2.3. Nitrogen mineralization assayN

2.3. Nitrogen mineralization assay
Net N mineralization was measured essentially as described by Riggs
et al. (2015). Soil aliquots (50 g) were placed in specimen cups and covered
with polyethylene film. Cups were incubated at 20 °C for 28 d. Soil
was sprayed weekly with DI H2O to restore the initial sample moisture
level. Ten gram aliquots of soil were removed from incubations after 0,
7, and 28 d and shaken in 1.0 M KCl solution for 30 min to extract soluble
N. The solution was filtered to remove suspended soil particles. The N
content of KCl extracts was quantified using colorimetric salicylate (ammonium)
and vanadium (nitrate/nitrite) assays (Hood-Nowotny et al.,
2010).
2.4. Soil respiration assay
Fifty gram aliquots of soil were placed in 473-mL glass Mason jars
and sealed with lids fitted with rubber septa. Jars were incubated in
the dark at 20 °C for 48 h. Triplicate 5-mL samples of headspace gas
were drawn from the jars immediately after closing and following 24
and 48 h of incubation. Gas samples were analyzed for CO2 content
using an infrared gas analyzer (LI-7000, Li-Cor®, Lincoln, NE). Standards
(0, 645, 1025, and 10,000 ppm CO2) were used to construct a standard
curve for calculating CO2 evolution.
2.5. Enzyme activity assays
Methylumbelliferone (MUB)-linked substrates were used to measure
potential enzyme activity (Darrah and Harris, 1986). Phosphatase,
N-acetyl-β-D-glucosaminidase (NAGase), and β-glucosidase were measured
for each subsample from the May 2013 and July 2013 timepoints.
β-glucosidase was measured to examine soil C cycling, while N-acetyl-
β-D-glucosaminidase (NAGase) and phosphatase were measured to estimate
chitinolytic activity contributing to N and C cycling, and release
of available phosphate groups from larger organic molecules, respectively
(Tabatabai, 1994). Soil aliquots (0.5 g) were suspended in 50 mL
100 mM maleic acid buffer (pH 6.8) and 0.25-mL assays were conducted
in 96-well plates. Sixteen analytical replicates of the assay wells were
used, and eight replicates of the quench, soil control, negative control,
reference standard, and blank wells were used. A 25 μM MUB solution
was used as a reference standard and each assay contained 0.01 μmol
substrate. Plates were incubated for 1 h at 25 °C for all substrates. Reactions
were stopped by the addition of 10 μL of 0.5 M NaOH solution.
Fluorescence of each well was read 10 min after NaOH addition on a microplate
spectrophotometer (Synergy H1, Biotek®, Winooski, VT) at
365 nm excitation and 450 nm emission.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. ไนโตรเจน mineralization assayโดยวัดสุทธิ N mineralization เป็นหลักโดยริกส์ร้อยเอ็ด (2015) วางในถ้วยตัวอย่างดิน aliquots (50 กรัม) และครอบคลุมด้วยฟิล์มพลาสติก ถ้วยได้รับการกกที่ 20 ° C 28 d. ดินถูกพ่นทุกสัปดาห์ ด้วย H2O DI เพื่อคืนความชุ่มชื้นอย่างเริ่มต้นระดับ Aliquots สิบกรัมของดินที่ถูกเอาออกจาก incubations หลังจาก 07 และ 28 d และเขย่าใน 1.0 M KCl โซลูชันสำหรับ 30 นาทีเพื่อแยกละลายN. โซลูชันถูกกรองเพื่อเอาอนุภาคดินลอย Nเนื้อหาของสารสกัดจาก KCl ถูกวัดโดยใช้วัดสี salicylate (แอมโมเนีย)และวาเนเดียม (ไนเตรทไนไตรท์) assays (ฮูด Nowotny et al.,2010)2.4. ดินหายใจ assayAliquots 50 กรัมของดินไว้ในไหเมสันแก้ว 473 มิลลิลิตรและปิดผนึก ด้วยฝาพร้อมยางผนัง ขวดได้รับการกกในมืดที่อุณหภูมิ 20 ° C 48 h. ตัวอย่าง 5 มิลลิลิตรตสแควร์เหมือนก๊าซวาดจากขวดทันที 24 ปิด และต่อไปนี้และ 48 ชั่วโมงของการกกไข่ ตัวอย่างแก๊สได้วิเคราะห์เนื้อหา CO2ใช้การวิเคราะห์แก๊สอินฟราเรด (LI-7000, Li-Cor® ลินคอล์น NE) มาตรฐาน(0, 645, 1025 และ 10,000 ppm CO2) ใช้ในการสร้างมาตรฐานเส้นโค้งสำหรับการคำนวณ CO2 วิวัฒนาการ2.5. เอนไซม์กิจกรรม assaysMethylumbelliferone (MUB) -พื้นผิวที่เชื่อมโยงถูกใช้ในการวัดกิจกรรมเอนไซม์อาจเกิดขึ้น (Darrah และแฮร์ริส 1986) Phosphataseวัด N-acetyl-β-D-glucosaminidase (ชุดพนักงาน), และβ-glucosidaseสำหรับแต่ละ subsample จาก timepoints 2013 พฤษภาคมและ 2013 กรกฎาคมΒ-glucosidase โดยวัดการตรวจสอบดิน C ขี่จักรยาน ในขณะที่ N-acetyl -Β-D-glucosaminidase (ชุดพนักงาน) และฟอสฟาถูกวัดประเมินกิจกรรม chitinolytic N และ C ขี่จักรยาน และปล่อยของฟอสเฟตมีกลุ่มจากโมเลกุลอินทรีย์ขนาดใหญ่ ตามลำดับ(Tabatabai, 1994) Aliquots ดิน (0.5 กรัม) ถูกหยุดชั่วคราวใน 50 มล.100 mM กรด maleic บัฟเฟอร์ (pH 6.8) และ 0.25 มิลลิลิตร assays ถูกดำเนินการในจาน 96 หลุม เหมือนกับวิเคราะห์สิบหกของหลุมทดสอบได้ใช้ และ replicates แปดดับ ดินควบคุม ควบคุมลบอ้างอิงมาตรฐาน และว่างเปล่าบ่อน้ โซลูชัน MUB 25 ไมครอนใช้เป็นมาตรฐานอ้างอิงและวิเคราะห์แต่ละอยู่ 0.01 ไมโครโมลพื้นผิว แผ่นได้รับการกกสำหรับ h 1 ที่ 25 ° C สำหรับพื้นผิวทั้งหมด ปฏิกิริยาถูกหยุด โดยการเพิ่ม 10 μL ของสารละลาย NaOH 0.5 ม.เรืองแสงที่ดีแต่ละถูกอ่าน 10 นาทีหลังจาก NaOH เพิ่มบนเครื่อง microplateสเปค (Synergy H1, Biotek®, Winooski, VT) ที่365 nm กระตุ้นและปล่อย 450 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ไนโตรเจนแร่ทดสอบ
สุทธิ N แร่วัดหลักตามที่อธิบายริกส์
, et al (2015) aliquots ดิน (50 กรัม) ถูกวางไว้ในถ้วยตัวอย่างและปกคลุม
ด้วยฟิล์มพลาสติก ถ้วยถูกบ่มที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 28 D ดิน
พ่นรายสัปดาห์ที่มี DI H2O ที่จะเรียกคืนตัวอย่างความชื้นเริ่มต้น
ระดับ สิบ aliquots กรัมของดินที่ถูกถอดออกจากการฟักตัวของเชื้อหลังจากที่ 0,
7 และ 28 วันและเขย่าในการแก้ปัญหา 1.0 M KCl เป็นเวลา 30 นาทีในการสกัดที่ละลายน้ำได้
N. วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกกรองเอาอนุภาคของดินที่ถูกระงับ เอ็นไม่มี
เนื้อหาของสารสกัดจาก KCl ถูกวัดโดยใช้ซาลิไซเลตสี (แอมโมเนียม)
และวานาเดียม (ไนเตรต / ไนไตรท์) การวิเคราะห์ (Hood-Nowotny et al.,
2010).
2.4 ดินหายใจทดสอบ
ห้าสิบกรัม aliquots ของดินถูกวางไว้ใน 473 มิลลิลิตรขวดแก้วเมสัน
และปิดผนึกที่มีฝาปิดพอดีกับ SEPTA ยาง ไหถูกบ่มใน
ที่มืดที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เพิ่มขึ้นสามเท่า 5 มิลลิลิตรตัวอย่างของก๊าซ headspace
ถูกดึงออกมาจากขวดทันทีหลังจากปิดและต่อไปนี้ 24
และ 48 ชั่วโมงของการบ่ม ตัวอย่างก๊าซสำหรับการวิเคราะห์เนื้อหา CO2
ใช้วิเคราะห์ก๊าซอินฟราเรด (LI-7000, Li-Cor®, Lincoln, NE) มาตรฐาน
(0, 645, 1,025 และ 10,000 ppm CO2) ถูกนำมาใช้ในการสร้างมาตรฐาน
โค้งสำหรับการคำนวณวิวัฒนาการ CO2.
2.5 กิจกรรมของเอนไซม์ตรวจ
Methylumbelliferone (MUB) พื้นผิว -linked ถูกนำมาใช้ในการวัด
การทำงานของเอนไซม์ที่มีศักยภาพ (Darrah และแฮร์ริส, 1986) phosphatase,
N-acetyl-β-D-glucosaminidase (Nagase) และβ-glucosidase วัด
สำหรับแต่ละ subsample จากเดือนพฤษภาคมปี 2013 และกรกฎาคม 2013 timepoints.
เบต้ากลูโควัดเพื่อตรวจสอบดิน C การขี่จักรยานในขณะที่ N-acetyl-
β -D-glucosaminidase (Nagase) และฟอสฟาวัดเพื่อประเมิน
กิจกรรม chitinolytic ที่เอื้อต่อการ N และ C การขี่จักรยานและการเปิดตัว
ของกลุ่มฟอสเฟตที่มีอยู่จากโมเลกุลของสารอินทรีย์ที่มีขนาดใหญ่ตามลำดับ
(Tabatabai, 1994) aliquots ดิน (0.5 กรัม) ถูกระงับใน 50 มล
100 มิลลิเมตรอัตราส่วนบัฟเฟอร์กรด (pH 6.8) และ 0.25 มิลลิลิตรตรวจได้ดำเนินการ
ในแผ่น 96 หลุม สิบหกซ้ำวิเคราะห์ของหลุมทดสอบที่ถูก
นำมาใช้และแปดซ้ำดับของการควบคุมดิน, การควบคุมการลบ
อ้างอิงมาตรฐานและบ่อว่างเปล่าถูกนำมาใช้ วิธีการแก้ปัญหา MUB 25 ไมครอน
ถูกใช้เป็นมาตรฐานอ้างอิงและแต่ละการทดสอบที่มีอยู่ 0.01 ไมโครโมล
ตั้งต้น แผ่นถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 25 ° C สำหรับพื้นผิวทั้งหมด ปฏิกิริยา
ถูกหยุดโดยนอกเหนือจาก 10 ไมโครลิตร 0.5 M NaOH การแก้ปัญหา.
เรืองแสงของแต่ละดีอ่าน 10 นาทีหลังจากเติม NaOH บนไมโคร
spectrophotometer (Synergy H1, Biotek®, นุ, VT) ที่
365 นาโนเมตรและกระตุ้นการปล่อย 450 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การใช้ไนโตรเจนวัดสุทธิ สารอินทรีย์ไนโตรเจนเป็นหลักตามที่อธิบายไว้โดยริกส์et al . ( 2015 ) เฉยๆดิน ( 50 กรัม ) อยู่ในตัวอย่างถ้วยและครอบคลุมด้วยฟิล์มพลาสติก . ถ้วยที่อุณหภูมิ 20 ° C เป็นเวลา 28 วัน ดินถูกพ่นรายสัปดาห์กับตี้ H2O เพื่อเรียกคืนความชุ่มชื้นตัวอย่างเบื้องต้นระดับ 10 กรัมเฉยๆของดินที่ถูกถอดออกจาก incubations หลัง 07 และ 28 D และหวั่นไหวใน 1.0 M . โซลูชั่นสำหรับ 30 นาทีเพื่อสกัดที่ละลายได้ของสารละลายจะกรองเอาอนุภาคฝุ่นดิน nเนื้อหาของปริมาณสารสกัดถูก quantified ใช้ 7.4 ซาลิไซเลต ( แอมโมเนีย )และ วานาเดียม ( ไนเตรท / ไนไตรท์ ) ) ( เครื่องดูดควันนาโอตนี่ et al . ,2010 )2.4 . การหายใจของดิน การทดสอบ50 กรัมเฉยๆของดินอยู่ใน 473 มิลลิลิตร ขวดแก้ว เมสันและปิดผนึกด้วยฝาติดตั้งกับผนังยาง บ่มในขวดคือในความมืดที่ 20 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ทำสำเนาสามฉบับ 5-ml ตัวอย่างเฮดสเปซแก๊สวาดจากขวดทันทีหลังจากปิดและต่อไปนี้ 24และ 48 ชั่วโมงของการบ่ม ตัวอย่างเพื่อวิเคราะห์หาปริมาณก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์โดยใช้เครื่องวิเคราะห์แก๊สอินฟราเรด ( li-7000 li สี® ลินคอล์น เน่ ) มาตรฐาน( 0 , 645 1025 , และ 10 , 000 ppm CO2 ) ถูกใช้เพื่อสร้างมาตรฐานเส้นโค้งการวิวัฒนาการของ CO22.5 เอนไซม์methylumbelliferone ( mub ) - สามารถเชื่อมโยงเพื่อใช้วัดกิจกรรมของเอนไซม์ที่มีศักยภาพ ( แดร์เรอ และ แฮร์ริส , 1986 ) โฟ ,n-acetyl - บีตา - d-glucosaminidase ( นากา ) และบีตา - กลูโคซิเดสถูกวัดสำหรับแต่ละ subsample จาก พ.ค. และ ก.ค. 2556 timepoints .บีตา - กลูโคซิเดสได้ทำการตรวจสอบดิน C ในขณะที่ n-acetyl - จักรยานบีตา - d-glucosaminidase ( นากา ) และวัดประเมินฟอสฟาเตสchitinolytic กิจกรรมสนับสนุน N และ C จักรยาน และปล่อยของของกลุ่มฟอสเฟตจากสารอินทรีย์โมเลกุลใหญ่ ตามลำดับ( tabatabai , 1994 ) เฉยๆดิน ( 0.5 กรัม ) ถูกระงับใน 50 มล.100 mM กรดมาเลอิกบัฟเฟอร์ pH 6.8 ) และ 0.25-ml ) จำนวนแล้วใน 96 แผ่น 16 วิเคราะห์ซ้ำ ( เวลส์ )ที่ใช้ , และแปดซ้ำของดับ ดินควบคุม , ควบคุมลบมาตรฐานอ้างอิง และบ่อว่างมาใช้ 25 μ M mub โซลูชั่นถูกใช้เป็นมาตรฐานอ้างอิง และแต่ละวิธีมีμ 0.01 โมลพื้นผิว จานถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 25 ° C สำหรับทุกพื้นผิว . ปฏิกิริยาถูกหยุดโดยการμล. 0.5 M โซเดียมไฮดรอกไซด์การเรืองแสงของแต่ละคนได้เป็นอย่างดี อ่าน 10 นาทีหลังจากใช้ นอกจากนี้ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยวัสดุ ( Synergy H1 , biotek ® Winooski , VT ) ที่365 nm ความตื่นเต้นและ 450 nm ออกมา