MATERIALS AND METHODS
Microorganism Monascus anka GIM 3.592 (deposited in the publicly
accessible culture collection GDMCC/GIMCC, Guangdong Culture Collection Centre
of Microbiology, China) was maintained on potato dextrose agar (PDA) plates and
preserved at 4C. A sub-culture was carried out at 30C for 7 days monthly.
Culture media Pre-inoculum culture medium consisted of glucose 20 g,
peptone 10 g, yeast extract 3 g, KCl 0.5 g, KH2PO4 4 g, ZnSO4$7H2O 0.01 g, and
FeSO4$7H2O 0.01 g in 1 L of double distilled water. Inoculum culture medium and
fermentation culture medium consisted of glucose 50 g, one of the investigated
nitrogen sources (NaNO3 6.44 g or (NH4)2SO4 5.00 g or peptone 8.84 g), KCl 0.5 g,
KH2PO4 4 g, ZnSO4$7H2O 0.01 g, MgSO4$7H2O 0.5 g, and FeSO4$7H2O 0.01 g in 1 L of
double distilled water. The pH of the inoculum culture was adjusted to selected
values by HCl 1 M or NaOH 2 M. The amount of each nitrogen source in the culture
medium was selected to ensure equimolar concentrations of nitrogen (0.076 M).
Cultivation For pre-inoculum cultivation, a suspension of spores was
collected by washing PDA plates with 0.1% tween 80 solution and then approximately
3 106 spores were inoculated into 50 mL pre-inoculum culture medium in
250 mL Erlenmeyer flasks. This cultivation was carried out at 30C, 180 rpm for 30 h
in a shaker (New Brunswick Scientific).
Then, an aliquot of pre-inoculum culture (5 mL) was inoculated into 50 mL
inoculum culture medium in 250 mL Erlenmeyer flasks and incubated at 30C,
180 rpm for 15 h.
For batch fermentations, an aliquot of inoculum culture (150 mL) was inoculated
into 1.5 L of fermentation culture medium with the same composition of the inoculum
culture medium, in 3 L bioreactors (New Brunswick Scientific, USA). The
fermentation conditions were set as follows: agitation 500 rpm, temperature 30C,
aeration rate 1.5 L/min. The pH was kept constant at 2.5, 4.0 or 6.5 during the whole
fermentation period by HCl 1 M or NaOH 2 M. For two-stage pH control fermentations,
pH was kept constant at 2.5 for the first 96 h and then maintained at 6.5
during the following 72 h. During the fermentation, a silicone antifoaming agent was
added when necessary.
Analysis methods An aliquot of fermentation sample (20 ml) was filtered
under vacuum through a 0.8 mm mixed cellulose esters membrane. The filtrate
(extracellular broth) was appropriately diluted to determine the residual glucose
concentration and the extracellular pigments concentration. The absorbance spectrum
of the extracellular broth was recorded by a UV/VIS spectrophotometer (Unico,
USA) from 350 nm to 550 nm at 1 nmintervals. The absorbance units (AU) at specific
wavelengths (410, 470 and 510 nm) were used as an index of the extracellular
pigments concentration. The residual glucose was quantified by the standard 3, 5-
dinitrosalicylic acid (DNS) method.
The mycelia on the filter were washed three times with double distilled water
and collected for intracellular pigments concentration analysis. The mycelia were
resuspended in a volume of acidic aqueous ethanol (70%, v/v, in aqueous HCl, pH 2)
equal to the initial volume of the aliquot (20 mL) and incubated 1 h. The pH of the
ethanol aqueous solution was acidic to prevent orange pigments shifting from orange
to red. The suspension was filtered with a pre-weighed filter paper and the
filtrate (intracellular extract) was subjected to the same pigments quantitation
MATERIALS AND METHODSMicroorganism Monascus anka GIM 3.592 (deposited in the publiclyaccessible culture collection GDMCC/GIMCC, Guangdong Culture Collection Centreof Microbiology, China) was maintained on potato dextrose agar (PDA) plates andpreserved at 4C. A sub-culture was carried out at 30C for 7 days monthly.Culture media Pre-inoculum culture medium consisted of glucose 20 g,peptone 10 g, yeast extract 3 g, KCl 0.5 g, KH2PO4 4 g, ZnSO4$7H2O 0.01 g, andFeSO4$7H2O 0.01 g in 1 L of double distilled water. Inoculum culture medium andfermentation culture medium consisted of glucose 50 g, one of the investigatednitrogen sources (NaNO3 6.44 g or (NH4)2SO4 5.00 g or peptone 8.84 g), KCl 0.5 g,KH2PO4 4 g, ZnSO4$7H2O 0.01 g, MgSO4$7H2O 0.5 g, and FeSO4$7H2O 0.01 g in 1 L ofdouble distilled water. The pH of the inoculum culture was adjusted to selectedvalues by HCl 1 M or NaOH 2 M. The amount of each nitrogen source in the culturemedium was selected to ensure equimolar concentrations of nitrogen (0.076 M).Cultivation For pre-inoculum cultivation, a suspension of spores wascollected by washing PDA plates with 0.1% tween 80 solution and then approximately3 106 spores were inoculated into 50 mL pre-inoculum culture medium in250 mL Erlenmeyer flasks. This cultivation was carried out at 30C, 180 rpm for 30 hin a shaker (New Brunswick Scientific).Then, an aliquot of pre-inoculum culture (5 mL) was inoculated into 50 mLinoculum culture medium in 250 mL Erlenmeyer flasks and incubated at 30C,180 rpm for 15 h.For batch fermentations, an aliquot of inoculum culture (150 mL) was inoculatedinto 1.5 L of fermentation culture medium with the same composition of the inoculumculture medium, in 3 L bioreactors (New Brunswick Scientific, USA). Thefermentation conditions were set as follows: agitation 500 rpm, temperature 30C,aeration rate 1.5 L/min. The pH was kept constant at 2.5, 4.0 or 6.5 during the wholefermentation period by HCl 1 M or NaOH 2 M. For two-stage pH control fermentations,pH was kept constant at 2.5 for the first 96 h and then maintained at 6.5during the following 72 h. During the fermentation, a silicone antifoaming agent wasadded when necessary.Analysis methods An aliquot of fermentation sample (20 ml) was filteredunder vacuum through a 0.8 mm mixed cellulose esters membrane. The filtrate(extracellular broth) was appropriately diluted to determine the residual glucoseconcentration and the extracellular pigments concentration. The absorbance spectrumof the extracellular broth was recorded by a UV/VIS spectrophotometer (Unico,USA) from 350 nm to 550 nm at 1 nmintervals. The absorbance units (AU) at specificwavelengths (410, 470 and 510 nm) were used as an index of the extracellularpigments concentration. The residual glucose was quantified by the standard 3, 5-dinitrosalicylic acid (DNS) method.The mycelia on the filter were washed three times with double distilled waterand collected for intracellular pigments concentration analysis. The mycelia wereresuspended in a volume of acidic aqueous ethanol (70%, v/v, in aqueous HCl, pH 2)equal to the initial volume of the aliquot (20 mL) and incubated 1 h. The pH of theethanol aqueous solution was acidic to prevent orange pigments shifting from orangeto red. The suspension was filtered with a pre-weighed filter paper and thefiltrate (intracellular extract) was subjected to the same pigments quantitation
การแปล กรุณารอสักครู่..

วัสดุและวิธีการจุลินทรีย์ Monascus Anka GIM 3.592 (ฝากไว้ในที่เปิดเผยต่อสาธารณชนคอลเลกชันที่สามารถเข้าถึงวัฒนธรรมGDMCC / GIMCC, Guangdong วัฒนธรรมการเก็บศูนย์จุลชีววิทยา, จีน) ถูกเก็บรักษาไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่ง (PDA) จานและเก็บรักษาไว้ที่4 องศาเซลเซียส วัฒนธรรมย่อยได้ดำเนินการวันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วันรายเดือน. สื่อวัฒนธรรมอาหารเลี้ยง Pre-เชื้อประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคส 20 กรัม, เปปโตน 10 กรัม, สารสกัดจากยีสต์ 3 กรัมโพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัม, KH2PO4 4 กรัม, ZnSO4 $ 7H2O 0.01 กรัมและFeSO4 7H2O $ 0.01 กรัมใน 1 ลิตรของน้ำกลั่นคู่ อาหารเลี้ยงเชื้อและอาหารเลี้ยงหมักประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคส 50 กรัมซึ่งเป็นหนึ่งในการตรวจสอบแหล่งที่มาของไนโตรเจน(NaNO3 6.44 กรัมหรือ (NH4) 2SO4 5.00 กรัมหรือเปปโตน 8.84 กรัม), โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัม, KH2PO4 4 กรัม, ZnSO4 $ 7H2O 0.01 กรัม MgSO4 7H2O $ 0.5 กรัมและ FeSO4 7H2O $ 0.01 กรัมใน 1 ลิตรของน้ำกลั่นคู่ พีเอชของวัฒนธรรมหัวเชื้อที่ถูกปรับเปลี่ยนเพื่อเลือกค่าโดย HCl 1 M NaOH หรือ 2 เมตรจำนวนเงินของแต่ละแหล่งไนโตรเจนในวัฒนธรรมกลางได้รับการคัดเลือกเพื่อให้แน่ใจว่ามีความเข้มข้นของไนโตรเจนequimolar (0.076 M). การเพาะปลูกสำหรับการเพาะปลูกก่อนเชื้อ, การหยุดชะงักของสปอร์เป็นที่เก็บรวบรวมโดยการล้างจานPDA กับ 0.1% ทวี 80 การแก้ปัญหาแล้วประมาณ3 หรือไม่? 106 สปอร์ถูกเชื้อเข้าสู่ 50 มลอาหารเลี้ยงเชื้อก่อนใน250 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer การเพาะปลูกนี้ได้รับการดำเนินการวันที่ 30? C 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 ชั่วโมงในเครื่องปั่น(New Brunswick วิทยาศาสตร์). จากนั้นเป็น aliquot ของวัฒนธรรมก่อนเชื้อ (5 มิลลิลิตร) ได้รับเชื้อเข้าไปใน 50 มลอาหารเลี้ยงเชื้อใน250 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส, 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 ชม. สำหรับการหมักแหนมชุด aliquot ของวัฒนธรรมเชื้อ (150 มิลลิลิตร) ได้รับเชื้อเข้าไป1.5 ลิตรของกลางวัฒนธรรมการหมักที่มีองค์ประกอบเดียวกันของเชื้อกลางวัฒนธรรม3 L bioreactors ( นิวบรันวิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) เงื่อนไขการหมักที่ตั้งดังนี้กวน 500 รอบต่อนาทีอุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส? อัตราการให้อากาศ 1.5 ลิตร / นาที ค่า pH คงที่ที่ 2.5, 4.0 หรือ 6.5 ในช่วงที่ทั้งระยะเวลาในการหมักโดยHCl 1 M NaOH หรือ 2 เมตรสำหรับสองขั้นตอนการหมักแหนมควบคุมค่า pH ค่า pH คงที่ที่ 2.5 ครั้งแรก 96 ชั่วโมงและการบำรุงรักษาที่แล้ว 6.5 ในช่วง ต่อไปนี้ 72 ชั่วโมง ในระหว่างการหมัก, ซิลิโคนตัวแทน antifoaming ถูกเพิ่มเมื่อมีความจำเป็น. วิธีการวิเคราะห์หารของกลุ่มตัวอย่างหมัก (20 มล.) ถูกกรองภายใต้สุญญากาศผ่าน0.8 มมผสมเอสเทอเยื่อเซลลูโลส กรอง(น้ำซุป extracellular) ถูกเจือจางเหมาะสมเพื่อตรวจสอบระดับน้ำตาลที่เหลือความเข้มข้นและความเข้มข้นของสารเม็ดสี สเปกตรัมการดูดกลืนแสงของน้ำซุป extracellular ได้รับการบันทึกโดย UV / VIS spectrophotometer (ยูนิโก้, USA) จาก 350 นาโนเมตรถึง 550 นาโนเมตร ณ วันที่ 1 nmintervals หน่วยการดูดกลืนแสง (AU) เฉพาะที่ความยาวคลื่น(410, 470 และ 510 นาโนเมตร) ถูกนำมาใช้เป็นดัชนีของสารเข้มข้นเม็ดสี กลูโคสที่เหลือได้รับการวัดโดยมาตรฐานที่ 3, 5 กรด dinitrosalicylic (DNS) วิธี. เส้นใยกรองถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นคู่และเก็บเซลล์เม็ดสีที่เข้มข้นของการวิเคราะห์ เส้นใยถูกresuspended ปริมาณเอทานอลในน้ำเป็นกรด (70% ปริมาตร / ปริมาตรในน้ำ HCl ค่า pH 2) เท่ากับปริมาณการเริ่มต้นของการหารนี้ (20 มิลลิลิตร) และบ่ม 1 ชั่วโมง พีเอชของเอทานอลเป็นสารละลายที่เป็นกรดเพื่อป้องกันไม่ให้เม็ดสีส้มเปลี่ยนจากสีส้มเป็นสีแดง ระงับถูกกรองด้วยกระดาษกรองก่อนการชั่งน้ำหนักและการกรอง (สารสกัดเซลล์) ได้ภายใต้การวิเคราะห์เชิงปริมาณเม็ดสีเดียวกัน
การแปล กรุณารอสักครู่..

วัสดุและวิธีการ
จุลินทรีย์เชื้อราแอนก้า คิม 3.592 ( ฝากในสาธารณชนสามารถเข้าถึงคอลเลกชัน gdmcc วัฒนธรรม /
gimcc , Guangdong วัฒนธรรมศูนย์คอลเลกชัน
จุลชีววิทยา , จีน ) ไว้บนจานอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 C .
ซับวัฒนธรรมถูกดำเนินการใน 30 C เป็นเวลา 7 วัน ทุกเดือน
วัฒนธรรมสื่อก่อนโดยสื่อวัฒนธรรม ประกอบด้วยกลูโคส 20 กรัม
extract สารสกัดจากยีสต์ 10 กรัม , 3 กรัม ปริมาณ 0.5 กรัม kh2po4 4 g $ 7h2o znso4 0.01 กรัม และ feso4 7h2o
$ 0.01 กรัมใน 1 คู่ น้ำกลั่น อาหารเลี้ยงเชื้อและการหมักเชื้อ
อาหารเลี้ยงเชื้อประกอบด้วยกลูโคส 50 กรัม หนึ่งในสอบสวน
แหล่งไนโตรเจน ( NaNO3 6.44 กรัมหรือ ( NH4 ) 2so4 5.00 กรัม หรือขจัดกรัมตามลำดับ ) ปริมาณ 0.5 g ,
kh2po4 4 กรัม znso4 $ 7h2o 0.01 กรัม MgSO4 ใ $ 7h2o 0.5 กรัม และ feso4 $ 7h2o 0 .01 กรัมใน 1 ลิตร
คู่น้ำกลั่น pH ของ 3 วัฒนธรรมคือปรับค่าโดยเลือก
1 M หรือ NaOH HCl 2 เมตร ปริมาณของแต่ละแหล่งไนโตรเจนในวัฒนธรรม
กลางถูกเลือกเพื่อให้แน่ใจว่า ๆความเข้มข้นของไนโตรเจน ( 0.076 M )
การเพาะปลูกเพื่อเพาะเชื้อก่อน , ช่วงล่างสปอร์ถูก
เก็บซักแผ่น 0 พีดีเอ .1 tween 80 วิธีการแก้ปัญหาแล้วประมาณ
3 106 สปอร์เป็นเชื้อปริมาณ 50 มิลลิลิตร ก่อนสื่อวัฒนธรรมใน
เออร์เลนเมเยอร์ ขวด 250 ml . การเพาะปลูกการ 30 C 180 รอบ 30 H
ในเครื่องปั่น ( บรุนซ์ใหม่ทางวิทยาศาสตร์ ) .
แล้วเป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรมก่อนเชื้อ ( 5 ml ) เป็นเชื้อ 50 ml
3 วัฒนธรรมอาหารหมักในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตร ขวด บ่มที่ 30
C180 รอบ / นาทีเป็นเวลา 15 ชั่วโมง
สำหรับ fermentations แบทช์เป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรม 3 ( 150 มล. ) เป็นเชื้อ
เป็น 1.5 L ของวัฒนธรรมการหมักอาหารที่มีส่วนประกอบเดียวกัน ของเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 3
, L เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ( บรุนซ์ใหม่ทางวิทยาศาสตร์ , USA )
สภาพการหมักกำหนดดังนี้ อัตราการกวน 500 รอบต่อนาทีอุณหภูมิ 30 C
อัตราการให้อากาศ 1.5 ลิตร / นาที ค่า pH คงที่ที่ 2.5 , 40 หรือ 6.5 ตลอดระยะเวลาการหมักด้วย HCl
1 M หรือ NaOH 2 เมตร สำหรับสองขั้นตอนการควบคุม fermentations
อ , pH คงที่ที่ 2.5 สำหรับแรก 96 H แล้วไว้ที่ 6.5
ช่วงต่อไปนี้ 72 ชั่วโมง ในระหว่างหมัก , ซิลิโคนกันฟองตัวแทน
วิธีการเพิ่มเมื่อจำเป็น เป็นส่วนลงตัวตัวอย่างและการวิเคราะห์ ( 20 มล ) คือกรองสุญญากาศด้วย
08 มม. เอสเทอร์ผสมเซลลูโลสเมมเบรน 148
( และน้ำ ) คืออย่างเหมาะสมเจือจางเพื่อตรวจสอบส่วนที่เหลือกลูโคส
ความเข้มข้นและความเข้มข้นสีภายนอก . นสเปกตรัม
ของน้ำซุปที่มีการบันทึกไว้โดย UV / VIS Spectrophotometer ( Unico
, USA ) จาก 350 nm 550 nm ที่ 1 nmintervals . นหน่วย ( AU )
( 410 , ความยาวคลื่นที่เฉพาะเจาะจง470 และ 510 nm ) ซึ่งใช้เป็นดัชนีของความเข้มข้น
สีภายนอก . กลูโคสที่เหลือก็วัดได้ตามมาตรฐาน 3 , 5 -
dinitrosalicylic acid ( DNS ) .
แต่ละตัวกรองถูกล้างด้วยน้ำกลั่นสองครั้งสามครั้ง และเก็บภายในเซลล์ความเข้มข้น
สี การวิเคราะห์ และเส้นใย
resuspended ในปริมาณกรดสารละลายเอทานอล ( 70% , V / V ,ในสารละลาย HCl , pH 2 )
เท่ากับปริมาณเริ่มต้นของการเทศนา ( 20 มล. ) โดย 1 . pH ของสารละลายเป็นกรด
เอทานอลเพื่อป้องกันสีส้มเปลี่ยนจากสีส้ม
สีแดง ระงับถูกกรองด้วยกระดาษกรอง และก่อนชั่ง
กรอง ( แยกเซลล์ ) เซลล์เม็ดสีต้องเหมือนกัน
การแปล กรุณารอสักครู่..
