Pure cultures of the five strains g

Pure cultures of the five strains grew well on blood agar plates and in Brucella broth (BBL) supplemented with
T
vitamin K (1 mgml
21
) and haemin (5 mgml
21
) under an anaerobic atmosphere (10 % H
2
,5%CO
2
in N
C. Colony morphologies and the results of presumptive
identification tests by diagnostic discs (Jousimies-Somer et al., 2002) were examined on blood agar plates after incubation for 3–5 days. None of the five strains grew in the presence of oxygen and they should be considered strictly anaerobic. Growth was improved and pigmentation and haemolytic activity increased if the atmosphere contained 10 % CO
2
and 5 % H
as compared with standard conditions. The appearance of the colonies of the five strains differed: isolate CD3 : 27 had circular, raised, convex, weakly to moderately pigmented and strongly haemolytic colonies; CD3 : 28
2
T
and CD3 : 33 had circular, convex, weakly pigmented, weakly haemolytic colonies; CD3 : 32 had circular, slightly raised and brownreddish pigmented colonies with a shiny ‘wet’ appearance. Moreover, the centres of the colonies of CD3 : 32 were darker than the outer part. Colonies of CD3 : 34 were similar to those of CD3 : 28
T
and CD3 : 33, but with a surface appearing ‘drier’ (Fig. S1 available in IJSEM Online).
Light microscopy after Gram staining, dark field microscopy, scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) were used to investigate cell morphologies. Cells of the five strains were rod-shaped, 0.760.8–2 mm in size, occurring most often as short rods or as coccoid cells, with longer filamentous forms (.10 mm) seen sporadically. All five strains were Gramstain-negative and lacked spores. SEM revealed that all five strains, particularly if grown on agar medium, as opposed to in liquid culture, formed large aggregates of bacterial cells connected to each other by multiple, thin, strait, rodshaped structures (Fig. 1a–c). Cells of strains CD3 : 27, CD3 : 28
T
and CD3 : 33 showed a similar degree of interconnectivity. Outer membrane vesicles were frequently observed. Analysis of thin sections of the aggregates by TEM suggested that the rod-shaped structures were hollow, characterized as tubes connecting cells to each other (Fig. 1d).
All five strains exhibited a temperature optimum for growth at 37
u
C. The optimal pH for growth was 6–7 with reduced growth at pH 5.5 and 7.5. Motility was not observed. All five strains were haemolytic and produced NH
. Growth on glucose as the sole carbon source yielded acetic acid, succinic acid and small amounts of isovaleric acid for strains CD3 : 27, CD3 : 32 and CD3 : 34, and acetic acid and succinic acid for strains CD3 : 28
3
T
and CD3 : 33. The nucleotide sequences of the 16S rRNA genes of strains
CD3 : 27, CD3 : 28
T
Prevotella jejuni sp. nov.
, CD3 : 33, CD3 : 32 and CD3 : 34 were determined by primer walking, covering the gene, and by cloning and sequencing of PCR amplification fragments also covering the gene (Hedberg et al., 2012). These sequences were subsequently confirmed by genomic sequencing, allowing us to establish that there was only one copy of the 16S rRNA gene per genome. Other 16S

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมอันบริสุทธิ์ของห้าสายพันธุ์เติบโตได้ดีบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือดและในน้ำซุป Brucella (บาร์เรล) เสริมด้วย

เสื้อวิตามิน k (1 mgml 21

) และ haemin (5 mgml
21
) ภายใต้บรรยากาศแบบไม่ใช้อากาศ (10% ต่อชั่วโมง

2, 5% ร่วม 2

ใน n
c. รูปร่างลักษณะอาณานิคมและผลการสันนิษฐาน
ทดสอบการระบุโดยแผ่นวินิจฉัย (jo​​usimies-Somer et al,.,2002) มีการตรวจสอบบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือดหลังจากฟักตัวประมาณ 3-5 วัน ไม่มีห้าสายพันธุ์เติบโตในที่ที่มีออกซิเจนและพวกเขาควรได้รับการพิจารณาแบบไม่ใช้ออกซิเจนอย่างเคร่งครัด การเจริญเติบโตและได้รับการปรับปรุงสีและกิจกรรมที่เพิ่มขึ้น haemolytic ถ้าบรรยากาศที่มี 10% ร่วม 2
และ 5% ชั่วโมง

เทียบกับสภาวะมาตรฐาน ลักษณะของโคโลนีของห้าสายพันธุ์ที่แตกต่าง:แยก cd3: 27 มีวงกลมยกนูนที่ไม่ค่อยจะมีสีในระดับปานกลางและอาณานิคม haemolytic ขอ; cd3: 28
2

เสื้อและ cd3: 33 มีวงกลมนูนสีนิดหน่อยอาณานิคม haemolytic ระทวย; cd3: 32 มีวงกลม ยกสูงขึ้นเล็กน้อยและโคโลสี brownreddish ด้วยเงา 'เปียก' ลักษณะที่ปรากฏ นอกจากนี้ศูนย์ความเป็นอาณานิคมของ cd3: 32 มีสีเข้มกว่าส่วนนอกอาณานิคมของ cd3: 34 มีความคล้ายคลึงกับของ cd3: 28

เสื้อและ cd3. 33 แต่ด้วยพื้นผิวที่ปรากฏ 'แห้ง' (รูปที่มีอยู่ใน s1 ijsem ออนไลน์)
กล้องจุลทรรศน์แสงหลังจากการย้อมสีกรัม, กล้องจุลทรรศน์สนามมืด สแกนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (SEM) และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนเกียร์ (Tem) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบรูปร่างลักษณะเซลล์ เซลล์ของห้าสายพันธุ์ที่ถูกก้านรูป 0.760.8-2 มม. ในขนาดที่เกิดขึ้นส่วนใหญ่มักจะเป็นแท่งสั้นหรือเซลล์กลมเป็นใยกับรูปแบบอีกต่อไป (0.10 มม. ) เห็นเป็นระยะ ๆ ทั้งห้าสายพันธุ์ที่ถูก gramstain ลบและไม่มีสปอร์ sem เปิดเผยว่าทั้งห้าสายพันธุ์โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าปลูกที่สื่อวุ้นเมื่อเทียบกับในวัฒนธรรมของของเหลวที่เกิดขึ้นมวลรวมขนาดใหญ่ของเซลล์แบคทีเรียเชื่อมต่อถึงกันโดยหลายบางช่องแคบ,โครงสร้าง rodshaped (รูปที่ 1a-C) เซลล์สายพันธุ์ CD3: 27, cd3: 28

เสื้อและ cd3: 33 แสดงให้เห็นว่าระดับที่คล้ายกันของการเชื่อมต่อแบบ ถุงเยื่อหุ้มชั้นนอกพบบ่อย วิเคราะห์บางส่วนของมวลรวมโดย Tem ชี้ให้เห็นว่าโครงสร้างเหล็กที่มีรูปร่างเป็นกลวงลักษณะเป็นท่อเชื่อมต่อเซลล์กัน (รูปที่ 1d).
ทั้งห้าสายพันธุ์ที่ดีที่สุดแสดงอุณหภูมิสำหรับการเจริญเติบโตที่ 37
u
c ph ที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตเป็น 6-7 มีอัตราการเติบโตลดลงที่ ph 5.5 และ 7.5 การเคลื่อนไหวไม่ได้ถูกตั้งข้อสังเกต ทั้งห้าสายพันธุ์มี haemolytic และผลิต nh
การเจริญเติบโตในกลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน แต่เพียงผู้เดียวให้ผลกรดอะซิติกกรดซัคคินิและขนาดเล็กจำนวนกรด isovaleric กับสายพันธุ์ cd3: 27, cd3: 32 และ cd3: 34,และกรดอะซิติกและกรดซัหาสายพันธุ์ cd3: 28
3

เสื้อและ cd3: 33 ลำดับเบสของยีน 16s rRNA ของสายพันธุ์
cd3: 27, cd3: 28

เสื้อ Prevotella jejuni เอสพี พฤศจิกายน
cd3: 33, cd3: 32 และ cd3: 34 ได้รับการพิจารณาโดยไพรเมอร์ที่เดินครอบคลุมยีนและการโคลนและการหาลำดับเบสของชิ้นส่วนการขยาย pcr ยังครอบคลุมยีน (Hedberg et al, 2012.)ลำดับเหล่านี้ได้รับการยืนยันต่อมาโดยลำดับจีโนมทำให้เราในการสร้างที่มีเพียงหนึ่งสำเนาของยีน 16s rRNA ต่อจีโนม 16s อื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมบริสุทธิ์ของสายพันธุ์ห้าเติบโตดีในแผ่นเลือด agar และ Brucella ซุป (มหาชน) เสริมด้วย
T
วิตามิน K (1 mgml
21
) และ haemin (5 mgml
21
) ภายใต้บรรยากาศที่ไม่ใช้ออกซิเจน (10% H
2
, 5% CO
2
ใน N
morphologies C. อาณานิคมและผลลัพธ์ของ presumptive
รหัสทดสอบ โดยวินิจฉัยดิสก์ (Jousimies Somer et al., 2002) ได้ตรวจสอบในแผ่น agar เลือดหลังจากบ่มวัน 3–5 ไม่มีสายพันธุ์ห้าเติบโตในต่อหน้าของออกซิเจน และพวกเขาควรไม่ใช้อย่างเคร่งครัด เจริญเติบโตได้ดีขึ้น และผิวคล้ำและกิจกรรม haemolytic เพิ่มบรรยากาศอยู่ 10% CO
2
5% H
ตกมาตรฐานเงื่อนไขการ ลักษณะที่ปรากฏของอาณานิคมของสายพันธุ์ห้าแตกต่าง: แยก CD3: 27 มีกลม ยก นูน สูญไปอาณานิคมมีสีปานกลาง และ haemolytic อย่างยิ่ง CD3: 28
2
T
CD3 และ: วงกลม นูน สูญสูญ หมึก haemolytic อาณานิคม มี 33 CD3: 32 มีวงกลม ขึ้นเล็กน้อย และ brownreddish pigmented อาณานิคม มีลักษณะ 'เปียก' เป็นเงา นอกจากนี้ ศูนย์กลางของอาณานิคมของ CD3: 32 มีสีเข้มกว่าส่วนนอก อาณานิคมของ CD3: 34 ได้ใกล้เคียงกับ CD3: 28
T
CD3 และ: 33 แต่ มีพื้นผิวปรากฏ 'drier' (ฟิก S1 ในออนไลน์ IJSEM) .
microscopy แสงหลังกรัม staining มืดฟิลด์ microscopy การสแกน microscopy อิเล็กตรอน (SEM) และการส่งผ่านอิเล็กตรอน microscopy (ยการ) ใช้ในการตรวจสอบเซลล์ morphologies เซลล์ของสายพันธุ์ห้าถูกเหล็กรูป 0.760.8–2 มม.ขนาด เกิดขึ้นบ่อยที่สุด เป็นก้านสั้น ๆ หรือ เป็น coccoid เซลล์ กับอีก filamentous ฟอร์ม (.10 มม.) เห็น sporadically สายพันธุ์ห้าทั้งหมดถูกลบ Gramstain และขาดเพาะเฟิร์น SEM เปิดเผยว่า สายทั้งหมด 5 พันธุ์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าปลูกในที่กลาง agar เป็นซึ่งตรงกันข้ามกับในวัฒนธรรมของเหลว เกิดผลขนาดใหญ่เชื่อมต่อกัน โดยหลาย บาง strait เซลล์แบคทีเรีย โครงสร้าง rodshaped (Fig. 1a–c) เซลล์สายพันธุ์ CD3: 27, CD3: 28
T
CD3 และ: 33 พบว่าคล้ายคลึงกันของการเชื่อมโยงกัน บ่อยสุภัคอสุจิเยื่อหุ้มภายนอก วิเคราะห์ส่วนที่บางของผลโดยยการแนะนำว่า โครงสร้างเหล็กรูปทรงกลวง มีลักษณะเป็นท่อที่เชื่อมต่อเซลล์กันกิน 1d) .
อุณหภูมิเหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตที่ 37 จัดแสดงสายพันธุ์ห้าทั้งหมด
u
C 6–7 มีการเจริญเติบโตลดลงที่ค่า pH 5.5 และ 7.5 pH เหมาะสมที่สุดสำหรับการเจริญเติบโตได้ ไม่ได้สังเกต motility สายพันธุ์ห้าทั้งหมดถูก haemolytic และ NH
เจริญเติบโตในกลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอนแต่เพียงผู้เดียวหากรดอะซิติก กรด และกรดภาวะมีกรดในสายพันธุ์ CD3 เงิน: 27, CD3: 32 และ CD3: 34 และกรดอะซิติกและกรดสำหรับสายพันธุ์ CD3: 28
3
T
CD3 และ: 33 ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน 16S rRNA ของสายพันธุ์
CD3: 27, CD3: 28
T
Prevotella jejuni sp.พฤศจิกายน
, CD3: 33, CD3: 32 และ CD3: 34 ได้ตามพื้นเดิน ยีน ครอบคลุม และโคลน และลำดับเบสของ PCR ขยาย fragments ยัง ครอบคลุมยีน (Hedberg et al., 2012) ลำดับเหล่านี้ได้ในเวลาต่อมาได้รับการยืนยัน โดยลำดับ genomic ทำให้เราสามารถสร้างให้มีสำเนาของยีนใน rRNA 16S ต่อกลุ่ม อื่น ๆ 16S

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บริสุทธิ์วัฒนธรรมของที่ห้าพันธุ์ขยายตัวได้ดีในเลือดสาหร่ายแผ่นความร้อนและใน brucella น้ำซุป(ส่ง)และเสริมด้วย

T วิตามิน K ( 1 mgml
21
)และ haemin ( 5 mgml
21
)ตามที่เต็นแอโรบิคบรรยากาศ( 10% H

2 , 5% ความร่วมมือ

ใน n 2
C . The Colony morphologies และผลที่ได้จากการทดสอบทายาทสิทธิ์เปลี่ยนแปลงได้
การระบุตัวตนของแผ่นดิสก์การวินิจฉัย( jousimies-somer et al .2002 )ได้ตรวจสอบบนแผ่นความร้อนสาหร่ายทะเลเลือดหลังจากแสดงระยะฟักตัวสำหรับ 3-5 3-5 3-5 วัน ไม่มี 5 พันธุ์ที่ขยายตัวในการมีอยู่ของออกซิเจนและควรจะได้รับการพิจารณาให้เป็นเต็นแอโรบิคอย่างเคร่งครัด การขยายตัวได้ดีขึ้นและ pigmentation และกิจกรรม haemolytic เพิ่มขึ้นหากมีบรรยากาศที่มีอยู่ 10% ความร่วมมือ

2 และ 5% H
เมื่อเทียบกับเงื่อนไขมาตรฐาน ลักษณะที่ปรากฎของเขตอาณานิคมของห้าพันธุ์ที่แตกต่างกันแยกซีดี 3 : 27 มีแบบกลม,ยก,รังสรรค์,กะปลกกะเปลี้ยกับปานกลางมีสีและขอ haemolytic อาณานิคม;ซีดี 3 : 28 ~ 2

T และแผ่นซีดี 3 : 33 มีแบบกลม,รังสรรค์,กะปลกกะเปลี้ยมีสี,กะปลกกะเปลี้ย haemolytic อาณานิคม;ซีดี 3 : 32 มีแบบกลม,เล็กน้อยยกขึ้นและ brownreddish มีสีอาณานิคมพร้อมด้วยที่เป็นประกายเงางาม'เปียก'ปรากฏตัว. ยิ่งไปกว่านั้นยังศูนย์ของเขตอาณานิคมของซีดี 332 มีสีเข้มขึ้นกว่าส่วนด้านนอกได้ดินแดนอาณานิคมของแผ่นซีดี 334 มีความคล้ายคลึงกับแผ่นซีดีที่ 328

T และซีดี 333 แต่พร้อมด้วยพื้นผิวปรากฏอยู่'เป่า'(รูปที่ S 1 มีให้ใน ijsem ออนไลน์)..
เบาๆการตรวจวิเคราะห์สารเคมีหลังจากการตรวจวิเคราะห์สารเคมีฟิลด์สีเข้มเกิดรอยเปื้อนควรกรัมอิเลคตรอนการสแกนการตรวจวิเคราะห์สารเคมี(ความหมายอย่างไรต่อ)และการส่งข้อมูลการตรวจวิเคราะห์สารเคมีอิเลคตรอน(เปิดระบบ)จะถูกใช้ในการสืบสวนสอบสวน morphologies บริการข้อมูลของสถานีฐาน เซลล์ของ 5 พันธุ์ที่มีขนาด 0.760.8 2 - 2 มม.ที่อยู่ในไม้รูปทรงตัวแอลเกิดขึ้นบ่อยมากที่สุดเป็นก้านสั้นหรือเป็นเซลล์ coccoid พร้อมด้วยรูปแบบ filamentous อีกต่อไป( .10 เซ็นต์สำหรับมม.)เห็นเป็นระยะๆ ห้าพันธุ์ทั้งหมดเป็น gramstain - ลบและขาดช่วยกรอง ความหมายอย่างไรต่อเผยให้เห็นว่าความตึงเครียดทั้งหมดโดยเฉพาะหากเกิดขึ้นในขนาดกลางสาหร่ายทะเลตรงข้ามกับในวัฒนธรรมผสมน้ำยาทำความสะอาดจัดตั้งรวมขนาดใหญ่ของเซลล์เกิดจากเชื้อแบคทีเรียเชื่อมต่อเข้าถึงกันโดยหลายคนบางช่องแคบrodshaped โครงสร้าง(รูปที่ 1 A - C ) เซลล์ของแผ่นซีดี 27 แผ่นซีดีพันธุ์ 3328

T และแผ่นซีดี 333 แสดงให้เห็นระดับความเหมือนของ interconnectivity . vesicles เยื่อด้านนอกเป็นคำถามที่พบ การวิเคราะห์ของบางส่วนของรวมโดยเปิดระบบที่แนะนำว่าโครงสร้างไม้ที่มีรูปทรงเหมือนที่เป็นโพรงลักษณะเป็นหลอดการเชื่อมต่อไปยังอีกเซลล์(รูปแต่ละครั้ง 1 D )..
ห้าพันธุ์ทั้งหมดมาที่ อุณหภูมิ สูงสุดสำหรับการขยายตัวที่ 37

C . U pH ดีที่สุดสำหรับการขยายตัวเป็น 6-7 6-7 6-7 พร้อมด้วยการขยายตัวลดลงอยู่ที่ Ph 5.5 และ 7.5 D ( TM ) Annuloplasty Ring ไม่ได้สังเกตเห็น ห้าพันธุ์ทั้งหมดเป็น haemolytic และผลิต NH
ตามมาตรฐาน การขยายตัวในเป็นแหล่งคาร์บอนแต่เพียงผู้เดียวที่ส่งผลต่อกรดอะซิติกกรด succinic และจำนวนเงินขนาดเล็กของกรด isovaleric สำหรับพันธุ์ซีดี 27 แผ่นซีดี 3332 แผ่นซีดี 3 และ 34และกรดอะซิติกและกรด succinic สำหรับซีดี,พันธุ์ 328

T 3
และแผ่นซีดี 333 . ที่ nucleotide ลำดับที่ 16 ของ S rrna ยีนของพันธุ์
cd 3 : 27 ,ซีดี, 3 : 28 ~ t
prevotella jejuni sp .พ.ย..
, CD , 3 : 33 ,ซีดี, 3 : 32 และแผ่นซีดี 3 : 34 ก็ถูกกำหนดโดยเชื้อปะทุเดินไปถึงยังครอบคลุมที่ยีน,และโดยการลอกแบบและการจัดลำดับของการขยายสัญญาณเสียง pcr เศษนอกจากนั้นยังครอบคลุมยีน( hedberg et al ., 2012 )ซีเควนซ์เหล่านี้ได้รับการยืนยันโดยการจัดลำดับ genomic ช่วยให้เราสามารถสร้างที่มีเพียงหนึ่งสำเนาของ 16 S rrna ยีนต่อยีนที่ ภายหลัง 16 S อื่นๆ