Frozen tissues were further diluted

Frozen tissues were further diluted 1:14 (sample:buffer, wt/vol) in ice-cold extraction buffer (10 mMTris with 5mMEDTA, pH 8.0) and immediately homogenized(model PT10/35, Brinkmann Instruments) on iceby applying three 1-min bursts over 5 min. A 1.0-mL aliquot of each tissue homogenate was placed into a 1.5-mL polypropylene, microcentrifuge tube and frozen
(−70°C) for subsequentDNAanalysis using the Hoechst 33258 dye-binding procedure of Labarca and Paigen (1980), modified for a 96-well microtiter plate assay using a fluorometer (FL600, BioTek Instruments Inc.,Highland Park, Winooski, VT). A second 1.0-mL aliquot was placed into a 2.0-mL microcentrifuge tube and assayed for total RNA (Schmidt and Thannhauser, 1945).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แช่แข็งเนื้อเยื่อถูกปรับลดต่อไป 1:14 (ตัวอย่าง: บัฟเฟอร์น้ำหนัก / ปริมาตร) ในบัฟเฟอร์สกัดเย็น (10 mMTris กับ 5mMEDTA ค่า pH 8.0) และหดหายทันที (รุ่น PT10 / 35, เครื่องมือ Brinkmann) บน iceby ใช้สาม 1- นาทีระเบิดในช่วง 5 นาที aliquot 1.0 มิลลิลิตรของแต่ละ homogenate เนื้อเยื่อถูกวางไว้เป็นโพรพิลีน 1.5 มิลลิลิตรหลอดไมโครและแช่แข็ง
(-70 ° C) สำหรับ subsequentDNAanalysis ใช้ Hoechst 33258 ขั้นตอนการย้อมผูกพันของ Labarca และ Paigen (1980) การปรับเปลี่ยนเป็น 96 -well แผ่นไมโครทดสอบโดยใช้ fluorometer (ที่ FL600, Biotek เครื่องมืออิงค์ไฮแลนด์พาร์ค, นุ, VT) aliquot 1.0 มิลลิลิตรที่สองถูกวางลงในหลอดไมโคร 2.0 มิลลิลิตรและ assayed สำหรับ RNA รวม (Schmidt และ Thannhauser, 1945)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เนื้อเยื่อแช่แข็งได้เจือจาง 1 : 14 ( ตัวอย่าง : บัฟเฟอร์ , WT / Vol ) ในการสกัดเย็น บัฟเฟอร์ ( 10 mmtris กับ 5mmedta pH 8.0 ) และทันทีที่บด ( แบบ pt10 / 35 , brinkmann เครื่องมือ ) ใน iceby ใช้สาม 1-min ระเบิดกว่า 5 นาที เป็น 1.0-ml ส่วนลงตัวของแต่ละแยกเนื้อเยื่ออยู่ใน 1.5-ml โพรพิลีน , หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์และแช่แข็ง
( − 70 ° C ) สำหรับ subsequentdnaanalysis ใช้ Hoechst 33258 ย้อมผูกและขั้นตอนของ labarca paigen ( 1980 ) , แก้ไขสำหรับ 96 ก็ ( ใช้แผ่นไมโครฟลู โรมิเตอร์ ( fl600 biotek เครื่องมือ , Inc , Highland Park , Winooski , VT ) ส่วนที่หารลงตัว 1.0-ml ที่สองถูกวางไว้ใน 2.0-ml หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ และปริมาณอาร์เอ็นเอทั้งหมด ( และสำหรับชมิดท์ thannhauser , 1945 )