Spores were directly inoculated int

Spores were directly inoculated into 1 L Erlenmeyer flasks containing
300 mL fermentation media (mannitol 20 g, maltose 20 g,
glucose 10 g, monosodium glutamate 10 g, KH2PO4 0.5 g,
MgSO47H2O 0.3 g, yeast extract 3 g and corn steep liquor 1 g, dissolved
in 1 L seawater, pH 6.5). The flasks were incubated under
static conditions at 24 C for 30 days. The whole broth (15 L) was
filtered through cheesecloth to separate into supernatant and
mycelia. The former was extracted with EtOAc (3  15 L) while
the latter was extracted with acetone-H2O (4:1, v/v) (3  5 L).
The acetone extract was evaporated under reduced pressure to afford
an aqueous solution, and then extracted with EtOAc (3  3 L).
The two EtOAc extracts were concentrated together in vacuo to
give a crude gum (15.0 g). The total extract was subjected to VLC
on a silica gel column using step gradient elution with MeOH–
CHCl3 (0:100 ? 50:50). The collected materials were combined
into 6 fractions based on TLC properties. The active fraction 5 (with
an inhibition ratio of 68% against influenza A Virus under the concentration
of 100 lg/mL) from the 20:1 CHCl3–MeOH eluent was
further separated on a Sephadex LH-20 column with CHCl3–MeOH
(1:1). The active fraction 5-3 (with an inhibition ratio of 80%against influenza A Virus under the concentration of 100 lg/mL)
was separated by semipreparative HPLC employing isocratic elution
with MeOH–H2O (25:75, 4.0 mL/min) to yield compounds 1
(3.2 mg) and 2 (6.3 mg). The fraction 5-2 was separated by ODS
cc (MeOH–H2O gradient mixtures) into four subfractions. Subfractions
5-2-1 and 5-2-2 were further purified, respectively by extensive
HPLC MeOH–H2O (70:30 and 65: 35; 4.0 mL/min), to give
compound 4 (2.0 mg), 5 (3.3 mg) and 8 (7.0 mg); 3 (5.1 mg), 6
(3.0 mg) and 7 (4.4 mg). Fractions 5-2-3 and 5-2-4 were subjected
to HPLC MeOH–H2O (75: 25, 4.0 mL/min) separately to afford 9
(6.0 mg), 10 (4.2 mg), 11 (10.3 mg) and 12 (9.2 mg).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ราได้โดยตรง inoculated เป็น 1 L Erlenmeyer ขวดที่ประกอบด้วยสื่อหมัก 300 มล. (mannitol 20 กรัม 20 กรัม maltoseกลูโคส 10 กรัม โมโนโซเดียมกลูตาเมตเป็น 10 กรัม KH2PO4 0.5 กรัมแยก MgSO4 7H2O 0.3 กรัม ยีสต์ 3 กรัม และ 1 กรัม ละลายสุราข้าวโพดสูงชันใน 1 L น้ำทะเล ค่า pH 6.5) ได้รับการกกเบ้าภายใต้เงื่อนไขคงที่ 24 C 30 วัน มีน้ำซุปทั้งหมด (15 ลิตร)กรองผ่านผ้าแบ่ง supernatant และmycelia อดีตถูกสกัด ด้วย EtOAc (3 15 L) ในขณะที่หลังถูกสกัด ด้วยอะซิโตน-H2O (4:1, v/v) (3 5 L)สารสกัดจากอะซีโตนเป็นระเหยภายใต้แรงดันลดลงไปเท่าใดการละลาย และจากนั้น สกัด ด้วย EtOAc (3 3 L)สารสกัดจาก EtOAc 2 มีความเข้มข้นกันใน vacuo ไปให้ฝรั่งดิบ (15.0 กรัม) สารสกัดรวมภายใต้การ VLCในมีซิลิกาเจคอลัมน์ที่ใช้ชะไล่ระดับขั้น MeOH –CHCl3 (0:100 ? 50: 50) วัสดุรวบรวมได้รวมในส่วนที่ 6 ตามคุณสมบัติ TLC ส่วนที่ใช้งานอยู่ 5 (มียับยั้งอัตรา 68% ไข้หวัดใหญ่ไวรัส A ภายใต้ความเข้มข้นของ lg 100/mL) จาก 20:1 CHCl3 – MeOH eluent ถูกการ แบ่งคอลัมน์ Sephadex LH-20 กับ CHCl3 – MeOH(1:1) การใช้งานเศษ 5-3 (มีการยับยั้งอัตราส่วน 80% ไข้หวัดใหญ่ไวรัส A ภายใต้ความเข้มข้น 100 lg/mL)ถูกคั่น ด้วย HPLC ที่ใช้ isocratic คิดชะ semipreparativeมี MeOH – H2O (25:75, 4.0 มล./นาที) เพื่อให้สารประกอบ 1(3.2 มิลลิกรัม) และ 2 (6.3 มิลลิกรัม) เป็นแยกเศษส่วน 5-2 โดย ODScc (MeOH – H2O ผสมไล่ระดับ) เป็น subfractions สี่ Subfractions5-2-1 และ 5-2-2 ได้เพิ่มเติมบริสุทธิ์ ตามลำดับ โดยครอบคลุมHPLC MeOH – H2O (90,000 และ 65:35; 4.0 mL/min), การให้สูตร 4 (2.0 มิลลิกรัม), 5 (3.3 มิลลิกรัม) และ 8 (7.0 มิลลิกรัม); 3 (5.1 มิลลิกรัม) 6(3.0 มิลลิกรัม) และ 7 (4.4 มิลลิกรัม) เศษ 5-2-3 และ 5-2-4 ถูกต้องการ HPLC MeOH – H2O (75:25, 4.0 มล./นาที) แยกต่างหากจะจ่าย 9(6.0 มิลลิกรัม), 10 (4.2 มิลลิกรัม), 11 (10.3 มิลลิกรัม) และ 12 (9.2 มิลลิกรัม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สปอร์ที่ได้รับเชื้อโดยตรงใน 1 ลิตรขวด Erlenmeyer
ที่มีสื่อการหมักมิลลิลิตร300 (แมนนิทอล 20 กรัม, มอลโตส 20 กรัม,
น้ำตาลกลูโคส 10 กรัมผงชูรส 10 กรัม, KH2PO4 0.5 กรัม,
MgSO4? 7H2O 0.3 กรัมสารสกัดจากยีสต์ 3 กรัมและข้าวโพดสุราสูงชัน 1
กรัมละลายในน้ำทะเล1 ลิตรค่า pH 6.5) ขวดถูกบ่มภายใต้เงื่อนไขแบบคงที่ที่ 24 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วัน
ทั้งน้ำซุป (15 ลิตร) ได้รับการกรองผ่านผ้าที่จะแยกออกเป็นใสและเส้นใย อดีตถูกสกัดด้วย EtOAc (3 15 L?) ในขณะที่หลังถูกสกัดด้วยอะซีโตน-H2O (4: 1, v / v). (? 3 5 ลิตร) สารสกัดจากอะซิโตนได้รับการระเหยภายใต้ความกดดันลดลงไปจ่ายสารละลายและสกัดแล้วกับ EtOAc (3? 3 L). ทั้งสองสารสกัด EtOAc มีความเข้มข้นร่วมกันในสุญญากาศเพื่อให้เหงือกดิบ(15.0 กรัม) สารสกัดรวมได้ภายใต้การ VLC ในคอลัมน์ซิลิกาเจลโดยใช้ชะลาดขั้นตอนที่มี MeOH- CHCl3 (0: 50:50 100?) วัสดุที่เก็บรวบรวมได้รวมเป็น 6 เศษส่วนขึ้นอยู่กับคุณสมบัติ TLC ส่วนที่ 5 การใช้งาน (มีอัตราส่วนการยับยั้งจาก68% เมื่อเทียบกับไข้หวัดใหญ่ไวรัสภายใต้ความเข้มข้น100 LG / มิลลิลิตร) จาก 20: 1 ชะ CHCl3-เมธานอลได้รับการแยกออกจากกันต่อไปในSephadex LH-20 คอลัมน์ที่มี CHCl3-เมธานอล(1 1) ส่วนการใช้งาน 5-3 (มีอัตราส่วนการยับยั้งการ 80% ป้องกันไข้หวัดใหญ่ไวรัสภายใต้ความเข้มข้นของแอลจี 100 / มิลลิลิตร) ถูกแยกจากกันโดย semipreparative HPLC จ้างชะ isocratic กับเมธานอล-H2O (25:75, 4.0 มิลลิลิตร / นาที) สารประกอบผลผลิต 1 (3.2 มก.) และ 2 (6.3 มก.) ส่วนที่ 5-2 ถูกแยกออกโดย ODS ซีซี (H2O-เมธานอลผสมลาด) เป็นสี่ subfractions Subfractions 5-2-1 และ 5-2-2 เป็นบริสุทธิ์ต่อไปตามลำดับโดยที่กว้างขวางHPLC-H2O เมธานอล (70:30 และ 65: 35; 4.0 มิลลิลิตร / นาที) เพื่อให้สาร4 (2.0 มก.), 5 (3.3 มก.) และ 8 (7.0 มก.); 3 (5.1 มก.), 6 (3.0 มก.) และ 7 (4.4 มก.) เศษส่วน 5-2-3 และ 5-2-4 ถูกยัดเยียดให้กับเมธานอลHPLC-H2O (75: 25, 4.0 มิลลิลิตร / นาที) แยกที่จะจ่าย 9 (6.0 มก.), 10 (4.2 มก.) 11 (10.3 มก.) และ 12 (9.2 มก.)