Department of Food Engineering, Uni

Department of Food Engineering, University of Campinas, 13083-970 Campinas, SP, Brazil
Received 30 September 2006; received in revised form 31 May 2007; accepted 2 August 2007
Available online 7 August 2007

2.1. Sample collection and yeast isolation
Fresh fruits and flowers were collected from the Amazon and
Atlantic Forests and the Cerrado and Pantanal areas of Brazil.
The samples collected were inoculated into 125 ml Erlenmeyer
flasks containing 25 ml of a standard medium consisting of 2%
yeast extract, 5% sucrose, 1% NaNO3, 0.01% MgSO4·7H2O,
0.1% K2HPO4 (pH 5.5) and incubated at 25 ◦C in a reciprocal
shaker (150 rpm) for 72 h [5].
The cultures were streaked onto plate media (PDA, WLN
and Inulin agar), supplemented with nalidixic acid and ampicilin
(50 ppm, pharmaceutical grades) for bacterial inhibition.
The WLN agar (Wallerstein Laboratory nutrient agar) is a
complex medium that provides easy differentiation of colonies
by yeast morphology. It consists of (per litre): 4 g yeast extract;
5 g bactocasitone; 50 g dextrose; 550 mg KH2PO4; 125 mg KCl;
250 mg MgSO4·7H2O; 2.5 mg FeCl3; 2.5 mg MnSO4; 22mg
Bromocresol green and 20 g agar.
Inulin agar medium was used to screen for inulinase producing
yeasts, and showed the following composition (per litre):
20 g inulin (Raftline-Orafti); 1 g yeast extract; 3 g NaNO3;
500 mg MgSO4·7H2O; 200 mg MnSO4; 1g K2HPO4 and 20 g
agar.
The pH values of the media were 5.0, and the cultures were
grownon the agar plates at 25 ◦Cfor 48–72 h. Individual colonies
were transferred to PDA plates to avoid contamination and the
strains were maintained at 4 ◦C in GYMP-agar slants (2% glucose;
0.5% yeast extract; 1% malt extract; 0.2% KH2PO4 and
2% agar).
2.2. Primary screening: enzyme activity determination
Loopfuls of cells (from each strain), sub cultured on GYMP
agar slants, were inoculated into 10 ml of standard medium in
test tubes and cultivated at 25 ◦C for 24 h. After adequate development
of the cultures, they were transferred into 500 ml flasks
(with baffles) containing a further 100 ml of the same medium,
and cultivated aerobically at 25 ◦C for 72 h in a reciprocal shaker
(150 rpm).
Samples were collected after 24, 48 and 72 h, the cells harvested
by centrifugation at 6000×g (10 min, 10 ◦C), and the
cell-free supernatants used to screen for transfructosylating
activity.
2.3. Secondary screening: oligosaccharide production
Strains shown to be potential producers of fructofuranosidase
activity (FA) and transfructosylating activity (FTA) underwent a
secondary screening procedure, with monitoring of the oligosaccharide
production.
The reaction was performed at 50 ◦C in 50mM sodium
acetate buffer (pH 5.0) containing 60% (w/v) sucrose with an
enzyme: reaction medium (v/v) ratio of 1:10. Samples were
taken at appropriate times during the reaction, inactivated in
boiling water and the oligosaccharide composition analysed by
ion chromatography (HPLC-PAD).
2.4. Strain genus identification procedures
The genera were identified by the methodology described in
“Key to specimen and genera” by Kregger-van-Rij [12].
2.5. Prebiotic effect
The growth of Bifidobacterium longum (BL-04, Rhodia)
using the FOS produced as the carbon source, was studied by
preparing a modifiedMRSmedium containing 0.05% l-cysteine
and about 0.20% carbohydrate (Glucose or FOS). Strain development
was monitored from the optical density at 595 nm (OD)
and by carbohydrate consumption (HPLC-PAD). Growth on glucose
was considered as the positive control and growth on MRS
with no carbohydrate source (basalMRS)as the negative control

2.6. Enzyme properties
As a guide for future studies on the enzyme kinetics and
mechanisms some properties of the extra-cellular enzymes
were studied. Thus, the enzyme activities (initial reaction rate)
with substrates of 2% and 50% sucrose and 2% inulin in
50mM sodium acetate buffer (pH 4.5) at 50 ◦C were measured.
Oligosaccharides were produced by incubating the enzyme
(1 FTA/ml) in 0.5%, 5% and 50% sucrose (sodium acetate buffer
50 mM, pH 4.5), at 50 ◦C for 72 h.
The enzyme was concentrated by precipitation from a cell
free culture broth, using ethanol at 4 ◦C to the required concentration.
Precipitation with 70% ethanol and a two-step fractional
precipitation (first adding ethanol to 50% saturation, centrifuging,
and then adding more ethanol up to 70%) were tested.
The cell-free supernatant and the enzyme rich precipitate were
collected by centrifugation (6000×g, 4◦C, 10 min). Both the
enzyme activities and protein concentration were analysed.
2.7. Enzyme activity assay
The reaction medium to determine enzyme activity consisted
of 50% sucrose in 50mM sodium acetate buffer (pH 4.5) and a
10% adequately diluted enzyme suspension, incubated at 50 ◦C.
Samples were collected at constant time intervals for 30 min
and assayed for glucose (glucose-oxidase commercial kit) and
reducing sugars (Somogi-Nelson method).
Sucrose conversion by fructofuranosidase yields glucose and
fructose. However, in th

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ภาควิชาอาหารวิศวกรรมศาสตร์ มหาวิทยาลัยบราซิเลีย 13083-970 บราซิเลีย SP บราซิลรับ 30 2549 กันยายน ได้รับในแบบฟอร์มที่ปรับปรุง 31 2550 พฤษภาคม ยอมรับ 2 2550 สิงหาคมออนไลน์อยู่ 7 2550 สิงหาคม2.1. ตัวอย่างแยกที่เก็บรวบรวมและยีสต์ผลไม้และดอกไม้ถูกรวบรวมมาจากอะเมซอน และป่าแอตแลนติกและพื้นที่ Cerrado และ Pantanal ของบราซิลตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ inoculated ใน Erlenmeyer 125 มล.ขวดที่ประกอบด้วยสื่อกลางมาตรฐานประกอบด้วย 2% ปริมาตร 25 มิลลิลิตรสารสกัดจากยีสต์ น้ำตาลซูโครส 5%, 1% NaNO3, 0.01% MgSO4·7H2O0.1% K2HPO4 (pH 5.5) และรับการกกที่ 25 ◦C ในเป็นต้นปั่น (150 rpm) สำหรับ 72 ชั่วโมง [5]วัฒนธรรมถูกลายลงแผ่นสื่อ (PDA, WLNและอินนูลิวุ้น), เสริม ด้วยกรดนาลิดิซิกและ ampicilin(50 ppm ยาเกรด) สำหรับการยับยั้งเชื้อแบคทีเรียเป็นวุ้น WLN (Wallerstein ห้องปฏิบัติการสารอาหารวุ้น)ซับซ้อนปานกลางที่มีความแตกต่างง่ายของอาณานิคมโดยยีสต์สัณฐาน ประกอบด้วย (ต่อลิตร): สารสกัดจากยีสต์ 4 กรัมbactocasitone 5 กรัม เดกซ์โทรส 50 กรัม 550 มิลลิกรัม KH2PO4 125 mg KCl250 มก. MgSO4·7H2O 2.5 mg FeCl3 2.5 mg MnSO4 22 มิลลิกรัมวุ้นสีเขียวและ 20 g Bromocresolอินนูลิวุ้นปานกลางใช้กับหน้าจอสำหรับการผลิต inulinaseยีสต์ และแสดงให้เห็นองค์ประกอบต่อไปนี้ (ต่อลิตร):อินนูลิ 20 กรัม (Raftline-Orafti); สารสกัดจากยีสต์ 1 g 3 กรัม NaNO3500 มก. MgSO4·7H2O 200 mg MnSO4 K2HPO4 1 กรัมและ 20 กรัมวุ้นค่า pH ของสื่อ 5.0 และวัฒนธรรมมีgrownon อาหารแผ่นที่ 25 ◦Cfor h. 48 – 72 แต่ละโคโลนีถ่ายโอนไปแผ่น PDA เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน และการสายพันธุ์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 4 ◦C ในวุ้น GYMP slants (กลูโคส 2%0.5 สารสกัดจากยีสต์% สารสกัดจากมอลต์ 1% 0.2% KH2PO4 และวุ้น 2%)2.2. หลักการตรวจ: กำหนดกิจกรรมของเอนไซม์Loopfuls ของเซลล์ (จากแต่ละสายพันธุ์), ย่อยล้างบน GYMPวุ้น slants ถูก inoculated เป็น 10 ml ของกลางมาตรฐานในทดสอบท่อ และปลูกที่ 25 ◦C ใน 24 ชม หลังจากการพัฒนาที่เพียงพอวัฒนธรรม จะถูกโอนย้ายในขวดขนาด 500 มล.(พร้อมพุ่ง) ที่ประกอบด้วยต่อ 100 มล.ของสื่อเดียวกันและปลูก aerobically ที่ 25 ◦C สำหรับ 72 ชั่วโมงในการปั่นซึ่งกันและกัน(150 rpm)ตัวอย่างถูกเก็บหลังจาก 24, 48 และ 72 ชั่วโมง เก็บเกี่ยวเซลล์โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 6000 × g (10 นาที 10 ◦C), และฟรี supernatants ใช้เซลล์ที่จอสำหรับ transfructosylatingกิจกรรม2.3. รองคัดกรอง: oligosaccharide ผลิตสายพันธุ์ที่แสดงจะเป็นผู้ผลิตที่มีศักยภาพของ fructofuranosidasetransfructosylating กิจกรรม (FTA) และกิจกรรม (FA) ได้รับการขั้นตอนคัดกรองรอง มีการตรวจสอบของ oligosaccharideการผลิตทำปฏิกิริยาที่ 50 ◦C โซเดียม 50 มม.อะซิเตบัฟเฟอร์ (pH 5.0) ที่มีซูโครส 60% (w/v) มีการเอนไซม์: ปฏิกิริยาปานกลาง (v/v) อัตราส่วน 1:10 การเก็บตัวอย่างดำเนินการในระหว่างปฏิกิริยา ยกในเวลาที่เหมาะสมน้ำเดือดและโอองค์ประกอบโดยion chromatography (HPLC PAD)2.4. พันธุ์สกุลรหัสขั้นตอนสกุลที่ถูกระบุ โดยวิธีการที่อธิบายไว้ใน"คีย์" เพื่อทดสอบและสกุล โดย Kregger van Rij [12]2.5. prebiotic ผลการเติบโตของ Bifidobacterium longum (BL-04, Rhodia)ใช้ผลิตเป็นแหล่งคาร์บอน FOS เป็นศึกษาโดยเตรียม modifiedMRSmedium ที่ประกอบด้วย 0.05% l-cysteineและประมาณ 0.20% คาร์โบไฮเดรต (น้ำตาลกลูโคสหรือ FOS) การพัฒนาสายพันธุ์ถูกตรวจสอบจากความหนาแน่นของแสงที่ 595 nm (OD)และ โดยการใช้คาร์โบไฮเดรต (HPLC PAD) เจริญเติบโตของกลูโคสขณะที่การควบคุมบวกและเติบโตบน MRSไม่มีแหล่งคาร์โบไฮเดรต (basalMRS) เป็นการควบคุมเชิงลบ2.6. เอนไซม์คุณสมบัติเป็นคู่มือสำหรับการศึกษาในอนาคตเกี่ยวกับจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ และกลไกบางคุณสมบัติของเอนไซม์เซลลูลาร์เป็นพิเศษมีศึกษา ดังนั้น เอนไซม์กิจกรรม (ราคาเริ่มต้นปฏิกิริยา)กับพื้นผิวของ 2% และ 50% ซูโครสและ 2% อินนูลิในมีวัด 50 มม.โซเดียมอะซิเตบัฟเฟอร์ (pH 4.5) ที่ 50 ◦COligosaccharides ผลิต โดย incubating เอนไซม์นี้(เขตการค้าเสรีและมล. 1) ในน้ำตาลซูโครส 0.5%, 5% และ 50% (โซเดียมอะซิเตบัฟเฟอร์50 มม. pH 4.5), ที่ 50 ◦C สำหรับ 72 ชั่วโมงเอนไซม์มีความเข้มข้น โดยฝนจากเซลล์การเงินและวัฒนธรรมฟรี ใช้เอทานอลที่ 4 ◦C เพื่อความเข้มข้นที่จำเป็นฝน 70% เอทานอลและสองชั้นที่เป็นเศษส่วนฝน (แรกเพิ่มเอทานอล 50% อิ่มตัว สิ่งและการเพิ่มเติมเอทานอล 70%) ทดสอบSupernatant ปราศจากเซลล์และตะกอนอุดมไปด้วยเอนไซม์รวบรวม โดยการหมุนเหวี่ยง (6000 × g, 4◦C, 10 นาที) ทั้งสองกิจกรรมของเอนไซม์และโปรตีนความเข้มข้นได้นำมาวิเคราะห์2.7. เอนไซม์กิจกรรมทดสอบประกอบด้วยปฏิกิริยาสื่อการตรวจสอบกิจกรรมเอนไซม์ของน้ำตาลซูโครส 50% ใน 50 มม.โซเดียมอะซิเตบัฟเฟอร์ (pH 4.5) และ10% พอผสมเอนไซม์ระงับ รับการกกที่ 50 ◦Cตัวอย่างที่ถูกเก็บรวบรวมในช่วงเวลาที่คงที่สำหรับ 30 นาทีและ assayed สำหรับกลูโคส (กลูโคส oxidase ชุดพาณิชย์) และลดน้ำตาล (เนลสัน Somogi วิธี)ทำให้กลูโคสซูโครสแปลง โดย fructofuranosidase และฟรักโทส อย่างไรก็ตาม ใน th

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ภาควิชาวิศวกรรมอาหารมหาวิทยาลัยกัมปี 13083-970 Campinas, SP, ประเทศบราซิล
ได้รับ 30 กันยายน 2006; ได้รับในการปรับปรุงรูปแบบ 31 พฤษภาคม 2007; ได้รับการยอมรับ 2 สิงหาคม 2007
มีจำหน่ายออนไลน์ 7 สิงหาคม 2007

2.1 การเก็บตัวอย่างและยีสต์แยก
ผลไม้สดและดอกไม้ที่ถูกเก็บรวบรวมจาก Amazon และ
แอตแลนติกป่าและ Cerrado และพื้นที่ Pantanal บราซิล.
ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมถูกเชื้อเข้า 125 มล. Erlenmeyer
ขวดมี 25 มล. ของมาตรฐานกลางประกอบด้วย 2%
สารสกัดจากยีสต์ 5% ซูโครส, 1% NaNO3 0.01% MgSO4 · 7H2O,
0.1% K2HPO4 (pH 5.5) และบ่มที่อุณหภูมิ 25 ◦Cในซึ่งกันและกัน
ปั่น (150 รอบต่อนาที) สำหรับ 72 ชั่วโมง [5].
วัฒนธรรมถูกลายลงบนสื่อแผ่น ( PDA, WLN
และอินนูลินวุ้น) เสริมด้วยกรด nalidixic และแอมพิซิลลิน
(50 ppm, เกรดเภสัชกรรม) ในการยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย.
WLN วุ้น (วอลเลอร์ห้องปฏิบัติการสารอาหารวุ้น) เป็น
สื่อที่ซับซ้อนที่ให้ความแตกต่างได้ง่ายอาณานิคม
โดยยีสต์สัณฐานวิทยา มันประกอบด้วย (ต่อลิตร): สารสกัดจากยีสต์ 4 กรัม
5 กรัม bactocasitone; 50 กรัมเดกซ์โทรส; 550 มิลลิกรัม KH2PO4; 125 มิลลิกรัมโพแทสเซียมคลอไรด์;
250 มิลลิกรัม MgSO4 · 7H2O; 2.5 มิลลิกรัม FeCl3; 2.5 มิลลิกรัม MnSO4; 22mg
. bromocresol สีเขียวและ 20 กรัมวุ้น
กลางวุ้นอินนูลินได้ถูกใช้ในหน้าจอสำหรับ inulinase ผลิต
ยีสต์และแสดงให้เห็นองค์ประกอบดังต่อไปนี้ (ต่อลิตร):
20 กรัมอินนูลิน (Raftline-Orafti); สารสกัดจากยีสต์ 1 กรัม; 3 กรัม NaNO3;
500 mg MgSO4 · 7H2O; 200 มก MnSO4; 1G K2HPO4 และ 20 กรัม
วุ้น.
ค่าพีเอชของสื่อเท่ากับ 5.0 และวัฒนธรรมที่ถูก
grownon แผ่นวุ้นที่ 25 ◦Cfor 48-72 ชั่วโมง อาณานิคมของแต่ละบุคคล
ถูกโอนไปยังแผ่น PDA เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนและ
สายพันธุ์ที่ได้รับการดูแลที่ 4 ◦Cใน GYMP-agar slants (2% กลูโคส;
สารสกัดจากยีสต์ 0.5%; สารสกัดจากมอลต์ 1%; 0.2% และ KH2PO4
% วุ้น 2).
2.2 การตรวจคัดกรองระดับประถมศึกษา: การกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์
Loopfuls ของเซลล์ (จากแต่ละสายพันธุ์) ย่อยเลี้ยงบน GYMP
agar slants ถูกเชื้อเป็น 10 มล. ของกลางมาตรฐานใน
หลอดทดลองและได้รับการปลูกฝังที่ 25 ◦Cเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากพัฒนาเพียงพอ
ของวัฒนธรรมที่พวกเขาถูกย้ายไป 500 มล. ขวด
(มีแผ่นกั้น) ที่มีอีก 100 มล. ของกลางเดียวกัน
และได้รับการปลูกฝังออกซิเจนที่ 25 ◦Cเป็นเวลา 72 ชั่วโมงในเครื่องปั่นซึ่งกันและกัน
(150 รอบต่อนาที).
เก็บตัวอย่าง หลังจากวันที่ 24, 48 และ 72 ชั่วโมงเซลล์เก็บเกี่ยว
โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 6000 ×กรัม (10 นาที, 10 ◦C) และ
supernatants ปราศจากเซลล์ที่ใช้ไปยังหน้าจอสำหรับ transfructosylating
กิจกรรม.
2.3 การตรวจคัดกรองรอง: การผลิต Oligosaccharide
สายพันธุ์แสดงให้เห็นว่าผู้ผลิตที่มีศักยภาพของ fructofuranosidase
กิจกรรม (เอฟเอ) และกิจกรรมการ transfructosylating (FTA) เปลี่ยน
ขั้นตอนการคัดกรองรองกับการตรวจสอบของ Oligosaccharide
. ผลิต
ปฏิกิริยาได้ดำเนินการที่ 50 ◦Cใน 50mm โซเดียม
บัฟเฟอร์อะซิเตท ( ค่า pH 5.0) ที่มี 60% (w / v ซูโครส) กับ
เอนไซม์: ปฏิกิริยาปานกลาง (v / v) อัตราส่วน 1:10 ตัวอย่างที่ถูก
นำมาในเวลาที่เหมาะสมในระหว่างการเกิดปฏิกิริยาการใช้งานใน
น้ำและองค์ประกอบ Oligosaccharide วิเคราะห์โดยการต้ม
โคไอออน (HPLC-pad).
2.4 ระบบตรวจสอบสายพันธุ์พืชและสัตว์
จำพวกถูกระบุโดยวิธีการที่อธิบายไว้ใน
"กุญแจสำคัญในชิ้นงานและจำพวก" โดย Kregger รถตู้-Rij [12].
2.5 ผล prebiotic
การเจริญเติบโตของ Bifidobacterium longum (BL-04, บริษัท โรเดีย)
ใช้ผลิต FOS เป็นแหล่งคาร์บอนที่ถูกศึกษาโดย
การเตรียมความพร้อม modifiedMRSmedium ที่มี 0.05% L-cysteine
และประมาณ 0.20% คาร์โบไฮเดรต (กลูโคสหรือ FOS) การพัฒนาสายพันธุ์ที่
ได้รับการตรวจสอบจากความหนาแน่นของแสงที่ 595 นาโนเมตร (OD)
และจากการบริโภคคาร์โบไฮเดรต (HPLC-pad) การเจริญเติบโตในกลูโคส
ได้รับการพิจารณาเป็นควบคุมบวกและการเจริญเติบโตใน MRS
กับแหล่งคาร์โบไฮเดรตไม่ (basalMRS) ในขณะที่การควบคุมเชิงลบ

2.6 คุณสมบัติของเอนไซม์
เป็นคู่มือสำหรับการศึกษาในอนาคตในจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์และ
กลไกคุณสมบัติของเอนไซม์พิเศษโทรศัพท์มือถือบาง
การศึกษา ดังนั้นการทำงานของเอนไซม์ (อัตราการเกิดปฏิกิริยาเริ่มต้น)
กับพื้นผิวของ 2% และ 50% ซูโครสและอินนูลิน 2% ใน
50mm บัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตท (pH 4.5) ที่ 50 ◦Cวัด.
oligosaccharides ถูกผลิตโดยบ่มเอนไซม์
(1 FTA / มล.) 0.5%, 5% และ 50% ซูโครส (โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์
ขนาด 50 มมค่า pH 4.5), ที่ 50 ◦Cเป็นเวลา 72 ชม.
เอนไซม์เป็นความเข้มข้นโดยการเร่งรัดจากเซลล์
น้ำซุปฟรีวัฒนธรรมการใช้เอทานอลที่ 4 ◦C กับความเข้มข้นที่จำเป็น.
ยุด้วย 70% เอทานอลและสองขั้นตอนเศษส่วน
ตกตะกอน (แรกเพิ่มเอทานอลที่จะอิ่มตัว 50%, เหวี่ยง,
แล้วเพิ่มเอทานอลมากขึ้นถึง 70%) ได้รับการทดสอบ.
ใสมือถือฟรีและเอนไซม์ที่อุดมไปด้วย ตะกอนที่ถูก
เก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (6000 ×กรัม4◦C, 10 นาที) ทั้ง
การทำงานของเอนไซม์และโปรตีนเข้มข้นที่ได้มาวิเคราะห์.
2.7 กิจกรรมของเอนไซม์ทดสอบ
กลางปฏิกิริยาเพื่อตรวจสอบการทำงานของเอนไซม์ประกอบด้วย
น้ำตาลซูโครส 50% ใน 50 มมบัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตท (pH 4.5) และ
10% ปรับลดอย่างเพียงพอระงับเอนไซม์บ่มที่ 50 ◦C.
เก็บตัวอย่างในช่วงเวลาอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 30 นาที
และ assayed กลูโคส (กลูโคส oxidase ชุดพาณิชย์) และ
น้ำตาลลด (วิธี Somogi เนลสัน).
แปลงซูโครสกลูโคสโดยอัตราผลตอบแทน fructofuranosidase และ
ฟรุกโตส อย่างไรก็ตามใน TH

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ภาควิชาวิศวกรรมอาหาร คณะวิศวกรรมศาสตร์ มหาวิทยาลัยแห่ง Campinas , แคมปิแนส 13083-970 , SP , ประเทศบราซิลได้รับ 30 กันยายน 2549 ; รับปรับปรุงรูปแบบ 31 พฤษภาคม 2550 วันที่ 2 สิงหาคม 2007 ; ยอมรับ7 สิงหาคม 2550 พร้อมใช้งานออนไลน์2.1 . การเก็บตัวอย่างและการแยกยีสต์ผลไม้สดและดอกไม้ เก็บข้อมูลจาก Amazon และป่ามหาสมุทรแอตแลนติกและเซอราโด้และพื้นที่ Pantanal ของบราซิลตัวอย่างแบบสอบถามเชื้อเออร์เลนเมเยอร์ 125 มล.ขวดบรรจุ 25 ml ของมาตรฐานกลาง ประกอบด้วย 2 เปอร์เซ็นต์สารสกัดจากยีสต์ , 5% ซูโครส 1% NaNO3 0.01 % ด้วย 7h2o MgSO4 ใ ,0.1% k2hpo4 ( pH 5.5 ) และอุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส ใน◦ซึ่งกันและกันเครื่องปั่น ( 150 รอบต่อนาที นาน 72 ชั่วโมง [ 5 ]วัฒนธรรมลายลงบนแผ่นมีเดีย ( PDA , wlnอินนูลินวุ้น ) และเติมกรดนาลิดิซิก และแอมพิซิลิน( 50 ppm , ยาเกรด ) สำหรับแบคทีเรียยับยั้ง .การ wln วุ้น ( agar Nutrient ห้องปฏิบัติการวอลเลอร์สไตน์ ) คือที่ซับซ้อนปานกลาง ที่ให้ความแตกต่างง่ายของอาณานิคมโดยสัณฐานวิทยาของยีสต์ ประกอบด้วย ( ต่อลิตร ) : 4 กรัมยีสต์สกัด ;5 กรัม bactocasitone ; น้ำผึ้ง 50 กรัม ; 550 kh2po4 มิลลิกรัม ; 125 มิลลิกรัมโพแทสเซียม ;250 มก. MgSO4 ใด้วย 7h2o ; 2.5 มก. FeCl3 ; 2.5 มิลลิกรัม mnso4 ; 22mgโบรมอกลีซ สีเขียว และผง 20 กรัมวุ้นอินนูลินขนาดกลาง ใช้สำหรับ inulinase ผลิตจอยีสต์และพบองค์ประกอบต่อไปนี้ ( ต่อลิตร )อินนูลิน 20 กรัม ( raftline orafti ) ; 1 กรัมยีสต์สกัด ; 3 G NaNO3 ;500 มิลลิกรัม MgSO4 ใด้วย 7h2o ; 200 mnso4 มิลลิกรัม ; 1G k2hpo4 และ 20 กรัมวุ้นความเป็นกรดของสื่อ คือ 5.0 และมีวัฒนธรรมgrownon ใช้จานที่ 25 C เป็นเวลา 48 - 72 ชั่วโมง ◦แต่ละโคโลนีถูกโอนไปยัง PDA แผ่นเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน และสายพันธุ์รักษาที่ 4 ◦ C ใน gymp วุ้น slants ( glucose 2% ;สารสกัดจากยีสต์ 0.5% และ 0.2% kh2po4 malt extract ; และ2 % Agar )2.2 . การตรวจคัดกรองเบื้องต้น : การกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์loopfuls ของเซลล์ ( จากแต่ละสายพันธุ์ที่เลี้ยงบน gymp ) , ซับวุ้น slants เป็นเชื้อ 10 มิลลิลิตร ในมาตรฐานขนาดกลางทดสอบหลอดและบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ◦หลังจากการพัฒนาอย่างเพียงพอของวัฒนธรรมที่พวกเขาถูกโอนเข้ามา 500 มล. ขวด( มีแผ่นกั้น ) ที่มีต่อ 100 มิลลิลิตรของอาหารเหมือนกันปลูก aerobically 25 ◦องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมงในเครื่องปั่นส่วนกลับ( 150 รอบต่อนาที )ตัวอย่างหลัง 24 , 48 และ 72 ชั่วโมง เซลล์เก็บเกี่ยวโดยการปั่นเหวี่ยงที่× 6000 กรัม ( 10 นาที , 10 ◦ C ) และการสังเคราะห์ supernatants ใช้หน้าจอ transfructosylatingกิจกรรม2.3 มัธยมคัดกรอง : ผลิตโอลิโกแซคคาไรด์สายพันธุ์ที่แสดงให้เห็นศักยภาพของ fructofuranosidase ผู้ผลิตกิจกรรม ( FA ) และ transfructosylating ( FTA ) รับกิจกรรมขั้นตอนการคัดกรองรองกับการตรวจสอบของโอลิโกแซคคาไรด์การผลิตปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการที่ 50 ◦ C 50mm โซเดียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) ที่มี 60 % ( w / v ) ซูโครสด้วยเอนไซม์ : ปานกลางปฏิกิริยา ( V / V ) อัตราส่วน 1 : 10 . ตัวอย่างคือถ่ายในเวลาที่เหมาะสมในการทำปฏิกิริยา ซึ่งใช้ในต้มน้ำ และโอลิโกแซคคาไรด์ องค์ประกอบที่วิเคราะห์ โดยเทคนิคไอออนโครมาโตกราฟี ( hplc-pad )2.4 . ขั้นตอนการจำแนกเชื้อสกุลสกุลที่ถูกระบุโดยวิธีการที่อธิบายไว้ใน" คีย์ และสกุลตัวอย่าง " โดย kregger รถตู้ rij [ 12 ]2.5 พรีไบโอติก ผลการเจริญเติบโตของบิฟิโดแบคทีเรีย longum ( bl-04 โรเดีย , )ใช้ผสมผลิตเป็นแหล่งคาร์บอนที่ได้ศึกษาโดยเตรียม modifiedmrsmedium ประกอบด้วย 0.05% แอลซิสเตอีนและประมาณ 0.20 % คาร์โบไฮเดรต ( น้ำตาล หรือ FOS ) การพัฒนาสายพันธุ์ถูกตรวจสอบจากความหนาแน่นของแสงที่ 595 nm ( OD )และปริมาณคาร์โบไฮเดรต ( hplc-pad ) ของกลูโคสก็ถือว่าเป็นบวก การควบคุมและการเติบโตในนางไม่มีแหล่งคาร์โบไฮเดรต ( basalmrs ) เป็นตัวควบคุมลบ2.6 คุณสมบัติของเอนไซม์เป็นคู่มือสำหรับการศึกษาในอนาคตในเอนไซม์จลนศาสตร์และกลไกบางคุณสมบัติของเอนไซม์เสริมเซลล์ผลการวิจัยพบว่า ดังนั้น กิจกรรมเอนไซม์อัตราการเกิดปฏิกิริยาเริ่มต้น )กับพื้นผิวของ 2% และน้ำตาลซูโครส 50% และ 2% ของอินนูลิน ใน50mm โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 4.5 ) ที่ 50 ◦ C เป็นวัดโอลิโกแซ็กคาไรด์ถูกผลิตโดยการแช่เอนไซม์( 1 FTA / ml ) 0.5 % , 5 % และ 50 % ซูโครส ( โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์50 mm , pH 4.5 ) , 50 ◦องศาเซลเซียส เป็นเวลา 72 ชั่วโมงเอนไซม์จากเซลล์โดยการตกตะกอนจากซุปวัฒนธรรมฟรีการใช้เอทานอลที่ 4 ◦ C จะต้องใช้สมาธิการตกตะกอนด้วยเอทานอล 70% และ 2 .การตกตะกอน ( ก่อนการเพิ่มสารเอทานอล 50% , ความอิ่มตัวของสีแล้วเติมเอทานอลมากขึ้นถึง 70% ) ทดสอบการสังเคราะห์และเอนไซม์ที่ถูกนำรวยรวบรวมโดยการเหวี่ยงแยก ( 6000 × g 4 ◦ C 10 นาที ) ทั้งกิจกรรมของเอนไซม์และโปรตีนวิเคราะห์ .2.7 . ต่อกิจกรรมของเอนไซม์ปฏิกิริยาปานกลางเพื่อตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์คือของน้ำตาลซูโครส 50% 50mm โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 4.5 ) และ10% ลดเอนไซม์เพียงพอระงับบ่มที่อุณหภูมิ 50 ◦ Cโดยเก็บตัวอย่างในช่วงเวลาที่คงที่ประมาณ 30 นาทีปริมาณกลูโคส กลูโคส และสำหรับชุดพาณิชย์ ) และลดน้ำตาล ( somogi เนลสันวิธี )โดยการแปลง fructofuranosidase ผลผลิต glucos