Glutathione enrichment and concentr

Glutathione enrichment and concentration
Analysis of GSH will be performed on a LC-Isolink interface coupled to a Delta XP isotope ratio mass spectrometer (LC-IRMS) (Thermo Fisher, Bremen, Germany) using a recently developed method [13]. This highly sensitive method requires only a very small sample and does not require derivatization of the sample.

Glycine enrichments
The erythrocyte enrichment of 13C glycine will be measured by gas chromatography-mass spectrometry (GCMS) as its ethyl chloroformate (ECF) ester derivatives, using a MSD 5975 C Agilent GCMS (Agilent Technologies, Amstelveen, The Netherlands). Briefly, 25-μl aliquots of the remaining supernatant used for the GSH analysis will be acidified by adding 50 μl of 0.1 M HCl and diluted with 125 μl of distilled water. ECF derivatization of the samples will be performed according to a modified procedure of Hušek [14]. A CP-Sil 17 column (25 m × 0.25 mm id, 0.12-μm film thickness; Varian, Middelburg, The Netherlands) will be used for the separation. The samples will be measured using a selected ion monitoring mode (SIM) method. The mass fragments with a mass to charge (m/z) of 102.1 for unenriched (M)and an m/z 103.1 for the enriched (M + 1) glycine, respectively, have been selected for this purpose.

Calculations
The FSRGSH represents the fraction of the total intraerythrocytic GSH pool that is renewed per unit of time and is expressed as %/d.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กลูตาไธโอนเพิ่มคุณค่าและความเข้มข้นจะดำเนินการวิเคราะห์ของ GSH บนอินเตอร์เฟซ LC Isolink ควบคู่กับการเดลต้า XP ไอโซโทปอัตรามวลสเปกโตรมิเตอร์ (LC-IRMS) (เทอร์โม Fisher เบรเมน เยอรมนี) โดยใช้วิธีการพัฒนาเมื่อเร็ว ๆ นี้ [13] วิธีนี้มีความไวสูงต้องการเพียงตัวอย่างเล็กมาก และไม่ต้องการ derivatization ตัวอย่างGlycine enrichmentsเพิ่มคุณค่าของเม็ดเลือดแดงของ glycine 13C จะถูกวัด โดยมวล chromatography ก๊าซหลัก (GCMS) เป็นเอทิล chloroformate (ECF) เอสเทอร์อนุพันธ์ ใช้สถาน 5975 C Agilent GCMS (Agilent เทคโนโลยี อัมสเทลวีน ประเทศเนเธอร์แลนด์) สั้น ๆ 25 μl aliquots ของ supernatant ที่เหลือที่ใช้สำหรับวิเคราะห์ GSH จะกรดเพิ่ม 50 μl ของ 0.1 M HCl และกับ μl 125 ของน้ำกลั่น Derivatization ECF ตัวอย่างจะดำเนินการตามขั้นตอนการแก้ไขของ Hušek [14] คอลัมน์ 17 ภาษาศาสตร์ CP (รหัส 25 เมตร × 0.25 mm ความหนาของฟิล์ม 0.12 μ m Varian ออสเตรเลียและแปซิฟิกใต้ ประเทศเนเธอร์แลนด์) จะใช้สำหรับการแยก ตัวอย่างจะวัดโดยใช้ไอออนเลือกที่โหมด (SIM) วิธีการตรวจสอบ ส่วนมวลชนกับมวลการประจุ (m/z) 102.1 unenriched (M) และมี m/z 103.1 สำหรับการอุดม (M + 1) glycine ตามลำดับ การเลือกสำหรับวัตถุประสงค์นี้คำนวณFSRGSH การแทนเศษส่วนของสระว่ายน้ำ GSH intraerythrocytic ทั้งหมดที่มีการต่ออายุต่อหน่วยของเวลา และแสดงเป็น% / d

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเพิ่มปริมาณกลูตาไธโอนและความเข้มข้นของ
การวิเคราะห์ GSH จะได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับอินเตอร์เฟซ LC-Isolink คู่กับเดลต้า XP อัตราส่วนไอโซโทปมวลสเปกโตรมิเตอร์ (LC-IRMS) (เทอร์โมฟิชเชอร์เบรเมนเยอรมนี) โดยใช้วิธีการพัฒนาเมื่อเร็ว ๆ [13] วิธีนี้มีความไวสูงต้องใช้เพียงตัวอย่างเล็กมากและไม่ต้องใช้อนุพันธ์ของกลุ่มตัวอย่าง. Glycine enrichments คุณค่าของเม็ดเลือดแดงของ 13C glycine จะมีการวัดโดย spectrometry Gas Chromatography มวล (GCMS) เป็น chloroformate เอทิลมัน (ECF) เอสเตอร์สัญญาซื้อขายล่วงหน้าโดยใช้ เอ็มเอส 5975 ซี Agilent GCMS (Agilent Technologies, Amstelveen, เนเธอร์แลนด์) สั้น ๆ , 25 ไมโครลิตร aliquots ของสารละลายที่เหลือที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ GSH จะได้รับกรดโดยการเพิ่ม 50 ไมโครลิตร 0.1 M HCl และเจือจางด้วย 125 ไมโครลิตรของน้ำกลั่น ECF อนุพันธ์ของกลุ่มตัวอย่างจะดำเนินการตามขั้นตอนการแก้ไขของHušek [14] ซีพี-Sil 17 คอลัมน์ (25 เมตร× 0.25 มิลลิเมตร id, 0.12 ไมครอนความหนาของฟิล์ม; Varian, มิดเดลเบิร์ก, เนเธอร์แลนด์) จะใช้สำหรับการแยก กลุ่มตัวอย่างจะได้รับการวัดโดยใช้โหมดการตรวจสอบไอออนเลือก (SIM) วิธีการ เศษมวลที่มีมวลที่จะเรียกเก็บค่าบริการ (m / z) 102.1 สำหรับ unenriched (M) และ M / z 103.1 สำหรับอุดม (M + 1) glycine ตามลำดับได้รับการคัดเลือกเพื่อวัตถุประสงค์นี้. คำนวณFSRGSH หมายถึง ส่วนของสระว่ายน้ำรวม GSH intraerythrocytic ที่จะต่ออายุต่อหน่วยของเวลาและจะแสดงเป็น% / D

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และเสริมกลูต้าไธโอนเข้มข้นการวิเคราะห์ GSH จะดำเนินการใน LC isolink อินเตอร์เฟซคู่กับ Delta XP อัตราส่วนของไอโซโทปแมสสเปกโตรมิเตอร์ ( lc-irms ) ( Thermo Fisher , เบรเมน , เยอรมัน ) โดยใช้วิธีที่พัฒนาขึ้นเมื่อเร็ว ๆนี้ [ 13 ] วิธีนี้ต้องใช้ความไวสูงเพียงเล็กน้อย และไม่ต้องใช้กับตัวอย่างของตัวอย่างenrichments ไกลซีนเม็ดเลือดแดงเสริม 13C ไกลซีนจะวัดโดยสัปดาห์แก๊ส spectrometry ( GCMS ) เป็นสารคลอโรฟอร์เมต ( ecf ) อนุพันธ์เอสเทอร์โดยใช้เอ็มเอส 5975 C Agilent GCMS ( Agilent Technologies , amstelveen , เนเธอร์แลนด์ ) สั้น , 25 - μผมเฉยๆที่เหลือที่นำใช้ในการวิเคราะห์ GSH จะปรับโดยการเพิ่มμ 0.1 M HCl 50 ลิตรและลิตร 125 μเจือจางด้วยน้ำกลั่น ecf กับของตัวอย่าง จะดำเนินการตามขั้นตอนการดัดแปลงของฮูš EK [ 14 ] คอลัมน์ CP ซิล 17 ( 25 ม.  ×  0.25 mm ID , 0.12 - μเมตร ความหนาของฟิล์ม ; เครื่อง มิดเดิลเบิร์ก , เนเธอร์แลนด์ ) จะใช้สำหรับการแยก ตัวอย่างจะถูกวัดโดยใช้โหมดการเลือกไอออน ( SIM ) วิธี มวลสารเศษกับมวลประจุ ( M / Z ) ของ 102.1 สำหรับ unenriched ( M ) และ M / Z 103.1 สำหรับอุดม ( M   +   1 ) ไกลซีนตามลำดับ ได้รับเลือกสำหรับวัตถุประสงค์นี้การคํานวณการ fsrgsh เป็นเศษส่วนของจำนวน intraerythrocytic GSH Pool ที่ต่ออายุ ต่อหน่วยเวลา และแสดงเป็น % / วัน