2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals
Tocopherol, tri-palmitin, di-palmitin, palmitic acid, FAME Mix
(C8-C24) and PUFA (No. 3 from menhaden oil) standards, as well
as all the HPLC grade solvents, were purchased from Sigma–Aldrich
(Milan, Italy). Tocotrienol and carotenoid standards were
purchased from Cayman chemicals (Ann Arbor, MI, USA) and
CaroteNature (Lupsingen, Switzerland), respectively. High purity
carbon dioxide (99.995%) for supercritical fluid extraction was
purchased from Mocavero Ossigeno (Lecce, Italy).
2.2. Plant material processing
Ripe pumpkins (C. moschata Duch.) peponids, grown in Salento
(Apulia, Italy), were purchased from a local market. The rind was
removed and the peeled flesh (mesocarp), was chopped into small
pieces and dehydrated to constant weight either by a Christ ALPHA
2–4 LSC freeze-dryer (Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen
GmbH, Osterode am Harz, Germany) or, at 60 C, by a Salvis Lab
IC40 vacuum-drying oven (Bio Instruments S.r.l., Firenze, Italy).
Simultaneously, seeds were recovered and dehydrated in the
vacuum-drying oven.
Dried pumpkin flesh and seeds were ground in a laboratory ultra
centrifugal mill (ZM200, Retsch GmbH, Haan, Germany)
through 70 mesh (210 lm) or 35 mesh (500 lm) sieves, respectively.
Residual moisture in freeze- and oven-dried pumpkin matrices
and pumpkin seeds was measured gravimetrically, on 1.0 g
aliquots, after further drying at 105 C to constant weight in a
Büchi TO-50 infrared drier (Büchi Labortechnik AG, Postfach,
Switzerland). Aliquots (25 g each) of flesh matrix, milled seeds
(co-matrix) or of a blend of oven-dried matrix plus co-matrix
(1:1, w/w) were extracted by either SC-CO2 or CSE.
2.3. SC-CO2 and Soxhlet extraction
SC-CO2 extraction was carried out using a laboratory apparatus
(Spe-ed SFE system, Applied Separations, Allentown, PA, USA)
fitted with a 25 mL stainless-steel extraction vessel (ø = 1 cm;
h = 25 cm). For each extraction, 25 g of the fed material (matrix,
co-matrix or matrix/co-matrix blend) were packed into the vessel
and extracted statically (no fluid flow) for 15 min and subsequently
dynamically, for 60 min. The carbon dioxide flow rate
was kept constant at 4 mL/min. The other operative parameters
were 35 MPa and 60 C for pressure and temperature, respectively.
The extracted oils were stored, under enriched CO2 atmosphere
and protected from light, at 20 C until further analyses.
For CSE, hexane was used as solvent. The solvent was evaporated
to dryness at 40 C, under reduced pressure by a Rotavapor
(RE120, Büchi Labortechnik AG, Postfach, Switzerland) and the
resulting oil was stored as described above.
2.4. HPLC analysis of vitamin E and carotenoids
Each oil sample (0.1 g) was dissolved in 1 mL of ethyl acetate,
filtered through a 0.45 lm syringe filter (Millipore Corporation,
Billerica, MA, USA) and immediately analysed by HPLC without
extraction and saponification (Puspitasari-Nienaber, Ferruzzi, &
Schwartz, 2002).
Quali-quantitative analyses of tocols and carotenoids were carried
out using an Agilent 1100 Series HPLC system by the method
of Fraser, Pinto, Holloway, and Bramley (2000), slightly modified.
Vitamin E and carotenoids were separated using a reverse-phase
C30 column (5 lm, 250  4.6 mm) (YMC Inc., Wilmington, NC,
USA) with mobile phases consisting of methanol (A), 0.2% ammonium
acetate aqueous solution/methanol (20/80, v/v) (B) and
tert-methyl butyl ether (C). The isocratic elution was as follows:
0 min, 95% A and 5% B; 0–12 min, 80% A, 5% B and 15% C; 12–
42 min, 30% A, 5% B and 65% C; 42–60 min, 30% A, 5% B and 65%
C; 60–62 min, 95% A, and 5% B. The column was re-equilibrated
for 10 min between runs. The flow rate was 1.0 mL/min and the
column temperature was maintained at 25 C. The injection volume
was 10 lL. Absorbance was registered by diode array at wavelengths
of 475 nm for carotenoids and 290 nm for vitamin E.
Isoprenoids were identified by comparing their retention times
and UV–Vis spectra to authentic standards. The limit of detection
was 0.0004 AU, typically in the 2 ± 10 ng range per compound.
2.5. Neutral lipid determination
Neutral lipids were separated using 20  20 cm TLC Silica gel 60
glass plates (Merck Sharp & Dohme, Readington, NJ, USA) in
hexane/diethyl ether/acetic acid (70:30:1, v/v/v). Tri-palmitin, dipalmitin
(approx. 50% 1,2- and 50% 1,3-isomer) and palmitic acid
were used as external standards for triacylglycerols, diacylglycerols
and free fatty acids, respectively. TLC plates were sprayed with
cupric acetate/phosphoric acid reagent (3% w/v cupric acetate in
8% phosphoric acid) and incubated at 150 C for 1 h. The quantifi-
cation of neutral lipids was made densitometrically by a Kodak
Electrophoresis Documentation and Analysis System 290 using Kodak
ID 3.6 software (Kodak, New Haven, CT).
2.6. Sample preparation for fatty acid analysis
The derivatization of fatty acids was carried out according to
the DGF (C-VI 11a) method (Lange, 2000) with some modifications.
Three mL of 0.5 M NaOH (dissolved in methanol) were added to
0.1 g of the extracted oil. The mixture was incubated at 100 C
for 5 min in a water bath to dissolve lipids. After cooling at room
temperature, 2.0 mL of boron trifluoride in methanol (12% w/v)
were added and the sample incubated at 100 C for 30 min in a
water bath and then rapidly cooled in an ice bath before the addition
of 1 mL of hexane for extraction. The sample was vigorously
stirred for 30 s before the addition of 1 mL of a 0.6% w/v sodium
M. Durante et al. / Food Chemistry 148 (2014) 314–320 315
chloride solution. The esterified sample was placed in a refrigerator
for better phase separation. After collecting the supernatant 1.0 mL
of hexane was added and sample stirred. The supernatant was
collected and added to the previous fraction. The sample was concentrated
to a final volume of 1.0 mL for GC–MS analysis.
2.7. Fatty acid analysis by GC–MS
The analyses were performed according to Talà et al. (2013) on
a GC–MS system consisted of a Shimadzu GC-17A ver. 3.0, with MS
QP5050A. Compounds were separated on DB-5 capillary column
having 30 m length, 0.25 mm ID and 0.25 lm thickness. The GC
parameters were as follows: the temperature of the column was
80 C after injection then programmed at 10 C/min to 150 C, at
5 C/min to 250 C and maintained at constant temperature of
250 C for 15 min. Split injection was conducted with a split ratio
of 50:1, the flow-rate was 1.0 mL/min, carrier gas used was
99.999% pure helium, the injector temperature was 250 C and
the column inlet pressure was 74 kPa. The MS detection conditions
were as follows: interface temperature was set 250 C; ionisation
mode, EI+; electron energy, 70 eV; scanning method of acquisition,
ranging from 30 to 450, for mass/charge (m/z) was optimised.
Spectrum data were collected at 0.5 s intervals. Solvent cut time
was set at 2 min and 45 min retention time sufficient for separating
all the fatty acids. Compounds were identified by using online
NIST-library spectra and published MS data. Moreover, FAME Mix
(C8-C24) and PUFA-3 authentic standards were used to confirm
MS data.
2.8. Statistical analysis
Results are presented as the mean value ± standard deviation of
three independent experiments (n = 3 for each experiment).
Statistical analysis was based on a one-way ANOVA test. Holm–Sidak
test method was applied to establish significant differences between
means (p < 0.05). All statistical comparisons were
performed using SigmaStat version 11.0 software (Systat Software
Inc., Chicago, IL, USA).
3. Results and discussion
3.1. Effect of dehydration method on oil, vitamin E and carotenoid
yields
Vacuum oven- and freeze-drying of the yellow/orange mesocarp
of pumpkin ripe fruits allowed the preparation of dehydrated
pumpkin slices with a residual moisture content of approximately
8% and 12% w/w, respectively. The time required for dehydration of
an equal amount of fresh pumpkin flesh was almost the same independently
from the method. The vacuum oven-dried pumpkin
flesh slices appeared friable and suitable to be easily grinded and
milled in a fine powder (70 mesh); rather, those obtained by
freeze-drying were fluffy, slightly sticky and rubbery; thus care
had to be taken to prevent plugging of the mill’s classifying screen
holes, stick to the grinding chamber and production of friction and
excessive heat. The two dehydrated pumpkin flesh powders, thereafter
called matrices, were subjected to SC-CO2 extraction and CSE.
Table 1 shows a comparison of the operative conditions and oil
yields obtained using SC-CO2 extraction or CSE method from ovendried
and freeze-dried matrices. Regarding oven-dried matrix, SCCO2
resulted much more efficient than CSE in terms of solid–liquid
ratio, temperature, extraction time and oil yield obtained. When
CSE was used, no statistically significant difference (p = 0.096) in
oil yields was observed between oven- or freeze-dried matrices
[3.4 g/100 g dry matter (d.m.) and 3.2 g/100 g d.m., respectively].
On the contrary, SC-CO2 extraction gave a 7-fold higher oil yield
from the oven-dried (4.2 g/100 g d.m.) than the freeze-dried
(0.6 g/100 g d.m.) pumpkin matrix.
As far as total vitamin E and total carotenoid are concerned,
after SC-CO2 extraction of the oven-dried matrix, the obtained
yields were about 26% and 40%, respectively, lower than the values
obtained by CSE (Fig. 1). These differences resulted even greater
(>90% for both total vitamin E and total carotenoid yields) when
the freeze-dried matrix was used. This could be at least partially
ascribed to the differences in moisture content between the two
matrices. It is well known that the high water content of many
plant tissues and organs is detrimental to the efficient extraction
of lipophilic nutraceuticals with SC-CO2 since it increase the path
lengths over which non-polar extractives must transfer to the bulk
solvent (Lenucci et al., 2010; Shi et al., 2013; Wang & Weller,
2006). Conversely, water, within cert

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เคมีภัณฑ์Tocopherol, tri-palmitin, di palmitin กรด palmitic ชื่อเสียงผสม(C8-C24) และ PUFA (หมายเลข 3 จากน้ำมัน menhaden) มาตรฐาน อีกด้วยเป็นทั้งหมด HPLC เกรดหรือสารทำละลาย ซื้อจากซิก-Aldrichมิลาน อิตาลี) ได้มาตรฐาน Tocotrienol และ carotenoidซื้อสารเคมีเคย์ (Ann Arbor, MI สหรัฐอเมริกา) และCaroteNature (Lupsingen สวิตเซอร์แลนด์), ตามลำดับ ความบริสุทธิ์สูงคาร์บอนไดออกไซด์ (99.995%) การสกัดของเหลว supercritical ถูกซื้อจาก Mocavero Ossigeno (Lecce อิตาลี)2.2. โรงงานแปรรูปวัสดุฟักทองสุก (C. moschata Duch.) peponids, Salento ปลูก(แคว้นปูลยา อิตาลี), ถูกซื้อจากตลาดท้องถิ่น แคบถูกเอาออก และ peeled เนื้อ (mesocarp), ถูกสับเป็นขนาดเล็กชิ้น และอบแห้งให้คงน้ำหนักอย่างใดอย่างหนึ่ง โดยอัลฟาคริสต์2 – 4 LSC หยุดเป่า (มาร์ตินคริสต์ GefriertrocknungsanlagenGmbH, Osterode อัม Harz เยอรมนี) หรือ C 60 โดย Salvis LabIC40 เครื่องดูดฝุ่นแห้งเตาอบ (s.r.l.เครื่องมือชีวภาพ Firenze อิตาลี)พร้อมกัน การกู้คืน และอบแห้งในเมล็ดเตาอบสุญญากาศฟักทองเนื้อแห้งและเมล็ดพืชที่พื้นในห้องปฏิบัติการพิเศษโรงแรงเหวี่ยง (ZM200, Retsch GmbH, Haan เยอรมนี)ผ่าน 70 ตาข่าย (210 lm) หรือตาข่าย 35 (500 lm) sieves ตามลำดับความชื้นเหลือในเมทริกซ์แช่แข็ง - และเตาอบแห้งฟักทองและเมล็ดฟักทองมีวัด gravimetrically ใน 1.0 galiquots หลังจากเพิ่มเติม อบที่ 105 C น้ำหนักคงที่ในการบือถึง 50 drier อินฟราเรด (บือ Labortechnik AG, Postfachสวิตเซอร์แลนด์) Aliquots (25 กรัมละ) ของเมทริกซ์เนื้อ เมล็ดสาร(เมทริกซ์ร่วม) หรือการผสมผสานของเตาอบแห้งเมตริกซ์เมตริกซ์ร่วม(1:1, w/w) ถูกสกัด โดย SC CO2 หรือ CSE2.3 สกัด Soxhlet และ SC-CO2แยก SC CO2 ถูกดำเนินโดยใช้เครื่องมือห้องปฏิบัติการ(Spe-ed SFE ระบบ ใช้ประโยชน์ แอลเลน PA สหรัฐอเมริกา)มีเรือเหล็กสแตนเลสสกัด 25 mL (ø = 1 ซม.h = 25 cm) สำหรับแต่ละแยก 25 กรัมวัสดุเลี้ยงดู (เมตริกซ์ร่วมเมทริกซ์หรือเมทริกซ์/บริษัท-matrix ผสม) ถูกบรรจุลงในเรือและสกัดฟิกแบบคง (กระแสไม่ fluid) ใน 15 นาที และในเวลาต่อมาแบบไดนามิก การ 60 นาที อัตราการไหลของก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์มีเก็บไว้คงที่ที่ 4 mL/min วิธีปฏิบัติตนภายพารามิเตอร์อื่น ๆมีแรง 35 และ 60 C ความดันและอุณหภูมิ ตามลำดับแยกน้ำมันถูกเก็บไว้ ภายใต้บรรยากาศ CO2 ค่อนและได้รับการป้องกันจากไฟ 20 C จนถึงการวิเคราะห์เพิ่มเติมสำหรับ CSE มีใช้เฮกเซนเป็นตัวทำละลาย ตัวทำละลายถูกหายไปเพื่อความแห้งกร้านที่ 40 C ภายใต้ลดความดัน โดยการ Rotavapor(RE120 บือ Labortechnik AG, Postfach สวิตเซอร์แลนด์) และน้ำมันที่ได้ถูกเก็บไว้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น2.4 การการวิเคราะห์ HPLC ของวิตามินอีและ carotenoidsแต่ละตัวอย่างน้ำมัน (0.1 g) ไม่ละลายใน 1 mL ของเอทิล acetateกรองผ่าน 0.45 lm เข็มตัว (มาก คอร์ปอเรชั่นBillerica, MA, USA) และ analysed โดย HPLC โดยทันทีสกัดและสะพอนิฟิ (Puspitasari Nienaber, Ferruzzi, &Schwartz, 2002)ได้ดำเนินการวิเคราะห์เชิงปริมาณ Quali tocols และ carotenoidsออกใช้เป็นระบบ HPLC Agilent 1100 ชุดด้วยวิธีการเฟรเซอร์ Pinto ฮอลโลเวย์ และโรงเรียนแครนไลห์ (2000), แก้ไขเล็กน้อยวิตามินอีและ carotenoids ถูกแบ่งใช้กลับเฟสคอลัมน์ C30 (5 lm, 250 4.6 มม.) (YMC Inc. วิลมิ NCสหรัฐอเมริกา) กับเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเมทานอล (A), แอมโมเนีย 0.2%acetate อควีโซลูชัน/เมทานอล (20/80, v/v) (B) และtert methyl ด...อีเทอร์ (C) Elution isocratic คิดได้ดังนี้:0 นาที A 95% และ 5% B ต่ำสุด 0 – 12, 80% A, 5% B และ 15% C 12 –42 นาที 30% A, 5% B และ 65% C นาที 42-60, 30% A, 5% B และ 65%C นาที 60 – 62, 95% A และ 5% เกิด คอลัมน์ถูก equilibrated อีกครั้งสำหรับ 10 นาทีระหว่างทำงาน อัตราการไหล 1.0 mL/min และคอลัมน์อุณหภูมิเก็บรักษาที่ 25 เซลเซียส ปริมาตรฉีด10 จะ ลงทะเบียน absorbance โดยไดโอดอาร์เรย์ที่ความยาวคลื่นของ 475 nm carotenoids และ 290 nm สำหรับวิตามินอีระบุ โดยการเปรียบเทียบเวลาของพวกเขาคง Isoprenoidsและ UV – Vis แรมสเป็คตรามาตรฐานแท้ ขีดจำกัดของการตรวจสอบมี 0.0004 AU โดยทั่วไปในช่วง 2 ± 10 ng ต่อสารประกอบ2.5. ไขมันกลางกำหนดโครงการกลางถูกแยกโดยใช้ 20 ซม. 20 TLC ซิลิก้าเจล 60แผ่นแก้ว (เมอร์คชาร์ป แอนด์ Dohme, Readington, NJ สหรัฐอเมริกา) ในอีเทอร์เฮก เซน/diethyl/กรด อะซิติก (70:30:1, v/v/v) ตรี-palmitin, dipalmitin(ประมาณ 50% 1, 2 และไอโซเมอร์กับ 50% 1,3) และกรด palmiticใช้เป็นมาตรฐานภายนอกสำหรับ triacylglycerols, diacylglycerolsและกรดไขมัน ตามลำดับ แผ่น TLC ถูกฉีดพ่นด้วยรีเอเจนต์กรด cupric acetate/phosphoric (3% w/v cupric acetate ในกรดฟอสฟอริก 8%) และ incubated ที่ 150 C สำหรับ 1 h Quantifi-cation ของโครงการกลางทำ densitometrically โดยโกดักเอกสาร electrophoresis และวิเคราะห์ระบบ 290 ใช้โกดักซอฟแวร์ ID 3.6 (โกดัก นิวเฮ CT)2.6 เตรียมตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์กรดไขมันDerivatization กรดไขมันถูกดำเนินการตามDGF (C-วี 11a) วิธีการ (แลนจ์ 2000) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง3 mL ของ 0.5 M NaOH (ละลายในเมทานอล) ถูกเพิ่ม0.1 กรัมของน้ำมันแยก ส่วนผสมคือ incubated ที่ 100 Cสำหรับ 5 นาทีในการอาบน้ำการยุบโครงการ หลังจากทำความเย็นในห้องพักอุณหภูมิ 2.0 mL ของโบรอน trifluoride ในเมทานอล (12% w/v)เพิ่ม และตัวอย่าง incubated ที่ C 100 สำหรับ 30 นาทีในการน้ำอาบแล้ว อย่างรวดเร็วระบายความร้อนด้วยในห้องน้ำเป็นน้ำแข็งก่อนการเพิ่มของมล 1 ของเฮกเซนสำหรับสกัด ตัวอย่างเป็นดั่งกวนสำหรับ 30 s ก่อนที่จะเพิ่ม 1 mL เกลือแร่ 0.6% w/vม. Durante et al. / เคมีอาหาร 148 (2014) 314-320 315โซลูชั่นของคลอไรด์ ตัวอย่าง esterified ถูกวางไว้ในตู้เย็นสำหรับดีระยะแยก หลังจากรวบรวมมล 1.0 supernatantของเฮกเซนเพิ่ม และตัวอย่างกวนด้วย Supernatant ถูกรวบรวม และเพิ่มให้เป็นเศษส่วนก่อนหน้านี้ ตัวอย่างเข้มข้นให้มีปริมาตรสุดท้ายของ 1.0 mL สำหรับวิเคราะห์ GC – MS2.7 กรดไขมันวิเคราะห์ ด้วย GC-MSวิเคราะห์การดำเนินตาม Talà et al. (2013) ในระบบ GC – MS ประกอบด้วยการไม่ Shimadzu GC-17A 3.0 กับ MSQP5050A สารถูกแยกจากกันในคอลัมน์เส้นเลือดฝอย DB 5มีความยาว 30 เมตร รหัส 0.25 มม. และความหนา 0.25 lm การ GCพารามิเตอร์ได้ดังนี้: อุณหภูมิของคอลัมน์C 80 หลังจากฉีดแล้ว โปรแกรมที่ 10 C/นาที ถึง 150 C ที่5 C/นาที ถึง 250 C และเก็บรักษาที่อุณหภูมิคงC 250 สำหรับ 15 นาทีแบ่งฉีดได้ดำเนินการ ด้วยอัตราแยกเป็นของ 50:1 อัตราการไหล 1.0 mL/min ก๊าซผู้ขนส่งที่ใช้ได้ฮีเลียมบริสุทธิ์ 99.999% อุณหภูมิอัดถูก 250 C และความดันทางเข้าของคอลัมน์ถูก 74 kPa เงื่อนไขตรวจสอบ MSมีดังนี้: อินเทอร์เฟซอุณหภูมิตั้ง 250 C ionisationโหมด EI + อิเล็กตรอนพลังงาน 70 eV วิธีการซื้อ การสแกนตั้งแต่ 30 450 ค่ามวล (m/z) ถูกเหมาะงานกราฟฟิกมีการรวบรวมข้อมูลสเปกตรัมที่ 0.5 s ช่วง เวลาตัดตัวทำละลายตั้งเวลา 2 นาทีและ 45 นาทีคงพอสำหรับแยกทั้งหมดกรดไขมัน ระบุสารประกอบ โดยใช้ออนไลน์แรมสเป็คตรา NIST-ห้องสมุดและเผยแพร่ข้อมูล MS นอกจากนี้ ชื่อเสียงผสม(C8-C24) และ PUFA 3 แท้มาตรฐานใช้ในการยืนยันข้อมูล MS2.8. สถิติวิเคราะห์ผลลัพธ์จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของทดลองด้วยตนเอง 3 (n = 3 สำหรับแต่ละการทดลอง)วิเคราะห์ทางสถิติเป็นพื้นฐานในการทดสอบการวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียว Holm – Sidakใช้วิธีการทดสอบเพื่อกำหนดความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างหมายความว่า (p < 0.05) เปรียบเทียบทางสถิติทั้งหมดได้ดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์รุ่น 11.0 SigmaStat (Systat ซอฟต์แวร์อิงค์ ชิคาโก IL สหรัฐอเมริกา)3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. ผลของวิธีการคายน้ำน้ำมัน วิตามินอี และ carotenoidอัตราผลตอบแทนเครื่องดูดฝุ่นเตาอบ - และ freeze - drying ของ mesocarp เหลืองผลไม้สุกฟักทองได้เตรียมของแห้งฟักทองชิ้น มีความชื้นเหลือเนื้อหาของประมาณ8% และ 12% w/w ตามลำดับ ระยะเวลาการคายน้ำของจำนวนเนื้อฟักทองสดเท่าเกือบเป็นอิสระจากวิธีการ เครื่องดูดฝุ่นเตาอบแห้งฟักทองชิ้นเนื้อปรากฏ friable และเหมาะสมจะได้ grinded และปลายในละออง (ตาข่าย 70); ค่อนข้าง ผู้ที่ได้รับโดยขั้น คำนุ่ม เล็กน้อยเหนียว rubbery ดังนั้นการดูแลมีการดำเนินการเพื่อป้องกันการเสียบของโรงสีของประเภทหน้าจอหลุม ติดหอการค้าและการผลิตของแรงเสียดทานบด และความร้อนมากเกินไป สองอบเนื้อฟักทองผง หลังจากนั้นเรียกว่าเมทริกซ์ ถูกต้องแยก SC CO2 และ CSEตารางที่ 1 แสดงการเปรียบเทียบวิธีปฏิบัติตนภายเงื่อนไขและน้ำมันอัตราผลตอบแทนที่ได้รับโดยใช้วิธี CSE จาก ovendried หรือแยก SC CO2และเมทริกซ์กรอบ เกี่ยวกับเมตริกซ์เตาอบแห้ง SCCO2resulted much more efficient than CSE in terms of solid–liquidratio, temperature, extraction time and oil yield obtained. WhenCSE was used, no statistically significant difference (p = 0.096) inoil yields was observed between oven- or freeze-dried matrices[3.4 g/100 g dry matter (d.m.) and 3.2 g/100 g d.m., respectively].On the contrary, SC-CO2 extraction gave a 7-fold higher oil yieldfrom the oven-dried (4.2 g/100 g d.m.) than the freeze-dried(0.6 g/100 g d.m.) pumpkin matrix.As far as total vitamin E and total carotenoid are concerned,after SC-CO2 extraction of the oven-dried matrix, the obtainedyields were about 26% and 40%, respectively, lower than the valuesobtained by CSE (Fig. 1). These differences resulted even greater(>90% for both total vitamin E and total carotenoid yields) whenthe freeze-dried matrix was used. This could be at least partiallyascribed to the differences in moisture content between the twomatrices. It is well known that the high water content of manyplant tissues and organs is detrimental to the efficient extractionof lipophilic nutraceuticals with SC-CO2 since it increase the pathlengths over which non-polar extractives must transfer to the bulksolvent (Lenucci et al., 2010; Shi et al., 2013; Wang & Weller,2006). Conversely, water, within cert

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมีโทโคฟีรอ, ไตร palmitin, di-palmitin กรดปาล์มิติ, FAME ผสม (C8-C24) และ PUFA (ฉบับที่ 3 จาก menhaden น้ำมัน) มาตรฐานเช่นเดียวกับทุกตัวทำละลายระดับHPLC ถูกซื้อมาจาก Sigma-Aldrich (มิลาน , อิตาลี). Tocotrienol และมาตรฐาน carotenoid ถูกซื้อมาจากสารเคมีที่เคย์แมน(Ann Arbor, MI, USA) และCaroteNature (Lupsingen วิตเซอร์แลนด์) ตามลำดับ มีความบริสุทธิ์สูงก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ (99.995%) สำหรับการสกัดของเหลว supercritical ถูกซื้อมาจากMocavero Ossigeno (Lecce, อิตาลี). 2.2 โรงงานแปรรูปวัสดุฟักทองสุก (ค moschata Duch.) peponids ที่ปลูกใน Salento (อาปูเลียอิตาลี) ที่ซื้อมาจากตลาดในประเทศ เปลือกที่ถูกถอดออกและปอกเปลือกเนื้อ (เนื้อ) ถูกสับเป็นขนาดเล็กชิ้นและแห้งให้น้ำหนักคงที่ทั้งโดยพระคริสต์ALPHA 2-4 LSC แช่แข็งเครื่องเป่า (มาร์ตินคริส Gefriertrocknungsanlagen GmbH, Osterode am Harz, เยอรมนี) หรือที่ 60 C โดย Salvis แล็บเตาอบIC40 สูญญากาศการอบแห้ง (Bio Srl เครื่องดนตรี, Firenze, อิตาลี). พร้อมกันเมล็ดหายและแห้งในเตาอบสูญญากาศการอบแห้ง. เนื้อฟักทองแห้งและเมล็ดมาบดในห้องปฏิบัติการพิเศษโรงงานแรงเหวี่ยง (ZM200 , Retsch GmbH, Haan, เยอรมนี) ผ่าน 70 ตาข่าย (210 ไมครอน) หรือ 35 ตาข่าย (500 ลูเมน) sieves ตามลำดับ. ความชื้นตกค้างใน freeze- และเตาอบแห้งเมทริกซ์ฟักทองและเมล็ดฟักทองวัดgravimetrically ใน 1.0 กรัมaliquots หลังจาก ต่อการอบแห้งที่ 105 C ถึงน้ำหนักคงที่ในBüchi TO-50 แห้งอินฟราเรด (Büchi Labortechnik แบงก์ Postfach, วิตเซอร์แลนด์) aliquots (25 กรัม) ของเมทริกซ์เนื้อเมล็ดข้าวสาร(ร่วมเมทริกซ์) หรือส่วนผสมของเมทริกซ์เตาอบแห้งรวมทั้งร่วมเมทริกซ์. (1: 1, w / w) ถูกสกัดโดย SC-CO2 หรือ CSE 2.3 . SC-CO2 และวิธีการสกัดแบบสกัดสกัดSC-CO2 ได้รับการดำเนินการโดยใช้อุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ(Spe เอ็ดระบบ SFE ประยุกต์แยก, Allentown, PA, สหรัฐอเมริกา) ติดตั้งกับ 25 มิลลิลิตรเรือสกัดสแตนเลส (O = 1 ซมชั่วโมง= 25 ซม.) สำหรับการสกัดแต่ละ 25 กรัมของวัสดุอาหาร (เมทริกซ์ร่วมเมทริกซ์หรือเมทริกซ์/ ร่วมผสมผสานเมทริกซ์) ได้รับการบรรจุลงในเรือและสกัดแบบคงที่(ไม่ไหล) เป็นเวลา 15 นาทีและต่อมาได้แบบไดนามิก60 นาที อัตราการไหลของก๊าซคาร์บอนคงที่ 4 มิลลิลิตร / นาที พารามิเตอร์การผ่าตัดอื่น ๆ35 เมกะปาสคาลและ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลาความดันและอุณหภูมิตามลำดับ. น้ำมันที่สกัดได้ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศที่อุดมด้วย CO2 และป้องกันจากแสงที่ 20 C จนการวิเคราะห์ต่อไป. สำหรับ CSE เฮกเซนถูกนำมาใช้เป็นตัวทำละลาย ตัวทำละลายระเหยแห้งที่ 40 องศาเซลเซียสภายใต้ความกดดันที่ลดลงโดย Rotavapor (RE120, Büchi Labortechnik แบงก์ Postfach วิตเซอร์แลนด์) และน้ำมันส่งผลให้ได้รับการจัดเก็บไว้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น. 2.4 การวิเคราะห์ HPLC ของวิตามินอีและ carotenoids แต่ละตัวอย่างน้ำมัน (0.1 กรัม) ถูกละลายใน 1 มิลลิลิตรเอทิลอะซีเต, กรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยา LM 0.45 (คคอร์ปอเรชั่นบิลเลริกา, MA, USA) และวิเคราะห์ได้ทันทีโดยวิธี HPLC โดยไม่ต้องสกัดและสะพอ( Puspitasari-Nienaber, Ferruzzi และSchwartz, 2002). การวิเคราะห์ Quali-เชิงปริมาณของโตคอและ carotenoids ได้ดำเนินการออกมาใช้Agilent 1100 ระบบชุด HPLC โดยวิธีการของเฟรเซอร์ปินโต, Holloway และ Bramley (2000), การแก้ไขเล็กน้อย. วิตามิน อีและนอยด์ถูกแยกออกโดยใช้แบบย้อนกลับเฟสC30 คอลัมน์ (5 LM 250? 4.6 มิลลิเมตร) (YMC อิงค์ Wilmington, NC, USA) มีขั้นตอนมือถือประกอบด้วยเมทานอล (A), 0.2% แอมโมเนียมสารละลายอะซิเตต/ เมทานอล (20/80, v / v) (ข) และtert-methyl อีเทอร์บิวทิล (C) ชะ isocratic ดังนี้0 นาที, 95% และ 5% B; 0-12 นาที, 80% A, B 5% และ 15% C; 12- 42 นาที, 30%, B 5% และ 65% C; 42-60 นาที, 30%, B 5% และ 65% C; 60-62 นาที, 95% และ 5% บีคอลัมน์อีกครั้ง equilibrated เป็นเวลา 10 นาทีระหว่างวิ่ง ที่ได้รับอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์ถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ25 องศาเซลเซียสปริมาณการฉีด10 LL การดูดกลืนแสงได้รับการจดทะเบียนจากอาร์เรย์ไดโอดในช่วงความยาวคลื่น475 นาโนเมตรสำหรับ carotenoids และ 290 นาโนเมตรสำหรับวิตามินอีisoprenoids ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาของพวกเขาและสเปกตรัมUV-Vis มาตรฐานที่แท้จริง ขีด จำกัด ของการตรวจสอบเป็น0.0004 AU, มักจะอยู่ใน 2 ± 10 นาโนกรัมต่อช่วงสารประกอบ. 2.5 ความมุ่งมั่นที่เป็นกลางไขมันไขมันที่เป็นกลางที่ถูกแยกออกจากกันโดยใช้ 20? 20 ซม TLC ซิลิกาเจล 60 แผ่นกระจก (เมอร์คชาร์ปแอนด์ Dohme, Readington, นิวเจอร์ซีย์สหรัฐอเมริกา) ในเฮกเซน/ อีเทอร์ / กรดอะซิติก (70: 30: 1, v / v / v) Tri-palmitin, dipalmitin (ประมาณ. 50% 1,2- และ 50% 1,3-isomer) และกรดปาล์มิติถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐานภายนอกสำหรับtriacylglycerols, diacylglycerols และกรดไขมันอิสระตามลำดับ แผ่น TLC ถูกพ่นด้วยCupric อะซิเตท / สารกรดฟอสฟอรัส (3% w / v acetate Cupric ใน8% กรดฟอสฟอรัส) และบ่มที่ 150 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง quantifi- ไอออนบวกของไขมันที่เป็นกลางที่ถูกสร้างขึ้นโดย densitometrically Kodak เอกสาร Electrophoresis และวิเคราะห์ระบบ 290 ใช้ Kodak ID 3.6 ซอฟแวร์ (Kodak, New Haven, CT). 2.6 การเตรียมตัวสำหรับการวิเคราะห์กรดไขมันอนุพันธ์ของกรดไขมันได้ดำเนินการตามDgf (C-VI 11a) วิธีการ (มีเหตุมีผล, 2000) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง. สามมิลลิลิตร 0.5 M NaOH (ละลายในเมทานอล) มีการเพิ่ม0.1 กรัม ของน้ำมันที่สกัด ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่ 100 C เป็นเวลา 5 นาทีในอ่างน้ำเพื่อละลายไขมัน หลังจากเย็น ณ ห้องอุณหภูมิ2.0 มิลลิลิตร trifluoride โบรอนในเมทานอล (12% w / v) มีการเพิ่มและตัวอย่างบ่มที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีในอ่างน้ำแล้วระบายความร้อนอย่างรวดเร็วในห้องอาบน้ำน้ำแข็งก่อนที่จะเพิ่มจาก1 มิลลิลิตร เฮกเซนในการสกัด กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับแรงขยับ 30 ก่อนนอกเหนือจาก 1 มิลลิลิตรของ 0.6% w / v โซเดียมเมตร Durante et al, / อาหารเคมี 148 (2014) 314-320 315 แก้ปัญหาคลอไรด์ ตัวอย่าง esterified ถูกวางไว้ในตู้เย็นสำหรับการแยกเฟสที่ดีขึ้น หลังจากที่เก็บรวบรวมใส 1.0 มิลลิลิตรของเฮกเซนถูกบันทึกและตัวอย่างกวน สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมและเพิ่มเข้าไปในส่วนก่อนหน้านี้ ตัวอย่างเข้มข้นปริมาณสุดท้ายของ 1.0 มิลลิลิตรสำหรับการวิเคราะห์ GC-MS. 2.7 กรดไขมันโดยการวิเคราะห์ GC-MS วิเคราะห์ถูกดำเนินการตาม Tala et al, (2013) บนระบบGC-MS ประกอบด้วย Shimadzu GC-17A เวอร์ชั่น 3.0 กับ MS QP5050A สารประกอบถูกแยกออกใน DB-5 คอลัมน์เส้นเลือดฝอยมี30 เมตรยาว 0.25 มิลลิเมตรและความหนา ID LM 0.25 GC พารามิเตอร์มีดังนี้อุณหภูมิของคอลัมน์เป็น80 องศาเซลเซียสหลังจากฉีดแล้วโปรแกรมที่ 10 C / นาที 150 C ที่5 C / นาที 250 C และการบำรุงรักษาที่อุณหภูมิคงที่250 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที ฉีดแยกได้ดำเนินการกับอัตราส่วนแบ่ง50: 1 อัตราการไหลเป็น 1.0 มิลลิลิตร / นาที, ก๊าซที่ใช้เป็น99.999% ฮีเลียมบริสุทธิ์อุณหภูมิหัวฉีด 250 ซีและความดันขาเข้าคอลัมน์74 กิโลปาสคาล เงื่อนไขการตรวจสอบ MS มีดังนี้อุณหภูมิอินเตอร์เฟซที่ถูกตั้ง 250 C; Ionisation โหมด EI +; พลังงานอิเล็กตรอน 70 eV; วิธีการสแกนของการเข้าซื้อกิจการตั้งแต่ 30-450 สำหรับมวล / ค่าใช้จ่าย (m / z) ถูกปรับให้เหมาะสม. ข้อมูลสเปกตรัมที่ถูกเก็บรวบรวมในช่วงเวลา 0.5 วินาที เวลาตัดตัวทำละลายตั้งอยู่ที่ 2 นาทีและ 45 นาทีเก็บรักษาเวลาเพียงพอสำหรับการแยกทั้งหมดกรดไขมัน สารประกอบที่ถูกระบุโดยใช้ออนไลน์สเปกตรัม NIST ห้องสมุดและเผยแพร่ข้อมูล MS นอกจากนี้ FAME ผสม(C8-C24) และ PUFA-3 มาตรฐานของแท้ถูกนำมาใช้เพื่อยืนยันข้อมูลMS. 2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติผลการค้นหาจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานของการทดลองสามอิสระ(n = 3 สำหรับการทดสอบในแต่ละ). การวิเคราะห์ทางสถิติอยู่บนพื้นฐานของทางเดียว ANOVA ทดสอบ เกาะ-Sidak วิธีการทดสอบถูกนำมาใช้เพื่อสร้างความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างหมายความว่า (p <0.05) การเปรียบเทียบทางสถิติทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้รุ่น SigmaStat 11.0 ซอฟแวร์ (ซิสแตทซอฟแวร์อิงค์, Chicago, IL, USA). 3 และการอภิปรายผล3.1 ผลของวิธีการคายน้ำในน้ำมันวิตามินอีและ carotenoid อัตราผลตอบแทนฝุ่น oven- และแช่แข็งแห้งของสีเหลือง / ส้มเนื้อของผลไม้สุกฟักทองได้รับอนุญาตให้จัดทำแห้งหั่นฟักทองที่มีความชื้นเหลือประมาณ8% และ 12% w / W, ตามลำดับ เวลาที่ใช้สำหรับการคายน้ำของจำนวนเงินที่เท่ากันของเนื้อฟักทองสดเกือบจะเหมือนกันเป็นอิสระจากวิธีการ เตาอบแห้งสูญญากาศฟักทองชิ้นเนื้อปรากฏเปราะและเหมาะสมที่จะบดได้อย่างง่ายดายและข้าวสารในผงละเอียด(70 ตาข่าย); แต่ผู้ที่ได้รับโดยการแช่แข็งแห้งเป็นนุ่มเหนียวเล็กน้อยและยาง; ดังนั้นการดูแลจะต้องมีการดำเนินการเพื่อป้องกันการอุดตันของหน้าจอการจำแนกประเภทของโรงงานหลุมติดกับห้องบดและการผลิตของแรงเสียดทานและความร้อนมากเกินไป ทั้งสองผงเนื้อฟักทองแห้งหลังจากนั้นการฝึกอบรมที่เรียกว่าถูกยัดเยียดให้สกัด SC-CO2 และ CSE. ตารางที่ 1 แสดงการเปรียบเทียบเงื่อนไขการผ่าตัดและน้ำมันอัตราผลตอบแทนที่ได้รับการสกัดโดยใช้SC-CO2 หรือวิธี CSE ovendried จากการฝึกอบรมและแห้ง เกี่ยวกับเมทริกซ์เตาอบแห้ง SCCO2 ส่งผลให้มีประสิทธิภาพมากขึ้นกว่า CSE ในแง่ของการที่เป็นของแข็งของเหลวอัตราส่วนอุณหภูมิเวลาการสกัดและผลผลิตน้ำมันที่ได้ เมื่อCSE ถูกนำมาใช้ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p = 0.096) ในอัตราผลตอบแทนที่น้ำมันถูกพบระหว่างoven- หรือเมทริกซ์แห้ง[3.4 กรัม / 100 กรัมวัตถุแห้ง (DM) และ 3.2 กรัม / 100 กรัม DM ตามลำดับ]. เมื่อวันที่ ตรงกันข้ามสกัด SC-CO2 ให้ 7 เท่าผลผลิตน้ำมันที่สูงขึ้นจากเตาอบแห้ง(4.2 กรัม / 100 กรัม DM) กว่าแห้ง(0.6 กรัม / 100 กรัม DM) เมทริกซ์ฟักทอง. เท่าวิตามินรวม E และรวม carotenoid มีความกังวล, หลังจากสกัด SC-CO2 ของเมทริกซ์เตาอบแห้งที่ได้รับอัตราผลตอบแทนประมาณ26% และ 40% ตามลำดับซึ่งต่ำกว่าค่าที่ได้จากการCSE (รูปที่ 1). ความแตกต่างเหล่านี้ส่งผลที่ยิ่งใหญ่กว่า(> 90% สำหรับทั้งวิตามินอีรวมและอัตราผลตอบแทนรวม carotenoid) เมื่อเมทริกซ์แห้งถูกนำมาใช้ นี้อาจจะอย่างน้อยบางส่วนกำหนดความแตกต่างในความชื้นระหว่างสองเมทริกซ์ เป็นที่ทราบกันดีว่าปริมาณน้ำที่สูงของหลายเนื้อเยื่อพืชและอวัยวะเป็นอันตรายต่อการสกัดที่มีประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์เสริมอาหารlipophilic กับ SC-CO2 เพราะมันเพิ่มเส้นทางความยาวมากกว่าที่สารแทรกไม่มีขั้วจะต้องถ่ายโอนไปยังกลุ่มตัวทำละลาย(Lenucci et al, . 2010; ชิ et al, 2013;. วังและเวลเลอร์, 2006) ตรงกันข้ามน้ำที่อยู่ในใบรับรอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมี
รอล ไตร palmitin , DI palmitin กรด acid
ผสมชื่อเสียง ( c8-c24 ) และ PUFA ( หมายเลข 3 จากเมนแฮเดนน้ำมัน ) มาตรฐาน เช่น
เป็นทั้งหมด 4 เกรดตัวทำละลาย ซื้อมาจาก Sigma –ดิช
( มิลาน , อิตาลี ) โทโคไทรอีนและมาตรฐานคาโรทีนอยด์ถูก
ซื้อจาก เคย์แมน เคมีภัณฑ์ ( Ann Arbor , MI , สหรัฐอเมริกา ) และ
carotenature ( lupsingen , สวิตเซอร์แลนด์ )ตามลำดับ คาร์บอนความบริสุทธิ์สูง ( 99.995
% ) สำหรับการสกัด supercritical fluid
ซื้อจาก mocavero ossigeno ( เลชเช่ อิตาลี )
2.2 . วัสดุปลูกฟักทองสุกการประมวลผล
( C . moschata ช์ ) peponids ปลูกในซาเลนโท
( อิตาลี , อิตาลี ) ซื้อมาจากตลาดในประเทศ เปลือกเป็น
เอาออกและปอกเปลือก ( เปลือก ) , เนื้อหั่นเล็ก
ชิ้นและอบแห้งน้ำหนักคงที่โดยคริสต์อัลฟา
2 – 4 , แช่แข็งแห้ง ( มาร์ติน พระคริสต์ gefriertrocknungsanlagen
GmbH , Osterode am ฮาร์ทส์ , เยอรมนี ) หรือ ที่ 60 องศาเซลเซียส โดย salvis Lab
ic40 เครื่องดูดฝุ่นแห้งเตาอบ ( BIO เครื่องมือ Srl , Firenze , อิตาลี )
พร้อมกันเมล็ดหายและขาดน้ำ อบแห้งสูญญากาศใน
.
แห้ง เนื้อฟักทอง และเมล็ดดินในห้องปฏิบัติการพิเศษ
โรงสีแรงเหวี่ยง ( zm200 retsch GmbH , แฮน , Germany )
ผ่าน 70 mesh ( 210 LM ) หรือ 35 ตาข่าย ( 500 LM ) sieves ตามลำดับ
เหลือความชื้นในแช่แข็งและอบแห้ง และเมล็ดฟักทอง ฟักทอง เมทริกซ์
วัด gravimetrically บน 1.0 g
เฉยๆ หลังจากการอบแห้งที่ 105 C คงที่ต่อไป น้ำหนักใน
B ü chi to-50 อินฟราเรด ( B ü chi แห้ง labortechnik AG , postfach
, สวิตเซอร์แลนด์ )เฉยๆ ( 25 กรัมแต่ละ ) ของเมทริกซ์เนื้อข้าวสารเมล็ด
( Co Matrix ) หรือการผสมของเตาอบแห้ง Matrix Plus Co เมทริกซ์ ( 1
, w / w ) ถูกสกัดโดย sc-co2 หรือ CSE .
2.3 sc-co2 1
sc-co2 และการสกัดการสกัดโดยใช้ห้องปฏิบัติการเครื่องมือ
( เอสพี ) เทคโนโลยีระบบที่ใช้แยก , Allentown PA , USA )
พอดีกับ 25 ml สแตนเลสสกัดเรือ ( ขึ้น =
1 ซม.H = 25 cm ) สำหรับแต่ละแยก 25 กรัมของป้อนวัสดุ ( เมทริกซ์เมทริกซ์หรือเมทริกซ์ /
Co Co เมทริกซ์ผสม ) ที่ถูกบรรจุในภาชนะและสกัดด้วย
( ไม่มีของเหลวไหล ) 15 นาที และภายหลัง
แบบไดนามิกสำหรับ 60 นาที คาร์บอนไดออกไซด์คงที่ที่อัตราการไหล
4 มิลลิลิตร / นาที อื่น ๆ พารามิเตอร์ปฏิบัติการ
35 MPa และความดันและอุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส ตามลำดับ
แยกน้ำมันที่ถูกเก็บไว้ภายใต้บรรยากาศที่อุดมด้วย CO2
และป้องกันจากแสง ที่ 20 C จนถึงการวิเคราะห์เพิ่มเติม .
สำหรับ CSE ารใช้เป็นตัวทำละลาย ตัวทำละลายคือระเหย
dryness ที่ 40 องศาเซลเซียส ภายใต้ความดันลดลง โดย rotavapor
( re120 B ü chi labortechnik AG , postfach , สวิตเซอร์แลนด์ ) และ
ที่เกิดน้ำมันเก็บไว้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น .
2.4 . การวิเคราะห์ HPLC ของวิตามินอีและแคโรทีนอยด์