Embryos were excised from freshly matured seeds and from
those cold-stratified for 12 weeks. They were fixed with 2.5%
glutaraldehyde (in 1.0% sodium phosphate buffer) and then with
1.0% osmium tetraoxide (in 1.0% sodium phosphate buffer) and
subsequently dehydrated in an ethanol series and transferred into
pure acetone for critical point dehydration (Hitachi Critical Point
Dryer, HCP-2, Japan). One of the cotyledonswas removed from each
embryo to reveal the apical meristem of the plumule or the first
true leaves, and then the embryos were coated with IB-2 Ion Coater
(Eiko Engineering Co., Japan). The plumular apical meristem, first
true leaves and cotyledons were examined with a scanning electron
microscope (SEM) (FEI Inspect S, FEI Company, USA) and photographed.
For transmission electron microscopy (TEM), embryos
were fixed as described above, dehydrated in an acetone series and
embedded in Spurr's resin (Spurr, 1969). Ultra-thin sections were
made by ultramicrotome (Ultracut E), stained with 5% uranyl acetate
aqueous solution and observed with a Hitachi H-7650 TEM
(Hitachi High-Tech, Tokyo, Japan).
ตัวอ่อนที่ถูกตัดจากเมล็ดสุกและสดใหม่จากผู้แซดเย็นเป็นเวลา 12 สัปดาห์
พวกเขาได้รับการแก้ไขด้วย 2.5%
glutaraldehyde (ใน 1.0% โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์) แล้วกับ
1.0% ออสเมียม tetraoxide (ใน 1.0% โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์)
และขาดน้ำต่อมาในซีรีส์เอทานอลและโอนเข้ามาในอะซีโตนบริสุทธิ์สำหรับการคายน้ำจุดสำคัญ
(ฮิตาชิจุดวิกฤต
เครื่องเป่า HCP-2, ญี่ปุ่น) หนึ่งใน cotyledonswas
ออกจากกันตัวอ่อนที่จะเปิดเผยเนื้อเยื่อปลายของขนนกขนหนึ่งหรือครั้งแรกที่ใบจริงแล้วตัวอ่อนที่ถูกเคลือบด้วย
IB-Ion 2 Coater
(Eiko Engineering Co. , ญี่ปุ่น) เนื้อเยื่อปลาย plumular
แรกใบจริงและใบเลี้ยงมีการตรวจสอบที่มีอิเล็กตรอนแบบส่องกราดกล้องจุลทรรศน์ (SEM) (FEI ตรวจสอบ S, เฟ บริษัท สหรัฐอเมริกา) และถ่ายภาพ. สำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (TEM) ตัวอ่อนได้รับการแก้ไขตามที่อธิบายไว้ข้างต้นแห้งในชุดอะซีโตนและฝังตัวอยู่ในเรซินของ Spurr (Spurr, 1969) ส่วนที่บางเฉียบถูกทำโดย ultramicrotome (Ultracut E), ย้อมด้วยสี 5% uranyl acetate สารละลายและตั้งข้อสังเกตกับ บริษัท ฮิตาชิ H-7650 TEM (ฮิตาชิ High-Tech, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)
การแปล กรุณารอสักครู่..
เมื่อถูกตัดจากเมล็ดสดสุกและเย็นจาก
ผู้แบ่งเป็นเวลา 12 สัปดาห์ พวกเขาถูกกำหนดด้วย 2.5 %
กลูตารัลดีไฮด์ ( ใน 1.0 % โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ) แล้วกับ
1.0% ออสเมียม tetraoxide ( ใน 1.0 % โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ) และต่อมาในชุดแห้ง
) และเอทานอลบริสุทธิ์สำหรับการถ่ายโอนลงในจุดที่สำคัญ ( สำหรับจุดวิกฤต
เครื่องเป่า hcp-2 , ญี่ปุ่น )หนึ่งใน cotyledonswas ลบออกจากแต่ละ
ตัวอ่อนที่จะเปิดเผยเนื้อเยื่อเจริญปลายยอดของ plumule หรือใบจริงครั้งแรก
แล้วตัวอ่อนถูกเคลือบด้วยเครื่องเคลือบ ib-2 ไอออน
( เอโกะ Engineering Co . , ญี่ปุ่น ) มีเนื้อเยื่อเจริญปลาย plumular ใบจริงครั้งแรกและมีการแสดงออก
ตรวจดูด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( SEM )
( เฟยเฟยตรวจสอบ s , บริษัท , USA ) และถ่ายภาพ
ส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( TEM ) , ตัวอ่อน
ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ข้างต้น อบแห้งในอะซิโตนและชุด
ฝังในของเรซิน ( สเปอร์สเปอร์ , 1969 ) ส่วนบาง Ultra ถูก
โดย ultramicrotome ( ultracut E ) ย้อมด้วย 5% ยูเรนิลอะซิ
สารละลายและสังเกตกับบริษัท ฮิตาชิ h-7650 TEM
( Hitachi High Tech , โตเกียว , ญี่ปุ่น )
การแปล กรุณารอสักครู่..