yeast strain. Transformants were as

yeast strain. Transformants were assayed by genomic PCR with one
primer specific for the GFP tag and a second specific for each ORF,
to determine whether the cassette had integrated at the appropriate
locus. A total of 6,029 strains with chromosomally GFP-tagged
ORFs were grown to mid-logarithmic phase in synthetic medium
and analysed by fluorescence microscopy; 4,156 of these showed
GFP signals above background levels (Table 1).
Micrographs of each GFP-tagged strain (Fig. 1b; see also Supplementary
Fig. S1), lacking ORF identifiers, were independently
evaluated by two scorers and initially classified into one or more of
12 subcellular localization categories (Table 2). We then refined
these categories by performing a series of co-localization experiments.
Haploid reference strains expressing monomeric red fluorescent
protein (mRFP)20 fusions to proteins whose localization had
been characterized previously (Table 2) were mated to approximately
700 GFP strains that were not assigned definitive localizations
by GFP microscopy alone, and the resulting diploid cells were
analysed by fluorescence microscopy (Fig. 1c). On the basis of this
analysis, proteins were assigned to an additional 11 localization
categories (Table 2). All information was captured into a database
(http://yeastgfp.ucsf.edu).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยีสต์สายพันธุ์ Transformants ถูก assayed โดย PCR ออกด้วยเฉพาะสำหรับแท็ก GFP และเฉพาะสองสำหรับแต่ละ ORF รองพื้นการตรวจสอบว่า เทปมีแบบเหมาะสมที รวมสายพันธุ์ 6,029 มีแท็ก GFP chromosomallyORFs ถูกปลูกระยะกลางลอการิทึมในอาหารสังเคราะห์และวิเคราะห์ ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง 4,156 ของเหล่านี้แสดงให้เห็นสัญญาณ GFP เหนือระดับพื้นหลัง (ตารางที่ 1)Micrographs ของแต่ละสายพันธุ์แท็ก GFP (รูป 1b ดูยังเสริมรูป S1), ขาด ORF ตัวบ่งชี้ ได้อย่างอิสระประเมิน โดยสองเรอร์ส และเริ่มแบ่งเป็นหนึ่ง12 subcellular แปลประเภท (ตารางที่ 2) เรากลั่นแล้วประเภทเหล่านี้ โดยการดำเนินการชุดของการทดลองร่วมแปลอ้างอิงพริกสายพันธุ์แสดง monomeric สีแดงเรืองแสงการแปลที่มีโปรตีนบางกว่า 20 โปรตีน (mRFP)ถูกลักษณะก่อนหน้า (ตาราง 2) มีสมรรถนะประมาณสายพันธุ์ GFP 700 ที่ไม่ได้กำหนดชัดเจน localizationsโดยเดียว GFP กล้องจุลทรรศน์ และผลเซลล์ฮอโมไซกัสวิเคราะห์ ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (รูปที่ 1 c) ตามนี้วิเคราะห์ โปรตีนโดยมอบหมายให้แปลที่ 11 เพิ่มเติมประเภท (ตารางที่ 2) ข้อมูลทั้งหมดถ่ายไปยังฐานข้อมูล(http://yeastgfp.ucsf.edu)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สายพันธุ์ของยีสต์ พลาสมิดถูก assayed โดยวิธี PCR กับจีโนมแนวทางที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ GFP แท็กและวินาทีที่เฉพาะเจาะจงสำหรับแต่ละ ORF ,เพื่อตรวจสอบว่ามีการเลือกที่เหมาะสมความเชื่อ . รวม 6029 สายพันธุ์ด้วย chromosomally GFP แท็กorfs ปลูกระยะกลางในอาหารสังเคราะห์ลอการิทึมและวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ; 4156 เหล่านี้แสดงสัญญาณ GFP สูงกว่าระดับพื้นหลัง ( ตารางที่ 1 )ของแต่ละสายพันธุ์ micrographs GFP แท็ก ( รูป 1B ; ดูเพิ่มเติมรูปที่ S1 ) ไม่ระบุ ORF , เป็นอิสระประเมิน โดย 2 ครั้งและเริ่มแบ่งเป็นหนึ่งหรือมากกว่าของ12 ประเภทจำกัดตําแหน่งภายในเซลล์ ( ตารางที่ 2 ) เราก็บริสุทธิ์ประเภทเหล่านี้โดยแสดงชุดของ CO จำกัดการทดลองโครโมโซมเกิดสายพันธุ์อ้างอิงแสดงสีแดงเรืองแสงโปรตีน ( โปรตีนที่ mrfp ) 20 fusions จำกัดมีเป็นลักษณะ ก่อนหน้านี้ ( ตารางที่ 2 ) ได้รับประมาณ700 GFP สายพันธุ์ที่ไม่ได้มอบหมาย localizations แตกหักโดย GFP กล้องจุลทรรศน์คนเดียว และส่งผลให้เกิดเซลล์คือวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ( ภาพที่ 1c ) บนพื้นฐานนี้การวิเคราะห์โปรตีนได้รับการจำกัดเพิ่มเติม 11ประเภท ( ตารางที่ 2 ) ข้อมูลทั้งหมดถูกบันทึกลงในฐานข้อมูล( http : / / yeastgfp . UCSF . edu )