C. beijerinckii ATCC 8260, C. difficile 3195 (CanBiocin Inc.,
Edmonton, AB), C. sporogenes ATCC 7955, and B. amyloliquefaciens
FAD 11/2 were inoculated from endospore stocks, maintained
at80
C in 60% glycerol in sterile water, into Reinforced Clostridial
Medium (RCM; Difco, Becton, Dickinson and Company, Sparks, USA)
broth and incubated anaerobically (Clostridium spp.) or aerobically
(B. amyloliquefaciens FAD 11/2) at 37
C. Weihenstephan Südhang
(WSH) medium was prepared as described by Margosch et al.
(2004a). Anaerobic handling of cultures was performed in an
anaerobic chamber. Cultures were sporulated by plating onto the
surface of WSH agar that was incubated anaerobically or aerobically
at 37
C. Following 14 d of incubation, sporulation was confirmed by
phase-contrast microscopy. Endospores were harvested from the
surface of WSH agar plates by washing the surface of the plates with
sterile 0.9% saline. Harvested endospores were washedfive times by
centrifugation at 2700 g and re-suspended in sterile 0.9% saline.
Endospore suspensions were standardized to OD600 values of 0.5,
1.5, and 2.0 in sterile 0.9% saline. Endospore suspensions were plated
onto RCM agar and incubated anaerobically or aerobically at 37
C
for 6 d to verify that increasing OD600 values corresponded to an
increase in the density of endospore populations. An OD600 of 2.0
equated to approximately 108
endospores/ml for each Clostridium
spp. and B. amyloliquefaciens FAD 11/2. Endospore stocks were
stored at 20
C. Sterile 0.9% saline was used as the endospore
suspension medium throughout subsequent experiments.
C. beijerinckii ATCC 8260, C. dif Fi Cile 3195 (CanBiocin อิงค์
Edmonton, AB), C. sporogenes ATCC 7955 และ B. amyloliquefaciens
FAD 11/2 ถูกเชื้อจากหุ้น endospore การบำรุงรักษา
ที่? 80?
C ในกลีเซอรีน 60% ในน้ำหมันเข้าไปเสริม Clostridial
กลาง (RCM; Difco, Becton ดิกคินสันและ บริษัท สปาร์ก, ประเทศสหรัฐอเมริกา)
น้ำซุปและบ่มแบบไม่ใช้อากาศ (spp. Clostridium) หรือใช้ออกซิเจน
(B. amyloliquefaciens FAD 11/2) ที่อุณหภูมิ 37?
C. Weihenstephan Südhang
(WSH) กลางได้จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้โดย Margosch et al.
(2004a) การจัดการ Anaerobic ของวัฒนธรรมที่ได้รับการดำเนินการใน
ห้องแบบไม่ใช้ออกซิเจน วัฒนธรรมถูก sporulated โดยชุบลงบน
พื้นผิวของวุ้น WSH ที่ถูกบ่มแบบไม่ใช้อากาศหรือออกซิเจน
ที่อุณหภูมิ 37?
C. ต่อไปนี้ 14 D ของการบ่มสร้างสปอร์เป็นสายแย้ง rmed โดย
ใช้กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้าม สปอร์ได้ถูกเก็บเกี่ยวจาก
พื้นผิวของแผ่นวุ้น WSH ด้วยการล้างพื้นผิวของแผ่นเปลือกโลกที่มี
การฆ่าเชื้อน้ำเกลือ 0.9% สปอร์ได้เก็บเกี่ยวถูกล้างไฟและครั้งโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 2700? กรัมและอีกครั้งที่ลอยอยู่ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ 0.9%.
สนอง Endospore ให้เป็นมาตรฐานกับค่า OD600 0.5,
1.5 และ 2.0 ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ 0.9% สนอง Endospore ถูกชุบ
ลงบนวุ้น RCM และบ่มแบบไม่ใช้อากาศหรือออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37?
C
เป็นเวลา 6 วันในการตรวจสอบว่าการเพิ่มค่า OD600 สอดคล้องกับ
การเพิ่มขึ้นของความหนาแน่นของประชากร endospore OD600 2.0
บรรจุประมาณ 108
สปอร์ / มลสำหรับแต่ละ Clostridium
spp และ B. amyloliquefaciens FAD 11/2 หุ้น Endospore ถูก
เก็บไว้ที่? 20?
C. หมันน้ำเกลือ 0.9% ถูกใช้เป็น endospore
กลางระงับตลอดการทดลองที่ตามมา
การแปล กรุณารอสักครู่..

C . beijerinckii ATCC 8260 , C . ดิฟจึง ไซล์ 3195 ( canbiocin อิงค์
Edmonton , AB ) , C . sporogenes ATCC 7955 และพ. amyloliquefaciens
แฟชั่น 11 / 2 ปลูกเชื้อจากเอนโดสปอร์หุ้นไว้ที่ 80
C ในกลีเซอรอล 60% ในน้ำหมันเข้ามาเสริม clostridial
ขนาดกลาง ( จำนวน difco ; เบคตอนดิกคินสันและ บริษัท , , , ประกายไฟ , USA )
broth บ่มพ ( Clostridium spp . ) หรือ aerobically
( Bamyloliquefaciens แฟชั่น 11 / 2 ) ที่อุณหภูมิ 37
C weihenstephan S ü dhang
( หวังว่า ) กลางเตรียมตามที่อธิบายไว้โดย margosch et al .
( 2004a ) การจัดการระบบของวัฒนธรรมในการปฏิบัติการ
ห้องแบบไม่ใช้ออกซิเจน วัฒนธรรมถูกสร้างสปอร์มากโดยชุบลงบนพื้นผิวที่เป็นวุ้น
หวังว่าบ่มพหรือ aerobically
37
C . ต่อไปนี้ 14 D ของระยะเวลาการถ่ายทอดด้วย
rmed เป็นคอนกล้องจุลทรรศน์ตรงกันข้ามเฟส นโดสปอรถูกเก็บเกี่ยวจากพื้นผิวของแผ่นวุ้น
หวังว่าด้วยการล้างพื้นผิวของแผ่นกับ
เป็นหมัน 0.9% น้ำเกลือ นโดสปอร ) จึงได้เก็บเกี่ยวซักครั้ง
3 ที่ 2700 กรัมและแขวนลอยใน 0.9% น้ำเกลือปลอดเชื้อ .
เอนโดสปอร์แขวนลอยถูกมาตรฐานค่า od600 0.5
1.5 และ 2.0 ในการฆ่าเชื้อ 0.9% น้ำเกลือเอนโดสปอร์แขวนลอยถูกชุบวุ้น
ลงจำนวนบ่มพหรือ aerobically 37
C
6 D เพื่อตรวจสอบว่า od600 เพิ่มคุณค่าของการเพิ่มความหนาแน่นของประชากร
เอนโดสปอร์ . การ od600 2.0
equated ประมาณ 108
นโดสปอร / ml สำหรับแต่ละ Clostridium spp . และ พ. amyloliquefaciens
แฟชั่น 11 / 2 หุ้นเอนโดสปอร์ถูกเก็บไว้ที่
C 20 เป็นหมัน 09 % เกลือถูกใช้เป็นเอนโดสปอร์
ระงับกลางตลอดการทดลองที่ตามมา
การแปล กรุณารอสักครู่..
