez II (zinc acetate
30% w/v) solutions. After a final centrifugation, the volume was
completed up to 10 ml with deionized water. Then 2 ml were filtered (0.45lm) to analyse the HMF content. The same procedure
was used for measuring HMF in the insoluble fraction after digestion whereas the amount of soluble HMF was performed directly
with only a filtration step of the aqueous fraction.
The HPLC system was similar to that used for furosine analysis.
The mobile phase was made up of a mixture of acetonitrile in
water (5% v/v) delivered at the flow rate of 1 ml/min under isocratic conditions through a C18analytical column (Novapack C18,
2504.6 mm, 4lm particle size, Waters, MA, USA) termostatized
at 32C. The UV detector was set at 284 nm and 20lL were injected. The analysis was performed in duplicate and HMF was
quantified by the external standard method within the range
0.01–50.00 mg/l.
2.6. Antioxidant activity assays
All the antioxidant methods assayed were performed as stated
previously (Rufián-Henares & Morales, 2007b). The antioxidant
activity was measured from the aqueous extract obtained for the
HMF analysis (sample named raw cereal), before adding Carrez I
and II, and from the soluble and non-soluble fractions after the
in vitro digestion.
2.6.1. DPPH method
A 500ll aliquot of sample or trolox standard was added to 1 ml
of DPPH (74 mg/l in methanol). A daily-prepared solution of DPPH
gave a final absorption at 520 nm of 1.8 AU. Mixture was shaken
for 1 h, and then absorption was measured at 520 nm. Temperature in the measurement chamber was set at 30C. Aqueous solutions of trolox at various concentrations were used for calibration
(0.15–1.15 mM). The results were expressed both as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.2. ABTS method
ABTS
+
was produced by reacting 7 mM ABTS stock solution
with 2.45 mM potassium persulphate and allowing the mixture
to stand in the dark at room temperature during 12–16 h before
use. The ABTS
+
working solution (stable for 2 days) was diluted
with 5 mM phosphate buffered saline (pH 7.4) to an absorbance
of 0.70 ± 0.02 at 730 nm. After addition of 100lL of sample or trolox standard to 1 ml of diluted ABTS
+
solution, absorbance reading
was taken at 20 min. using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). Calibration was performed, as described previously, with trolox stock solutions. Results were expressed as mmol equivalents of trolox per kg of
sample.
2.6.3. FRAP method
Briefly, 900ll of FRAP reagent, prepared freshly and warmed at
37C, was mixed with 150ll of test sample, trolox standard or
water as appropriate reagent blank. The FRAP reagent contained
2.5 ml of a 10 mM TPTZ solution in 40 mM HCl plus 2.5 ml of
20 mM FeCl3H20 and 25 ml of 0.3 M acetate buffer, pH 3.6. Readings at the absorption maximum (595 nm) were taken every 15 s
using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible spectrophotometer
(Massachusetts, USA) equipped with a thermostated automatic
sample positioner. Temperature was maintained at 37C and the
reaction was monitored up to 30 min. Trolox stock solutions were
used to perform the calibration curves. Results were also expressed
as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.4. Total antioxidant activity by the direct ABTS method
Direct measurement of total antioxidant activity of the raw cereal and the non-soluble fraction was based on the procedure described previously (Serpen et al., 2007). The ABTS solution was
prepared as stated above, although the working solution was prepared by diluting with a mixture of ethanol:water (50:50). Then,
6 ml of ABTS was added to a 10 mg portion of the sample and
the mixture was vortexed for 2 min to facilitate the surface reaction with the ABTS reagent. Following centrifugation at 10,500g
for 3 min, the absorbance of the optically clear supernatant was
measured at 730 nm using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). All measurements were
performed exactly 30 min after mixing the sample with the ABTS
reagent. Quantization was performed as stated above for the standard ABTS method.
2.7. Total protein content
Samples (0.800–1.000 g) were heated to 1050C, following
AOAC 992.15 (AOAC, 1995) in a LECO model FP-2000 (Leco Instruments, Madrid, Spain) protein/nitrogen analyser calibrated with
EDTA (Dumas method). The nitrogen-to-protein conversion factors
considered was 6.25%. Results were expressed as grams of protein/
100 g of products.
2.8. Statistical treatment
All of the analyses were performed at least in duplicate. Oneway Anova, followed by Duncan test, was conducted to analyse significant differences between data (p< 0.05). The Statgraphics v5.1
statistical software was employed for the comparisons.
0/5000
2.5. HMF assay
The analysis of HMF in undigested breakfast cereals was based
on the method ofRufián-Henares, Guerra-Hernández, and GarcíaJ.A. Rufián-Henares, C. Delgado-Andrade / Food Research International 42 (2009) 394–400 395
Villanova (2001)with slight modifications (Rufián-Henares, Delgado-Andrade, & Morales, 2006b). Ground sample (1.000 g) was
suspended in 7 ml of deionized water in a 10 ml centrifuge tube
and the tube was shaken vigorously for 1 min. The resulting mixture was centrifuged at 4500gfor 10 min at 4C. The supernatant
was collected on a 10 ml volumetric flask and another two extractions were performed by adding 2 ml of deionized water. The
supernatants were mixed and clarified with 0.250 ml each of Carrez I (potassium ferrocyanide, 15% w/v) and Carrez II (zinc acetate
30% w/v) solutions. After a final centrifugation, the volume was
completed up to 10 ml with deionized water. Then 2 ml were filtered (0.45lm) to analyse the HMF content. The same procedure
was used for measuring HMF in the insoluble fraction after digestion whereas the amount of soluble HMF was performed directly
with only a filtration step of the aqueous fraction.
The HPLC system was similar to that used for furosine analysis.
The mobile phase was made up of a mixture of acetonitrile in
water (5% v/v) delivered at the flow rate of 1 ml/min under isocratic conditions through a C18analytical column (Novapack C18,
2504.6 mm, 4lm particle size, Waters, MA, USA) termostatized
at 32C. The UV detector was set at 284 nm and 20lL were injected. The analysis was performed in duplicate and HMF was
quantified by the external standard method within the range
0.01–50.00 mg/l.
2.6. Antioxidant activity assays
All the antioxidant methods assayed were performed as stated
previously (Rufián-Henares & Morales, 2007b). The antioxidant
activity was measured from the aqueous extract obtained for the
HMF analysis (sample named raw cereal), before adding Carrez I
and II, and from the soluble and non-soluble fractions after the
in vitro digestion.
2.6.1. DPPH method
A 500ll aliquot of sample or trolox standard was added to 1 ml
of DPPH (74 mg/l in methanol). A daily-prepared solution of DPPH
gave a final absorption at 520 nm of 1.8 AU. Mixture was shaken
for 1 h, and then absorption was measured at 520 nm. Temperature in the measurement chamber was set at 30C. Aqueous solutions of trolox at various concentrations were used for calibration
(0.15–1.15 mM). The results were expressed both as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.2. ABTS method
ABTS
+
was produced by reacting 7 mM ABTS stock solution
with 2.45 mM potassium persulphate and allowing the mixture
to stand in the dark at room temperature during 12–16 h before
use. The ABTS
+
working solution (stable for 2 days) was diluted
with 5 mM phosphate buffered saline (pH 7.4) to an absorbance
of 0.70 ± 0.02 at 730 nm. After addition of 100lL of sample or trolox standard to 1 ml of diluted ABTS
+
solution, absorbance reading
was taken at 20 min. using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). Calibration was performed, as described previously, with trolox stock solutions. Results were expressed as mmol equivalents of trolox per kg of
sample.
2.6.3. FRAP method
Briefly, 900ll of FRAP reagent, prepared freshly and warmed at
37C, was mixed with 150ll of test sample, trolox standard or
water as appropriate reagent blank. The FRAP reagent contained
2.5 ml of a 10 mM TPTZ solution in 40 mM HCl plus 2.5 ml of
20 mM FeCl3H20 and 25 ml of 0.3 M acetate buffer, pH 3.6. Readings at the absorption maximum (595 nm) were taken every 15 s
using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible spectrophotometer
(Massachusetts, USA) equipped with a thermostated automatic
sample positioner. Temperature was maintained at 37C and the
reaction was monitored up to 30 min. Trolox stock solutions were
used to perform the calibration curves. Results were also expressed
as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.4. Total antioxidant activity by the direct ABTS method
Direct measurement of total antioxidant activity of the raw cereal and the non-soluble fraction was based on the procedure described previously (Serpen et al., 2007). The ABTS solution was
prepared as stated above, although the working solution was prepared by diluting with a mixture of ethanol:water (50:50). Then,
6 ml of ABTS was added to a 10 mg portion of the sample and
the mixture was vortexed for 2 min to facilitate the surface reaction with the ABTS reagent. Following centrifugation at 10,500g
for 3 min, the absorbance of the optically clear supernatant was
measured at 730 nm using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). All measurements were
performed exactly 30 min after mixing the sample with the ABTS
reagent. Quantization was performed as stated above for the standard ABTS method.
2.7. Total protein content
Samples (0.800–1.000 g) were heated to 1050C, following
AOAC 992.15 (AOAC, 1995) in a LECO model FP-2000 (Leco Instruments, Madrid, Spain) protein/nitrogen analyser calibrated with
EDTA (Dumas method). The nitrogen-to-protein conversion factors
considered was 6.25%. Results were expressed as grams of protein/
100 g of products.
2.8. Statistical treatment
All of the analyses were performed at least in duplicate. Oneway Anova, followed by Duncan test, was conducted to analyse significant differences between data (p< 0.05). The Statgraphics v5.1
statistical software was employed for the comparisons.
The analysis of HMF in undigested breakfast cereals was based
on the method ofRufián-Henares, Guerra-Hernández, and GarcíaJ.A. Rufián-Henares, C. Delgado-Andrade / Food Research International 42 (2009) 394–400 395
Villanova (2001)with slight modifications (Rufián-Henares, Delgado-Andrade, & Morales, 2006b). Ground sample (1.000 g) was
suspended in 7 ml of deionized water in a 10 ml centrifuge tube
and the tube was shaken vigorously for 1 min. The resulting mixture was centrifuged at 4500gfor 10 min at 4C. The supernatant
was collected on a 10 ml volumetric flask and another two extractions were performed by adding 2 ml of deionized water. The
supernatants were mixed and clarified with 0.250 ml each of Carrez I (potassium ferrocyanide, 15% w/v) and Carrez II (zinc acetate
30% w/v) solutions. After a final centrifugation, the volume was
completed up to 10 ml with deionized water. Then 2 ml were filtered (0.45lm) to analyse the HMF content. The same procedure
was used for measuring HMF in the insoluble fraction after digestion whereas the amount of soluble HMF was performed directly
with only a filtration step of the aqueous fraction.
The HPLC system was similar to that used for furosine analysis.
The mobile phase was made up of a mixture of acetonitrile in
water (5% v/v) delivered at the flow rate of 1 ml/min under isocratic conditions through a C18analytical column (Novapack C18,
2504.6 mm, 4lm particle size, Waters, MA, USA) termostatized
at 32C. The UV detector was set at 284 nm and 20lL were injected. The analysis was performed in duplicate and HMF was
quantified by the external standard method within the range
0.01–50.00 mg/l.
2.6. Antioxidant activity assays
All the antioxidant methods assayed were performed as stated
previously (Rufián-Henares & Morales, 2007b). The antioxidant
activity was measured from the aqueous extract obtained for the
HMF analysis (sample named raw cereal), before adding Carrez I
and II, and from the soluble and non-soluble fractions after the
in vitro digestion.
2.6.1. DPPH method
A 500ll aliquot of sample or trolox standard was added to 1 ml
of DPPH (74 mg/l in methanol). A daily-prepared solution of DPPH
gave a final absorption at 520 nm of 1.8 AU. Mixture was shaken
for 1 h, and then absorption was measured at 520 nm. Temperature in the measurement chamber was set at 30C. Aqueous solutions of trolox at various concentrations were used for calibration
(0.15–1.15 mM). The results were expressed both as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.2. ABTS method
ABTS
+
was produced by reacting 7 mM ABTS stock solution
with 2.45 mM potassium persulphate and allowing the mixture
to stand in the dark at room temperature during 12–16 h before
use. The ABTS
+
working solution (stable for 2 days) was diluted
with 5 mM phosphate buffered saline (pH 7.4) to an absorbance
of 0.70 ± 0.02 at 730 nm. After addition of 100lL of sample or trolox standard to 1 ml of diluted ABTS
+
solution, absorbance reading
was taken at 20 min. using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). Calibration was performed, as described previously, with trolox stock solutions. Results were expressed as mmol equivalents of trolox per kg of
sample.
2.6.3. FRAP method
Briefly, 900ll of FRAP reagent, prepared freshly and warmed at
37C, was mixed with 150ll of test sample, trolox standard or
water as appropriate reagent blank. The FRAP reagent contained
2.5 ml of a 10 mM TPTZ solution in 40 mM HCl plus 2.5 ml of
20 mM FeCl3H20 and 25 ml of 0.3 M acetate buffer, pH 3.6. Readings at the absorption maximum (595 nm) were taken every 15 s
using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible spectrophotometer
(Massachusetts, USA) equipped with a thermostated automatic
sample positioner. Temperature was maintained at 37C and the
reaction was monitored up to 30 min. Trolox stock solutions were
used to perform the calibration curves. Results were also expressed
as mmol equivalents of trolox per kg of sample.
2.6.4. Total antioxidant activity by the direct ABTS method
Direct measurement of total antioxidant activity of the raw cereal and the non-soluble fraction was based on the procedure described previously (Serpen et al., 2007). The ABTS solution was
prepared as stated above, although the working solution was prepared by diluting with a mixture of ethanol:water (50:50). Then,
6 ml of ABTS was added to a 10 mg portion of the sample and
the mixture was vortexed for 2 min to facilitate the surface reaction with the ABTS reagent. Following centrifugation at 10,500g
for 3 min, the absorbance of the optically clear supernatant was
measured at 730 nm using a Perkin–Elmer Lambda 25 UV–Visible
spectrophotometer (Massachusetts, USA). All measurements were
performed exactly 30 min after mixing the sample with the ABTS
reagent. Quantization was performed as stated above for the standard ABTS method.
2.7. Total protein content
Samples (0.800–1.000 g) were heated to 1050C, following
AOAC 992.15 (AOAC, 1995) in a LECO model FP-2000 (Leco Instruments, Madrid, Spain) protein/nitrogen analyser calibrated with
EDTA (Dumas method). The nitrogen-to-protein conversion factors
considered was 6.25%. Results were expressed as grams of protein/
100 g of products.
2.8. Statistical treatment
All of the analyses were performed at least in duplicate. Oneway Anova, followed by Duncan test, was conducted to analyse significant differences between data (p< 0.05). The Statgraphics v5.1
statistical software was employed for the comparisons.
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.5 ทดสอบ HMF
วิเคราะห์ HMF ในอาหารเช้าซีเรียลไม่ได้แยกแยะตาม
โดยวิธีofRufián-เฮ Guerra-HernándezและGarcíaJ.A Rufián-Henares, C. เดลกาโด-Andrade / งานวิจัยด้านอาหารนานาชาติ 42 (2009) 394-400 395
วิลลาโนวา (2001) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (Rufián-Henares เดลกาโด-Andrade และโมราเลส, 2006b) ตัวอย่างพื้นดิน (1.000 กรัม) ถูก
ระงับใน 7 ml ของน้ำกลั่นปราศจากไอออนในหลอด centrifuge 10 มิลลิลิตร
และท่อเขย่าแรง ๆ เป็นเวลา 1 นาที ผสมทำให้ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4500gfor 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ใส
ถูกรวบรวมไว้ในขวดปริมาตร 10 มิลลิลิตรและอีกสองสกัดได้ดำเนินการโดยการเพิ่ม 2 ml ของน้ำกลั่นปราศจากไอออน
supernatants ถูกผสมและชี้แจงกับ 0.250 มลแต่ละ Carrez ฉัน (โพแทสเซียม ferrocyanide 15% w / v) และ Carrez II (สังกะสีอะซิเตท
30% w / v) การแก้ปัญหา หลังจากที่ปั่นสุดท้ายปริมาณที่
เสร็จสมบูรณ์ถึง 10 มลด้วยน้ำกลั่นปราศจากไอออน จากนั้น 2 มิลลิลิตรถูกกรอง (0.45lm) วิเคราะห์เนื้อหา HMF ขั้นตอนเดียวกัน
ถูกนำมาใช้สำหรับการวัด HMF ในส่วนที่ไม่ละลายน้ำหลังจากการย่อยอาหารในขณะที่ปริมาณของ HMF ที่ละลายน้ำได้ดำเนินการโดยตรง
มีเพียงขั้นตอนการกรองของส่วนน้ำ.
ระบบ HPLC เป็นแบบเดียวกับที่ใช้ในการวิเคราะห์ฟูโรซีน.
เฟสเคลื่อนที่ที่ถูกสร้างขึ้น ขึ้นจากส่วนผสมของ acetonitrile ใน
น้ำ (5% v / v) ส่งที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาทีภายใต้เงื่อนไข Isocratic ผ่านคอลัมน์ C18analytical (Novapack C18,
250? 4.6 มมขนาดอนุภาค 4lm น้ำ, MA, USA ) termostatized
ที่ 32 องศาเซลเซียส เครื่องตรวจจับรังสียูวีตั้งอยู่ที่ 284 นาโนเมตรและ 20lL ถูกฉีด การวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการในที่ซ้ำกันและ HMF ถูก
วัดโดยวิธีมาตรฐานภายนอกอยู่ในช่วง
0.01-50.00 mg / l.
2.6 การตรวจสารต้านอนุมูลอิสระ
ทั้งหมดวิธีการต้านอนุมูลอิสระ assayed ได้ดำเนินการตามที่ระบุไว้
ก่อนหน้านี้ (Rufián-Henares & โมราเลส 2007B) สารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรมวัดจากสารสกัดที่ได้รับสำหรับ
การวิเคราะห์ HMF (ตัวอย่างชื่อธัญพืชดิบ) ก่อนที่จะเพิ่ม Carrez ฉัน
และ II และจากที่ละลายน้ำได้และเศษส่วนที่ไม่ละลายน้ำหลังจากที่
ในหลอดทดลองการย่อยอาหาร.
2.6.1 วิธี DPPH
aliquot 500ll ของตัวอย่างหรือ Trolox มาตรฐานถูกบันทึกอยู่ใน 1 มิลลิลิตร
ของ DPPH (74 mg / l ในเมทานอล) วิธีการแก้ปัญหาในชีวิตประจำวันเตรียมของ DPPH
ให้การดูดซึมสุดท้ายที่ 520 นาโนเมตร 1.8 เหรียญออสเตรเลีย ส่วนผสมที่ถูกเขย่า
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและจากนั้นดูดซึมวัดที่ 520 นาโนเมตร อุณหภูมิในห้องวัดตั้งอยู่ที่ 30 องศาเซลเซียส สารละลายของ Trolox ที่ระดับความเข้มข้นต่างๆถูกนำมาใช้สำหรับการสอบเทียบ
(0.15-1.15 มิลลิ) ผลการวิจัยแสดงทั้ง mmol เทียบเท่าของ Trolox กิโลกรัมละของตัวอย่าง.
2.6.2 วิธี ABTS
ABTS
+?
ถูกผลิตโดยปฏิกิริยา 7 มิลลิเมตร ABTS แก้ปัญหาสต็อก
ที่มีโพแทสเซียมเปอร์ซัลเฟต 2.45 มิลลิและช่วยให้ส่วนผสม
ที่จะยืนอยู่ในที่มืดที่อุณหภูมิห้องในช่วง 12-16 ชั่วโมงก่อนที่จะ
ใช้งาน ABTS
+?
วิธีการแก้ปัญหาการทำงาน (ที่มั่นคงสำหรับ 2 วัน) ถูกเจือจาง
กับฟอสเฟต 5 มิลลิน้ำเกลือบัฟเฟอร์ (pH 7.4) การดูดกลืนแสง
0.70 ± 0.02 ที่ 730 นาโนเมตร หลังจากที่เพิ่มขึ้นของ 100LL มาตรฐานตัวอย่างหรือ Trolox 1 มิลลิลิตรเจือจาง ABTS
+?
วิธีการแก้ปัญหาการอ่านการดูดกลืนแสง
ที่ถูกนำมา 20 นาที โดยใช้แลมบ์ดา Perkin-Elmer 25 UV-Visible
Spectrophotometer (Massachusetts, USA) สอบเทียบได้ดำเนินการตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ที่มีการแก้ปัญหา Trolox หุ้น ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็น mmol เทียบเท่าของ Trolox กิโลกรัมละของ
ตัวอย่าง.
2.6.3 วิธี FRAP
สั้น ๆ 900ll สาร FRAP เตรียมสดใหม่และความอบอุ่นที่
37 องศาเซลเซียสได้รับการผสมกับ 150ll ของตัวอย่างทดสอบมาตรฐาน Trolox หรือ
น้ำเป็นน้ำยาว่างที่เหมาะสม น้ำยา FRAP มีอยู่
2.5 มิลลิลิตร 10 มมโซลูชั่น TPTZ ใน 40 มิลลิ HCl บวก 2.5 มิลลิลิตร
20 มิลลิเมตร FeCl3? H20 และ 25 มล. 0.3 M บัฟเฟอร์อะซิเตท, พีเอช 3.6 อ่านที่สูงสุดในการดูดซึม (595 นาโนเมตร) ถูกนำทุก 15 วินาที
โดยใช้แลมบ์ดา Perkin-Elmer 25 UV-Visible Spectrophotometer
(แมสซาชูเซต, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ติดตั้งอัตโนมัติ thermostated
positioner ตัวอย่าง อุณหภูมิถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ
ปฏิกิริยาจะถูกตรวจสอบได้ถึง 30 นาที Trolox โซลูชั่นหุ้นที่ถูก
ใช้ในการดำเนินการสอบเทียบเส้นโค้ง ผลลัพธ์ที่ได้แสดงความ
เป็น mmol เทียบเท่าของ Trolox กิโลกรัมละของตัวอย่าง.
2.6.4 ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดโดยวิธี ABTS โดยตรง
วัดโดยตรงของสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของธัญพืชดิบและส่วนที่ไม่ละลายน้ำก็ขึ้นอยู่กับขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Serpen et al., 2007) วิธี ABTS ถูก
จัดทำขึ้นตามที่ระบุไว้ข้างต้นแม้ว่าการแก้ปัญหาการทำงานได้รับการจัดทำขึ้นโดยเจือจางที่มีส่วนผสมของเอทานอน้ำ (50:50) จากนั้น
6 มล ABTS ถูกบันทึกอยู่ในส่วน 10 mg ของกลุ่มตัวอย่างและ
ส่วนผสมที่ถูกการ vortex เวลา 2 นาทีเพื่อความสะดวกในการตอบสนองพื้นผิวด้วยสาร ABTS ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยงที่ 10,500g
เป็นเวลา 3 นาที, การดูดกลืนแสงของสารละลายใสเป็น
วัดที่ 730 นาโนเมตรโดยใช้แลมบ์ดา Perkin-Elmer 25 UV-Visible
Spectrophotometer (Massachusetts, USA) วัดทั้งหมดถูก
ดำเนินการว่า 30 นาทีหลังจากผสมตัวอย่างด้วยวิธี ABTS
น้ำยา Quantization ได้ดำเนินการตามที่ระบุไว้ข้างต้นสำหรับวิธี ABTS มาตรฐาน.
2.7 ปริมาณโปรตีนรวม
ตัวอย่าง (0.800-1.000 กรัม) ได้รับความร้อนที่ 1,050 องศาเซลเซียสตาม
AOAC 992.15 (AOAC, 1995) ในรูปแบบ LECO FP-2000 (Leco เครื่องดนตรี, มาดริด, สเปน) โปรตีน / วิเคราะห์ไนโตรเจนเทียบกับ
EDTA (วิธีมัส ) ปัจจัยการแปลงไนโตรเจนต่อโปรตีน
ถือว่าเป็น 6.25% ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นกรัมของโปรตีน /
100 กรัมของผลิตภัณฑ์.
2.8 รักษาสถิติ
ทั้งหมดของการวิเคราะห์ได้ดำเนินการอย่างน้อยในที่ซ้ำกัน เที่ยว Anova ตามด้วยการทดสอบดันแคนได้ดำเนินการวิเคราะห์ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างข้อมูล (p <0.05) Statgraphics v5.1
ซอฟต์แวร์ทางสถิติถูกจ้างสำหรับการเปรียบเทียบ
วิเคราะห์ HMF ในอาหารเช้าซีเรียลไม่ได้แยกแยะตาม
โดยวิธีofRufián-เฮ Guerra-HernándezและGarcíaJ.A Rufián-Henares, C. เดลกาโด-Andrade / งานวิจัยด้านอาหารนานาชาติ 42 (2009) 394-400 395
วิลลาโนวา (2001) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (Rufián-Henares เดลกาโด-Andrade และโมราเลส, 2006b) ตัวอย่างพื้นดิน (1.000 กรัม) ถูก
ระงับใน 7 ml ของน้ำกลั่นปราศจากไอออนในหลอด centrifuge 10 มิลลิลิตร
และท่อเขย่าแรง ๆ เป็นเวลา 1 นาที ผสมทำให้ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4500gfor 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ใส
ถูกรวบรวมไว้ในขวดปริมาตร 10 มิลลิลิตรและอีกสองสกัดได้ดำเนินการโดยการเพิ่ม 2 ml ของน้ำกลั่นปราศจากไอออน
supernatants ถูกผสมและชี้แจงกับ 0.250 มลแต่ละ Carrez ฉัน (โพแทสเซียม ferrocyanide 15% w / v) และ Carrez II (สังกะสีอะซิเตท
30% w / v) การแก้ปัญหา หลังจากที่ปั่นสุดท้ายปริมาณที่
เสร็จสมบูรณ์ถึง 10 มลด้วยน้ำกลั่นปราศจากไอออน จากนั้น 2 มิลลิลิตรถูกกรอง (0.45lm) วิเคราะห์เนื้อหา HMF ขั้นตอนเดียวกัน
ถูกนำมาใช้สำหรับการวัด HMF ในส่วนที่ไม่ละลายน้ำหลังจากการย่อยอาหารในขณะที่ปริมาณของ HMF ที่ละลายน้ำได้ดำเนินการโดยตรง
มีเพียงขั้นตอนการกรองของส่วนน้ำ.
ระบบ HPLC เป็นแบบเดียวกับที่ใช้ในการวิเคราะห์ฟูโรซีน.
เฟสเคลื่อนที่ที่ถูกสร้างขึ้น ขึ้นจากส่วนผสมของ acetonitrile ใน
น้ำ (5% v / v) ส่งที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาทีภายใต้เงื่อนไข Isocratic ผ่านคอลัมน์ C18analytical (Novapack C18,
250? 4.6 มมขนาดอนุภาค 4lm น้ำ, MA, USA ) termostatized
ที่ 32 องศาเซลเซียส เครื่องตรวจจับรังสียูวีตั้งอยู่ที่ 284 นาโนเมตรและ 20lL ถูกฉีด การวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการในที่ซ้ำกันและ HMF ถูก
วัดโดยวิธีมาตรฐานภายนอกอยู่ในช่วง
0.01-50.00 mg / l.
2.6 การตรวจสารต้านอนุมูลอิสระ
ทั้งหมดวิธีการต้านอนุมูลอิสระ assayed ได้ดำเนินการตามที่ระบุไว้
ก่อนหน้านี้ (Rufián-Henares & โมราเลส 2007B) สารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรมวัดจากสารสกัดที่ได้รับสำหรับ
การวิเคราะห์ HMF (ตัวอย่างชื่อธัญพืชดิบ) ก่อนที่จะเพิ่ม Carrez ฉัน
และ II และจากที่ละลายน้ำได้และเศษส่วนที่ไม่ละลายน้ำหลังจากที่
ในหลอดทดลองการย่อยอาหาร.
2.6.1 วิธี DPPH
aliquot 500ll ของตัวอย่างหรือ Trolox มาตรฐานถูกบันทึกอยู่ใน 1 มิลลิลิตร
ของ DPPH (74 mg / l ในเมทานอล) วิธีการแก้ปัญหาในชีวิตประจำวันเตรียมของ DPPH
ให้การดูดซึมสุดท้ายที่ 520 นาโนเมตร 1.8 เหรียญออสเตรเลีย ส่วนผสมที่ถูกเขย่า
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและจากนั้นดูดซึมวัดที่ 520 นาโนเมตร อุณหภูมิในห้องวัดตั้งอยู่ที่ 30 องศาเซลเซียส สารละลายของ Trolox ที่ระดับความเข้มข้นต่างๆถูกนำมาใช้สำหรับการสอบเทียบ
(0.15-1.15 มิลลิ) ผลการวิจัยแสดงทั้ง mmol เทียบเท่าของ Trolox กิโลกรัมละของตัวอย่าง.
2.6.2 วิธี ABTS
ABTS
+?
ถูกผลิตโดยปฏิกิริยา 7 มิลลิเมตร ABTS แก้ปัญหาสต็อก
ที่มีโพแทสเซียมเปอร์ซัลเฟต 2.45 มิลลิและช่วยให้ส่วนผสม
ที่จะยืนอยู่ในที่มืดที่อุณหภูมิห้องในช่วง 12-16 ชั่วโมงก่อนที่จะ
ใช้งาน ABTS
+?
วิธีการแก้ปัญหาการทำงาน (ที่มั่นคงสำหรับ 2 วัน) ถูกเจือจาง
กับฟอสเฟต 5 มิลลิน้ำเกลือบัฟเฟอร์ (pH 7.4) การดูดกลืนแสง
0.70 ± 0.02 ที่ 730 นาโนเมตร หลังจากที่เพิ่มขึ้นของ 100LL มาตรฐานตัวอย่างหรือ Trolox 1 มิลลิลิตรเจือจาง ABTS
+?
วิธีการแก้ปัญหาการอ่านการดูดกลืนแสง
ที่ถูกนำมา 20 นาที โดยใช้แลมบ์ดา Perkin-Elmer 25 UV-Visible
Spectrophotometer (Massachusetts, USA) สอบเทียบได้ดำเนินการตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ที่มีการแก้ปัญหา Trolox หุ้น ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็น mmol เทียบเท่าของ Trolox กิโลกรัมละของ
ตัวอย่าง.
2.6.3 วิธี FRAP
สั้น ๆ 900ll สาร FRAP เตรียมสดใหม่และความอบอุ่นที่
37 องศาเซลเซียสได้รับการผสมกับ 150ll ของตัวอย่างทดสอบมาตรฐาน Trolox หรือ
น้ำเป็นน้ำยาว่างที่เหมาะสม น้ำยา FRAP มีอยู่
2.5 มิลลิลิตร 10 มมโซลูชั่น TPTZ ใน 40 มิลลิ HCl บวก 2.5 มิลลิลิตร
20 มิลลิเมตร FeCl3? H20 และ 25 มล. 0.3 M บัฟเฟอร์อะซิเตท, พีเอช 3.6 อ่านที่สูงสุดในการดูดซึม (595 นาโนเมตร) ถูกนำทุก 15 วินาที
โดยใช้แลมบ์ดา Perkin-Elmer 25 UV-Visible Spectrophotometer
(แมสซาชูเซต, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ติดตั้งอัตโนมัติ thermostated
positioner ตัวอย่าง อุณหภูมิถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ
ปฏิกิริยาจะถูกตรวจสอบได้ถึง 30 นาที Trolox โซลูชั่นหุ้นที่ถูก
ใช้ในการดำเนินการสอบเทียบเส้นโค้ง ผลลัพธ์ที่ได้แสดงความ
เป็น mmol เทียบเท่าของ Trolox กิโลกรัมละของตัวอย่าง.
2.6.4 ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดโดยวิธี ABTS โดยตรง
วัดโดยตรงของสารต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของธัญพืชดิบและส่วนที่ไม่ละลายน้ำก็ขึ้นอยู่กับขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Serpen et al., 2007) วิธี ABTS ถูก
จัดทำขึ้นตามที่ระบุไว้ข้างต้นแม้ว่าการแก้ปัญหาการทำงานได้รับการจัดทำขึ้นโดยเจือจางที่มีส่วนผสมของเอทานอน้ำ (50:50) จากนั้น
6 มล ABTS ถูกบันทึกอยู่ในส่วน 10 mg ของกลุ่มตัวอย่างและ
ส่วนผสมที่ถูกการ vortex เวลา 2 นาทีเพื่อความสะดวกในการตอบสนองพื้นผิวด้วยสาร ABTS ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยงที่ 10,500g
เป็นเวลา 3 นาที, การดูดกลืนแสงของสารละลายใสเป็น
วัดที่ 730 นาโนเมตรโดยใช้แลมบ์ดา Perkin-Elmer 25 UV-Visible
Spectrophotometer (Massachusetts, USA) วัดทั้งหมดถูก
ดำเนินการว่า 30 นาทีหลังจากผสมตัวอย่างด้วยวิธี ABTS
น้ำยา Quantization ได้ดำเนินการตามที่ระบุไว้ข้างต้นสำหรับวิธี ABTS มาตรฐาน.
2.7 ปริมาณโปรตีนรวม
ตัวอย่าง (0.800-1.000 กรัม) ได้รับความร้อนที่ 1,050 องศาเซลเซียสตาม
AOAC 992.15 (AOAC, 1995) ในรูปแบบ LECO FP-2000 (Leco เครื่องดนตรี, มาดริด, สเปน) โปรตีน / วิเคราะห์ไนโตรเจนเทียบกับ
EDTA (วิธีมัส ) ปัจจัยการแปลงไนโตรเจนต่อโปรตีน
ถือว่าเป็น 6.25% ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นกรัมของโปรตีน /
100 กรัมของผลิตภัณฑ์.
2.8 รักษาสถิติ
ทั้งหมดของการวิเคราะห์ได้ดำเนินการอย่างน้อยในที่ซ้ำกัน เที่ยว Anova ตามด้วยการทดสอบดันแคนได้ดำเนินการวิเคราะห์ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างข้อมูล (p <0.05) Statgraphics v5.1
ซอฟต์แวร์ทางสถิติถูกจ้างสำหรับการเปรียบเทียบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.5 hmf assay
การวิเคราะห์ hmf ใน undigested อาหารเช้าธัญญาหารตาม
ในวิธีการ ofrufi . kgm n-henares Guerra , เอร์นันเดซ . kgm ndez และ garc í AJ . . rufi . kgm n-henares ซี เดลกาโด อันดราเด้ / อาหารการวิจัยระหว่างประเทศ 42 ( 2009 ) – 400 394 395
วิลลาโนวา ( 2001 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ( n-henares . kgm rufi , ที่ตั้ง& โมราเลส เดลกาโด้ , 2006b ) ตัวอย่างดิน ( 1.000 g )
แขวนลอยใน 7 ml ของน้ำ 10 ml คล้ายเนื้อเยื่อประสาน centrifuge หลอดและท่อที่ถูกเขย่าอย่างแรง
เป็นเวลา 1 นาที ให้ส่วนผสมที่ 4500gfor ไฟฟ้า 10 นาทีที่ 4 C สูง
เก็บรวบรวม 10 มล. ปริมาตรขวด และอีกสองทีมได้เพิ่ม 2 มิลลิลิตร คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ
supernatants ผสมชี้แจงกับ 0250 ml แต่ละ carrez ( โพแทสเซียมเฟอร์โรไซยาเนท , 15 % w / v ) และ carrez II ( ซิงค์อะซิเตต
30 % w / v ) โซลูชั่น หลังจากปั่นสุดท้าย ปริมาณ 10 ml
เสร็จขึ้นคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ แล้วมีกรอง 2 ml ( 0.45lm ) วิเคราะห์เนื้อหา hmf .
ขั้นตอนเดียวกันใช้สำหรับวัดในส่วนที่ไม่ละลายน้ำหลังจาก hmf การย่อยอาหารในขณะที่ปริมาณ soluble hmf แสดงโดยตรง
มีเพียงขั้นตอนของเศษส่วนการกรองน้ำ .
ระบบ HPLC คือคล้ายกับที่ใช้ในการวิเคราะห์ furosine .
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยส่วนผสมของไนใน
น้ำ ( 5 % v / v ) ส่งที่อัตราการไหล 2 มล. / นาทีภายใต้เงื่อนไข Isocratic ผ่านคอลัมน์ c18analytical ( novapack c18
250 , 4.6 มม. 4lm อนุภาค , น้ำ , MA , USA ) termostatized
ที่ 32 C เครื่องตรวจจับรังสียูวีไว้ที่ 260 นาโนเมตร และ 20ll ถูกฉีดเข้าไป ผลจากการวิเคราะห์และตรวจซ้ำใน hmf คือ
โดยวิธีมาตรฐานภายนอกภายในช่วง
0.01 – 50.00 mg / l
2.6หรือสารต้านอนุมูลอิสระ
ทั้งหมดวิธีการปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระมีการปฏิบัติตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ (
rufi . kgm n-henares &โมราเลส 2007b ) สารต้านอนุมูลอิสระ
วัดจากน้ำสกัดที่ได้สำหรับ
การวิเคราะห์ hmf ( ตัวอย่างชื่อวัตถุดิบธัญพืช ) , ก่อนที่จะเพิ่ม carrez ผม
2 และจากไม่ละลายและละลายในลำไส้ เศษส่วน หลัง
ดูแลต่อ . วิธี dpph
เป็น 500ll ส่วนลงตัวของตัวอย่างหรือสารมาตรฐานเพิ่ม 1 ml
ของ dpph ( 74 mg / l ในเมทานอล ) วันเตรียมสารละลาย dpph
ให้การดูดซึมสุดท้ายที่ 520 nm 1.8 AU ส่วนผสมที่ถูกเขย่า
1 H , และการดูดซึมเป็นวัดที่ 520 nm . การวัดอุณหภูมิในโรงตั้งไว้ที่ 30 C . สารละลายที่ความเข้มข้นของสารต่าง ๆที่ใช้สำหรับการสอบเทียบ
( 0.15 ) 1.15 มิลลิเมตร )ผลลัพธ์ที่ได้แสดงทั้งมิลลิโมลของสารที่มีต่อกิโลกรัมตัวอย่าง .
ดาวน์โหลด .
Abbr Abbr วิธีการผลิตโดยปฏิกิริยา 7 มม. Abbr โซลูชั่นหุ้น 2.45 มิล
กับโพแทสเซียม persulphate และช่วยให้ส่วนผสม
ไปยืนในที่มืดที่อุณหภูมิระหว่าง 12 – 16 ชั่วโมงก่อน
ใช้ .
) Abbr ทํางานโซลูชั่น ( ปกติ 2 วัน ) เจือจาง
5 มม. ในเกลือฟอสเฟต ( pH 74 ) เป็นค่า
0.70 ± 0.02 ที่ 730 นาโนเมตร หลังจากเพิ่ม 100ll ของตัวอย่างหรือสารมาตรฐาน 1 มิลลิลิตร สารละลายเจือจาง Abbr
, การอ่านค่าถ่ายที่ 20 นาที ใช้เพอร์กินเอลเมอร์แลมบ์ดา– 25 UV –มองเห็น
Spectrophotometer ( Massachusetts , USA ) การกระทำ , ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ด้วยโซลูชั่นสาร หุ้นผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิโมลต่อกิโลกรัมเทียบเท่าของสารตัวอย่าง
.
2.6.3 . ใช้ Frap
สั้น 900ll VDO ของรีเอเจนต์ เตรียมสดและอบอุ่นที่
37 C ผสมกับ 150ll ทดสอบตัวอย่าง สารมาตรฐานหรือ
น้ำว่างสารเคมีที่เหมาะสม ใช้ Frap
2.5 มิลลิลิตร บรรจุสารเคมีขนาด 10 มม. tptz สารละลาย HCl 40 มิล พลัส 2.5 มล.
20 มม. และ 25 มิลลิลิตร FeCl3 H20 0.3 M อาซีเตตบัฟเฟอร์ pH 3.6อ่านในการดูดซึมสูงสุด ( 595 nm ) ถ่ายทุก 15 S
ใช้เพอร์กินเอลเมอร์แลมบ์ดา– 25 UV Spectrophotometer และมองเห็น
( Massachusetts , USA ) พร้อม thermostated อัตโนมัติ
ตัวอย่าง positioner . รักษาที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และ
ปฏิกิริยาถูกตรวจสอบได้ถึง 30 นาที สารหุ้นโซลูชั่น
ใช้แสดงเส้นโค้งสอบเทียบ ผลการวิจัยยังแสดง
เป็นมิลลิโมลของสารที่มีต่อกิโลกรัมตัวอย่าง .
2.6.4 . รวมสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมโดยตรงโดยวิธี
Abbr การวัดสารต้านอนุมูลอิสระรวมซีเรียลดิบและไม่ละลายน้ำ ส่วนตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( serpen et al . , 2007 ) โดย Abbr สารละลาย
เตรียมตามที่ระบุไว้ข้างต้นถึงแม้ว่าโซลูชั่นการทำงานที่เตรียมโดยละลายที่มีส่วนผสมของเอทานอล : น้ำ ( 50 : 50 ) งั้น
6 มิลลิลิตร Abbr คือเพิ่มส่วน 10 mg ของตัวอย่างและส่วนผสม vortexed
2 นาทีเพื่อให้ผิวปฏิกิริยากับ Abbr เกิดปฏิกิริยา ปั่นต่อไปที่ 10500g
3 นาที จะนำค่าของด้านข้างใส
วัดที่ 730 นาโนเมตรโดยใช้เพอร์กินเอลเมอร์แลมบ์ดา– 25 UV –มองเห็น
Spectrophotometer ( Massachusetts , USA ) วัดทั้งหมดถูก
แสดงตรง 30 นาทีหลังจากการผสมตัวอย่างกับ Abbr
เกิดปฏิกิริยา ภาษาไทยมีการปฏิบัติตามที่ระบุไว้ข้างต้น สำหรับวิธีมาตรฐาน Abbr .
2.7 . ตัวอย่างโปรตีนรวมเนื้อหา
( 0.800 และ 1.000 กรัม ) ร้อนถึง 1050 C ตาม
992.15 ( โปรตีนโปรตีน ,1995 ) ในรูปแบบ fp-2000 LECO ( LECO เครื่องมือ , มาดริด , สเปน ) โปรตีน / ไนโตรเจนวิเคราะห์เทียบกับ
EDTA ( ดูมาวิธี ) ไนโตรเจนกับปัจจัยการแปลงโปรตีน
ถือว่าเป็น 6.25 % ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นกรัมของโปรตีน /
ผลิตภัณฑ์ 100 g .
2.8 . วิเคราะห์
ทั้งหมดของการวิเคราะห์จำนวนน้อยในที่ซ้ำกัน การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ตามด้วย ดันแคน ทดสอบมีวัตถุประสงค์เพื่อวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างข้อมูล ( P < 0.05 ) การ Statgraphics v5.1
สถิติซอฟต์แวร์ที่ใช้สำหรับการเปรียบเทียบ
การวิเคราะห์ hmf ใน undigested อาหารเช้าธัญญาหารตาม
ในวิธีการ ofrufi . kgm n-henares Guerra , เอร์นันเดซ . kgm ndez และ garc í AJ . . rufi . kgm n-henares ซี เดลกาโด อันดราเด้ / อาหารการวิจัยระหว่างประเทศ 42 ( 2009 ) – 400 394 395
วิลลาโนวา ( 2001 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ( n-henares . kgm rufi , ที่ตั้ง& โมราเลส เดลกาโด้ , 2006b ) ตัวอย่างดิน ( 1.000 g )
แขวนลอยใน 7 ml ของน้ำ 10 ml คล้ายเนื้อเยื่อประสาน centrifuge หลอดและท่อที่ถูกเขย่าอย่างแรง
เป็นเวลา 1 นาที ให้ส่วนผสมที่ 4500gfor ไฟฟ้า 10 นาทีที่ 4 C สูง
เก็บรวบรวม 10 มล. ปริมาตรขวด และอีกสองทีมได้เพิ่ม 2 มิลลิลิตร คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ
supernatants ผสมชี้แจงกับ 0250 ml แต่ละ carrez ( โพแทสเซียมเฟอร์โรไซยาเนท , 15 % w / v ) และ carrez II ( ซิงค์อะซิเตต
30 % w / v ) โซลูชั่น หลังจากปั่นสุดท้าย ปริมาณ 10 ml
เสร็จขึ้นคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ แล้วมีกรอง 2 ml ( 0.45lm ) วิเคราะห์เนื้อหา hmf .
ขั้นตอนเดียวกันใช้สำหรับวัดในส่วนที่ไม่ละลายน้ำหลังจาก hmf การย่อยอาหารในขณะที่ปริมาณ soluble hmf แสดงโดยตรง
มีเพียงขั้นตอนของเศษส่วนการกรองน้ำ .
ระบบ HPLC คือคล้ายกับที่ใช้ในการวิเคราะห์ furosine .
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยส่วนผสมของไนใน
น้ำ ( 5 % v / v ) ส่งที่อัตราการไหล 2 มล. / นาทีภายใต้เงื่อนไข Isocratic ผ่านคอลัมน์ c18analytical ( novapack c18
250 , 4.6 มม. 4lm อนุภาค , น้ำ , MA , USA ) termostatized
ที่ 32 C เครื่องตรวจจับรังสียูวีไว้ที่ 260 นาโนเมตร และ 20ll ถูกฉีดเข้าไป ผลจากการวิเคราะห์และตรวจซ้ำใน hmf คือ
โดยวิธีมาตรฐานภายนอกภายในช่วง
0.01 – 50.00 mg / l
2.6หรือสารต้านอนุมูลอิสระ
ทั้งหมดวิธีการปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระมีการปฏิบัติตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ (
rufi . kgm n-henares &โมราเลส 2007b ) สารต้านอนุมูลอิสระ
วัดจากน้ำสกัดที่ได้สำหรับ
การวิเคราะห์ hmf ( ตัวอย่างชื่อวัตถุดิบธัญพืช ) , ก่อนที่จะเพิ่ม carrez ผม
2 และจากไม่ละลายและละลายในลำไส้ เศษส่วน หลัง
ดูแลต่อ . วิธี dpph
เป็น 500ll ส่วนลงตัวของตัวอย่างหรือสารมาตรฐานเพิ่ม 1 ml
ของ dpph ( 74 mg / l ในเมทานอล ) วันเตรียมสารละลาย dpph
ให้การดูดซึมสุดท้ายที่ 520 nm 1.8 AU ส่วนผสมที่ถูกเขย่า
1 H , และการดูดซึมเป็นวัดที่ 520 nm . การวัดอุณหภูมิในโรงตั้งไว้ที่ 30 C . สารละลายที่ความเข้มข้นของสารต่าง ๆที่ใช้สำหรับการสอบเทียบ
( 0.15 ) 1.15 มิลลิเมตร )ผลลัพธ์ที่ได้แสดงทั้งมิลลิโมลของสารที่มีต่อกิโลกรัมตัวอย่าง .
ดาวน์โหลด .
Abbr Abbr วิธีการผลิตโดยปฏิกิริยา 7 มม. Abbr โซลูชั่นหุ้น 2.45 มิล
กับโพแทสเซียม persulphate และช่วยให้ส่วนผสม
ไปยืนในที่มืดที่อุณหภูมิระหว่าง 12 – 16 ชั่วโมงก่อน
ใช้ .
) Abbr ทํางานโซลูชั่น ( ปกติ 2 วัน ) เจือจาง
5 มม. ในเกลือฟอสเฟต ( pH 74 ) เป็นค่า
0.70 ± 0.02 ที่ 730 นาโนเมตร หลังจากเพิ่ม 100ll ของตัวอย่างหรือสารมาตรฐาน 1 มิลลิลิตร สารละลายเจือจาง Abbr
, การอ่านค่าถ่ายที่ 20 นาที ใช้เพอร์กินเอลเมอร์แลมบ์ดา– 25 UV –มองเห็น
Spectrophotometer ( Massachusetts , USA ) การกระทำ , ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ด้วยโซลูชั่นสาร หุ้นผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นมิลลิโมลต่อกิโลกรัมเทียบเท่าของสารตัวอย่าง
.
2.6.3 . ใช้ Frap
สั้น 900ll VDO ของรีเอเจนต์ เตรียมสดและอบอุ่นที่
37 C ผสมกับ 150ll ทดสอบตัวอย่าง สารมาตรฐานหรือ
น้ำว่างสารเคมีที่เหมาะสม ใช้ Frap
2.5 มิลลิลิตร บรรจุสารเคมีขนาด 10 มม. tptz สารละลาย HCl 40 มิล พลัส 2.5 มล.
20 มม. และ 25 มิลลิลิตร FeCl3 H20 0.3 M อาซีเตตบัฟเฟอร์ pH 3.6อ่านในการดูดซึมสูงสุด ( 595 nm ) ถ่ายทุก 15 S
ใช้เพอร์กินเอลเมอร์แลมบ์ดา– 25 UV Spectrophotometer และมองเห็น
( Massachusetts , USA ) พร้อม thermostated อัตโนมัติ
ตัวอย่าง positioner . รักษาที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และ
ปฏิกิริยาถูกตรวจสอบได้ถึง 30 นาที สารหุ้นโซลูชั่น
ใช้แสดงเส้นโค้งสอบเทียบ ผลการวิจัยยังแสดง
เป็นมิลลิโมลของสารที่มีต่อกิโลกรัมตัวอย่าง .
2.6.4 . รวมสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมโดยตรงโดยวิธี
Abbr การวัดสารต้านอนุมูลอิสระรวมซีเรียลดิบและไม่ละลายน้ำ ส่วนตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( serpen et al . , 2007 ) โดย Abbr สารละลาย
เตรียมตามที่ระบุไว้ข้างต้นถึงแม้ว่าโซลูชั่นการทำงานที่เตรียมโดยละลายที่มีส่วนผสมของเอทานอล : น้ำ ( 50 : 50 ) งั้น
6 มิลลิลิตร Abbr คือเพิ่มส่วน 10 mg ของตัวอย่างและส่วนผสม vortexed
2 นาทีเพื่อให้ผิวปฏิกิริยากับ Abbr เกิดปฏิกิริยา ปั่นต่อไปที่ 10500g
3 นาที จะนำค่าของด้านข้างใส
วัดที่ 730 นาโนเมตรโดยใช้เพอร์กินเอลเมอร์แลมบ์ดา– 25 UV –มองเห็น
Spectrophotometer ( Massachusetts , USA ) วัดทั้งหมดถูก
แสดงตรง 30 นาทีหลังจากการผสมตัวอย่างกับ Abbr
เกิดปฏิกิริยา ภาษาไทยมีการปฏิบัติตามที่ระบุไว้ข้างต้น สำหรับวิธีมาตรฐาน Abbr .
2.7 . ตัวอย่างโปรตีนรวมเนื้อหา
( 0.800 และ 1.000 กรัม ) ร้อนถึง 1050 C ตาม
992.15 ( โปรตีนโปรตีน ,1995 ) ในรูปแบบ fp-2000 LECO ( LECO เครื่องมือ , มาดริด , สเปน ) โปรตีน / ไนโตรเจนวิเคราะห์เทียบกับ
EDTA ( ดูมาวิธี ) ไนโตรเจนกับปัจจัยการแปลงโปรตีน
ถือว่าเป็น 6.25 % ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นกรัมของโปรตีน /
ผลิตภัณฑ์ 100 g .
2.8 . วิเคราะห์
ทั้งหมดของการวิเคราะห์จำนวนน้อยในที่ซ้ำกัน การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ตามด้วย ดันแคน ทดสอบมีวัตถุประสงค์เพื่อวิเคราะห์ความแตกต่างระหว่างข้อมูล ( P < 0.05 ) การ Statgraphics v5.1
สถิติซอฟต์แวร์ที่ใช้สำหรับการเปรียบเทียบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- เขามีความอดทนกับฉันมากตามเพื่อให้ฉันเรีย
- TURKEY STUNNERSHARBOUR VIEW RESTAURANT
- Animals were housed under conventional c
- พิธีเปิดงาน
- ปากแตกI'd go anywher
- Body clock
- พวกเขาทำเค้กได้อร่อยมาก
- Hi Jean i am aiya and are you my dad fri
- say you are going to tell everyone the i
- Animals were housed under conventional c
- i am so tired and i want to go to bed no
- Scapes 5–15 cm, curved. Leaves 15–40×(1.
- An alternative to this task might be a q
- Take your time to learn
- กระดุม
- Upward land motion detected from repeate
- culture applications
- ฉันไปรับยามาเรียบร้อยฉันคิดการรอคอยที่นา
- รุ่นแรก ปี49All about you
- During the treatmentperiod, the leaf dev
- greatly accelerating both the rate and s
- inventions
- 这样你会轻松
- Now I'm recovered.
