Materials and methods2.1 Insect rea

Materials and methods
2.1 Insect rearing
The original field populations of T. absoluta that were used in our experiments were collected in 2010 from the coastal areas of Barcelona (Catalonia, Spain) and Castelló de la Plana (Valencia, Spain). The insects were reared in climatic chambers inside ventilated cages (120 × 70 × 125 cm) with tomato plants at 25 ± 2 °C, with a 70 ± 10% relative humidity (RH), and with a 16:8 (Light (h):Dark (h), L:D) photoperiod. On a weekly basis, groups of six tomato plants, measuring about 30 cm in height, were placed inside the cages for feeding and for oviposition. The plants were left undisturbed for five weeks, a period long enough to enable the moths to emerge from the plants and so artificial re-infestation was unnecessary (González-Cabrera et al., 2011). When needed, the eggs were taken directly to be employed for the experiments, or they were gently transferred by using a fine paintbrush to young tomato plants that were located in similar cages, all with the same environmental conditions. After an appropriate time period, the larvae, the pupae, and the adults, were collected and utilized in the experiments.

2.2 Development of Tuta absoluta in tomato fruit
T. absoluta eggs and larvae were used in order to determine their capacity to develop into adulthood in pesticide-free tomato fruits of different commercial varieties: long life tomato cv. Daniela, vine tomato cv. Pitenza, and cherry tomato cv. Syrem. For the egg bioassay, five 24-h old eggs were gently placed near the peduncle by using a fine paintbrush on a fully ripe tomato fruit (cv. Daniela and Pitenza) or on a bunch of five tomato fruits (cv. Syrem). Each fruit or groups of fruits were isolated in a ventilated plastic cage. The control treatment consisted of small tomato plants (cv. Bodar) of three to five leaves that were isolated in ventilated cylindrical cages with five T. absoluta eggs that were placed on the upper side of the largest leaf. The experiments were kept in a climatic chamber at 25 ± 2 °C, 70 ± 10% RH and 16:8 L:D. The number of eggs hatched on each tomato fruit or plant was assessed periodically by using a magnifying glass over the course of 7 days. The number of adults that emerged per each replicate was recorded after 25 days at the end of the experiment. Twenty replicates were conducted for each treatment. Likewise, for the larvae bioassay, three second or third instars were gently placed on the surface of the tomato fruit (cv. Pitenza) by using a fine paintbrush. The larvae were placed on the upper side of small tomato plants (cv. Bodar) within the control treatment. The number of adults that emerged per replicate was recorded after 17 days at the end of the experiment. Twenty replicates were conducted for each treatment.

2.3 Effect of CO2 treatments on Tuta absoluta mortality
Two different methods were used in order to assess the effects of CO2 on the mortality of T. absoluta. The first method consisted of treating the T. absoluta-infested tomatoes to supra atmospheric CO2 levels (98%) at 25 °C for short exposure times (10 h and 20 h). The second method consisted of three CO2 concentrations (95%, 70% and 40%) at two different temperatures (25 °C and 19 °C) at longer exposure times (24 h, 48 h and 72 h).

For the first approach, the T. absoluta eggs, the larvae (third to fourth instars), the pupae, or the adults, were exposed to CO2 in sealed chambers made of Perspex (82 × 62 × 87 cm). These chambers were fitted with inlet and outlet ports through which the CO2 could pass at rates adjusted to yield a concentration of 98% (v/v) inside the cabinet. Gas was allowed to escape from the outlet port through a bubble tube in order to maintain a proper gas mixture in the chambers. The desired gas concentrations were regularly reached 25 min − 30 min after closing the door of the cabinets. The CO2 and O2 levels, the temperature, and the RH, were continuously monitored by using a Control-Tec® system (Tecnidex S.A., Paterna, Spain). The cabinets were installed inside a 40-m3 standard storage room that was also set to the experimental temperature of 25 °C. The following CO2 treatments were applied: i) an air atmosphere at 25 ± 1 °C (control, samples located in the standard cold room); ii) an atmosphere containing 98% CO2 in the air at 25 ± 1 °C for 10 h; and iii) an atmosphere containing 98% CO2 in the air at 25 ± 1 °C for 20 h. In all cases, the RH during the exposure period was 85 ± 5%. The treatments were applied to the eggs from the stock colonies that were individually transferred to the tomato leaflets (five eggs per leaflet). Each replicate consisted of two leaflets (10 eggs) deposited on a layer of agar (2% wt., adaxially) in 90-mm diameter Petri dishes. Five Petri dishes (replicates) were used per treatment (50 eggs). In the case of the larvae, the treatments were applied to artificially infested tomato fruits. The third to fourth instars were individually obtained from the young tomato plants.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
2.1 แมลงเลี้ยง
เดิมประชากรเขตของ T. absoluta ที่ถูกนำมาใช้ในการทดลองของเราได้ถูกรวบรวมในปี 2010 จากพื้นที่ชายฝั่งทะเลของบาร์เซโลนา (คาตาโลเนียสเปน) และปราสาทเดอลาพลานา (บาเลนเซีย, สเปน) แมลงที่ถูกเลี้ยงในห้องภูมิอากาศกรงการระบายอากาศภายใน (120 × 70 × 125 ซม.) กับมะเขือเทศที่ 25 ± 2 องศาเซลเซียสโดยมีความชื้นสัมพัทธ์ 70 ± 10% (RH) และ 16: 8 (แสง (h ) เข้ม (H), L: D) ช่วงแสง เป็นประจำทุกสัปดาห์กลุ่มหกมะเขือเทศวัดประมาณ 30 ซม. ความสูงถูกวางไว้ภายในกรงสำหรับการให้อาหารและการวางไข่ พืชที่ถูกทิ้งไว้ไม่ถูกรบกวนห้าสัปดาห์เป็นระยะเวลานานพอที่จะช่วยให้แมลงเม่าที่จะโผล่ออกมาจากพืชและเทียมเพื่อรบกวนอีกครั้งไม่จำเป็น (González-Cabrera et al. 2011) เมื่อมีความจำเป็นไข่ถูกนำโดยตรงที่จะใช้สำหรับการทดลองหรือพวกเขาถูกย้ายเบา ๆ โดยใช้พู่กันปรับให้มะเขือเทศเล็กที่ตั้งอยู่ในกรงที่คล้ายกันทั้งหมดที่มีสภาพแวดล้อมเดียวกัน หลังจากระยะเวลาที่เหมาะสมที่ตัวอ่อนดักแด้และผู้ใหญ่ที่ถูกเก็บรวบรวมและนำมาใช้ในการทดลอง.

2.2 การพัฒนา Tuta absoluta ในมะเขือเทศผลไม้
ที ไข่และตัวอ่อน absoluta ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบความสามารถในการพัฒนาไปสู่ความเป็นผู้ใหญ่ในปลอดสารพิษผลไม้มะเขือเทศพันธุ์การค้าที่แตกต่างกัน: ชีวิตยาวมะเขือเทศพันธุ์ Daniela มะเขือเทศเถาพันธุ์ Pitenza และมะเขือเทศเชอร์รี่พันธุ์ Syrem สำหรับการทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพไข่ห้า 24-H ไข่เก่าถูกวางเบา ๆ ที่อยู่ใกล้กับดอกโดยใช้พู่กันที่ดีในผลไม้มะเขือเทศสุกเต็มที่ (CV. Daniela และ Pitenza) หรือบนพวงของห้าผลไม้มะเขือเทศ (CV. Syrem) แต่ละผลไม้หรือกลุ่มของผลไม้ที่แยกได้ในกรงพลาสติกอากาศถ่ายเทได้สะดวก การรักษาควบคุมประกอบด้วยมะเขือเทศขนาดเล็ก (CV. Bodar) ของ 3-5 ใบที่ถูกโดดเดี่ยวในการระบายอากาศกรงทรงกระบอกที่มีห้าตัน absoluta ไข่ที่ถูกวางไว้ที่ด้านบนของใบที่ใหญ่ที่สุด การทดลองที่ถูกเก็บไว้ในห้องภูมิอากาศที่อุณหภูมิ 25 ± 2 ° C, 70 ± 10% RH และ 16: 8 L: D จำนวนไข่ที่ฟักออกมาในแต่ละผลไม้มะเขือเทศหรือพืชที่ได้รับการประเมินเป็นระยะ ๆ โดยใช้แว่นขยายในช่วง 7 วัน จำนวนผู้ใหญ่ที่โผล่ออกมาละซ้ำถูกบันทึกไว้หลังจาก 25 วันในตอนท้ายของการทดลอง ยี่สิบซ้ำได้ดำเนินการสำหรับการรักษาแต่ละครั้ง ในทำนองเดียวกันสำหรับการทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพตัวอ่อนสามวัยที่สองหรือสามถูกวางเบา ๆ บนพื้นผิวของมะเขือเทศผลไม้ (CV. Pitenza) โดยใช้พู่กันดี ตัวอ่อนที่ถูกวางไว้ที่ด้านบนของมะเขือเทศขนาดเล็ก (CV. Bodar) ภายในการรักษาควบคุม จำนวนผู้ใหญ่ที่โผล่ออกมาต่อซ้ำถูกบันทึกไว้หลังจาก 17 วันในตอนท้ายของการทดลอง ยี่สิบซ้ำได้ดำเนินการสำหรับการรักษาแต่ละ.

2.3 ผลของการรักษา CO2 ใน Tuta absoluta การตายของ
สองวิธีที่แตกต่างกันถูกนำมาใช้เพื่อประเมินผลกระทบของ CO2 ในการตายของ T. absoluta วิธีแรกประกอบด้วยการรักษา T. มะเขือเทศ absoluta รบกวนเพื่อ Supra ระดับ CO2 ในบรรยากาศ (98%) ที่ 25 ° C สำหรับการเปิดโปงครั้งสั้น (10 ชั่วโมงและ 20 ชั่วโมง) วิธีที่สองประกอบด้วยสามระดับความเข้มข้นของ CO2 (95%, 70% และ 40%) ที่สองอุณหภูมิที่แตกต่างกัน (25 ° C และ 19 ° C) ในช่วงเวลาการเปิดรับอีกต่อไป (24 ชั่วโมง, 48 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมง).

สำหรับวิธีแรก , ที absoluta ไข่ตัวอ่อน (ที่สามเพื่อวัยสี่), ดักแด้หรือผู้ใหญ่ได้สัมผัสกับ CO2 ในห้องปิดผนึกที่ทำจาก Perspex (82 × 62 × 87 ซม.) ห้องเหล่านี้ได้ถูกติดตั้งกับทางเข้าและทางออกพอร์ตผ่านที่ก๊าซ CO2 สามารถผ่านในอัตราที่ปรับเพื่อให้มีความเข้มข้น 98% A (v / v) ภายในตู้ แก๊สได้รับอนุญาตให้หนีออกมาจากพอร์ตเต้าเสียบผ่านท่อฟองเพื่อรักษาส่วนผสมของก๊าซที่เหมาะสมในห้อง ความเข้มข้นของก๊าซที่ต้องการได้รับอย่างสม่ำเสมอถึง 25 นาที - 30 นาทีหลังจากปิดประตูตู้ CO2 ที่ O2 และระดับอุณหภูมิและความชื้นสัมพัทธ์ถูกตรวจสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ระบบควบคุมTec® (Tecnidex SA, Paterna, สเปน) ตู้ถูกติดตั้งอยู่ภายในห้องเก็บของ 40 M3 มาตรฐานที่ถูกกำหนดให้อุณหภูมิการทดลอง 25 ° C การรักษา CO2 ต่อไปนี้ถูกนำไปใช้ i) บรรยากาศอากาศที่อุณหภูมิ 25 ± 1 ° C (การควบคุมตัวอย่างอยู่ในห้องเย็นมาตรฐาน); ii) บรรยากาศที่มี CO2 98% ในอากาศที่อุณหภูมิ 25 ± 1 ° C เป็นเวลา 10 ชั่วโมง; และ iii) บรรยากาศที่มี CO2 98% ในอากาศที่อุณหภูมิ 25 ± 1 ° C เป็นเวลา 20 ชั่วโมง ในทุกกรณีที่ RH ในช่วงระยะเวลาการเปิดรับแสง 85 ± 5% การรักษาที่ถูกนำไปใช้กับไข่จากอาณานิคมของหุ้นที่ถูกโอนเป็นรายบุคคลเพื่อแผ่นพับมะเขือเทศ (ห้าฟองต่อใบปลิว) แต่ละซ้ำประกอบด้วยสองแผ่นพับ (10 ไข่) มาเก็บไว้ในชั้นของวุ้น A (2% WT. adaxially) ใน 90 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางจานเลี้ยงเชื้อ ห้าจานเลี้ยงเชื้อ (ซ้ำ) ถูกนำมาใช้ต่อการรักษา (50 ไข่) ในกรณีของตัวอ่อน, การรักษาที่ถูกนำไปใช้กับผลไม้เทียมรบกวนมะเขือเทศ สามถึงสี่วัยที่ได้รับเป็นรายบุคคลจากมะเขือเทศหนุ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ2.1 การเลี้ยงแมลงสนามเดิมของ absoluta ประชากรที่ใช้ในการทดลองของเราถูกเก็บใน 2010 จากบริเวณชายฝั่งของบาร์เซโลน่า ( สเปน , สเปน ) และกา ตลó de la Plana ( วาเลนเซีย ) แมลงที่ถูกเลี้ยงในกรง ภายในห้องอากาศถ่ายเท ( 120 × 70 × 125 ซม. ) กับต้นมะเขือเทศที่ 25 ± 2 ° C , 70 ± 10 ความชื้นสัมพัทธ์ ( RH ) และด้วย 16 : 8 ( แสง ( H ) : มืด ( H ) L : D ) ต่อ . ในสัปดาห์ , กลุ่มของหกมะเขือเทศ , วัดประมาณ 30 เซนติเมตร ความสูงอยู่ภายในกรงเพื่อให้อาหารและการวางไข่ . พืชที่ถูกซ้ายโดยห้าสัปดาห์ ระยะเวลานานพอที่จะช่วยให้แมลงโผล่จากพืชและจะมาเทียมไม่จำเป็น ( gonz . kgm lez ชอบแล้ว et al . , 2011 ) เมื่อต้องการ ไข่ถูกโดยตรงเพื่อใช้ในการทดลองหรือพวกเขาเบา ๆ โอน โดยใช้พู่กันก็ได้หนุ่ม มะเขือเทศที่ได้อยู่ในกรงที่คล้ายกันทั้งหมดเดียวกันกับสภาพแวดล้อม . หลังจากระยะเวลาที่เหมาะสม เวลาที่ตัวอ่อน และดักแด้ และผู้ใหญ่ คือข้อมูลที่ใช้ในการทดลอง2.2 การพัฒนา tuta absoluta ในผลมะเขือเทศต. absoluta ไข่และตัวอ่อนถูกใช้เพื่อตรวจสอบความสามารถของพวกเขาที่จะพัฒนาเป็นผู้ใหญ่ในแมลงฟรีมะเขือเทศผลไม้พันธุ์การค้าที่แตกต่างกัน : มะเขือเทศพันธุ์ชีวิตยาว Daniela , เถามะเขือเทศพันธุ์ pitenza และพันธุ์มะเขือเทศเชอร์รี่ syrem . สำหรับไข่ว่าไข่เก่า ห้า 24-h ก็ค่อยๆ วางใกล้ก้าน โดยใช้พู่กันดี ในผลมะเขือเทศสุกพันธุ์ และที่ตั้ง pitenza ) หรือในกลุ่มของห้ามะเขือเทศผลไม้พันธุ์ syrem ) ผลไม้แต่ละกลุ่ม หรือผลไม้ที่แยกได้ในแกลลอนพลาสติก กรง การรักษาควบคุมจำนวนพืชมะเขือเทศเล็กพันธุ์ bodar ) สามถึงห้าใบที่ถูกแยกกรงโปร่งทรงกระบอกกับห้า ต. absoluta ไข่ที่ถูกวางไว้บนด้านบนของใบที่ใหญ่ที่สุด ซึ่งเก็บไว้ในหอ climatic 25 ± 2 ° C , 70 ± 10 เปอร์เซ็นต์ และ 16 : 8 l : D . จำนวนไข่ที่ฟักในแต่ละมะเขือเทศผลไม้หรือพืชก็มีการประเมินเป็นระยะ ๆโดยการใช้แว่นขยายมากกว่าหลักสูตรของ 7 วัน จำนวนของผู้ใหญ่ที่ออกมาในแต่ละซ้ำถูกบันทึกหลังจาก 25 วัน เมื่อสิ้นสุดการทดลอง ยี่สิบนาที การรักษาแต่ละ อนึ่ง เพื่อให้ตัวอ่อนโดยวิธีที่สองและสาม , สามคือค่อยๆวางไว้บนพื้นผิวของผลไม้มะเขือเทศพันธุ์ pitenza ) โดยใช้พู่กันก็ได้ ตัวอ่อนที่ถูกวางไว้บนด้านบนของพืชมะเขือเทศเล็กพันธุ์ bodar ) ในการรักษาควบคุม จำนวนของผู้ใหญ่ที่ออกมาต่อทำซ้ำบันทึกหลังจาก 17 วัน เมื่อสิ้นสุดการทดลอง ยี่สิบนาที การรักษาแต่ละ2.3 ผลของการรักษาของ CO2 ใน tuta absoluta อัตราการตายสองวิธีที่แตกต่างกันที่ใช้ในการประเมินผลของคาร์บอนไดออกไซด์ต่ออัตราการตายของ ต. absoluta . วิธีแรกคือ การรักษา ต. absoluta รบกวนมะเขือเทศ Supra บรรยากาศ CO2 ระดับ ( 98% ) ที่อุณหภูมิ 25 ° C ครั้งแสงสั้น ( 10 ชั่วโมง และ 20 ชั่วโมง ) วิธีที่สอง ประกอบด้วย 3 ความเข้มข้น CO2 ( 95 % , 70 % และ 40 % ) ที่ 2 ( 25 ° C และอุณหภูมิที่แตกต่างกัน 19 ° C ) เวลาเปิดรับอีกต่อไป ( 48 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมง 24 ชั่วโมง )สำหรับวิธีแรก ที่ ต. absoluta ไข่ ตัวอ่อน ( สามวัยที่สี่ ) , ดักแด้ หรือผู้ใหญ่ได้รับ CO2 ในห้องปิดผนึกทำด้วย Perspex ( 1 × 62 × 87 ซม. ) ห้องผู้พิพากษาเหล่านี้ถูกติดตั้งกับท่อและพอร์ตเต้าเสียบที่ CO2 สามารถผ่านในอัตราที่ปรับผลตอบแทนร้อยละ 98 % ( v / v ) ภายในตู้ ก๊าซที่ได้รับอนุญาตที่จะหลบหนีจากเต้าเสียบพอร์ตผ่านฟองหลอดเพื่อรักษาก๊าซผสมที่เหมาะสม ในส่วน ความเข้มข้นของก๊าซที่ต้องการอยู่เป็นประจำถึง 25 นาที− 30 นาทีหลังจากปิดประตูของตู้ CO2 และ O2 ระดับอุณหภูมิ และความชื้นสัมพัทธ์มีการติดตามอย่างต่อเนื่อง โดยใช้เทค®ควบคุมระบบ ( tecnidex SA , Paterna , สเปน ) ตู้ติดตั้งภายใน 40-m3 มาตรฐานกระเป๋ามันยังตั้งอุณหภูมิที่ 25 องศา ทดลองต่อไปนี้การใช้ CO2 : ) อากาศที่ 25 ± 1 ° C ( ควบคุมตัวอย่างอยู่ในห้องเย็นมาตรฐาน ) ; 2 ) บรรยากาศที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 98% ในอากาศที่ 25 ± 1 ° C 10 H ; และ 3 ) บรรยากาศที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 98% ในอากาศที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 20 ชั่วโมง ± 1 ในทุกคดี ใช้ในช่วงระยะเวลาการ 85 ± 5% วิธีที่ใช้กับไข่จากหุ้นอาณานิคมที่ถูกแยกส่งไปมะเขือเทศแผ่นพับ ( ห้าฟอง / ใบปลิว ในแต่ละซ้ำประกอบด้วย 2 แผ่นพับ ( 10 ฟอง ) ฝากไว้บนชั้นของวุ้น ( 2 % โดยน้ำหนัก adaxially , ) 90 มม. เส้นผ่าศูนย์กลางจานเพาะเลี้ยง ห้าจานเลี้ยงเชื้อ ( ซ้ำ ) ใช้ต่อรักษา ( 50 ไข่ ) ในกรณีของตัวอ่อน การรักษาที่ใช้เทียม รบกวนผลไม้มะเขือเทศ 3 วัยสี่แยกได้จากพืชมะเขือเทศยัง