Peptide mapping of ASC and PSC was

Peptide mapping of ASC and PSC was performed according to the
method of Kittiphattanabawon et al. (2005) with slight modification.
A collagen sample (6 mg) was dissolved in 1 ml of 0.1 M sodium
phosphate, pH 7.2 containing 0.5% (w/v) SDS, the mixture
preheated at 45°C for 3 h and 300 µl of the preparation transferred
to test tubes for digestion. To initiate the digestion, 20 µl of lysyl
endopeptidase from Achromobacter lyticus, (5.0 µg/ml) was added
to the mixture, which was then incubated at 37°C for 5 min.
Proteolysis was stopped by boiling for 3 min. SDS-PAGE was
performed by the method of Laemmli (1970) in 10% acrylamide
NuPAGE Bis-Tris Mini Gels with MOPS buffer, followed by staining
and destaining as previously described.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การแม็ปเปปไทด์ของ ASC และ PSC ดำเนินการตามวิธีของ Kittiphattanabawon et al. (2005) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตัวอย่างคอลลาเจน (6 มิลลิกรัม) ละลายใน 1 มิลลิลิตรของโซเดียม 0.1 Mฟอสเฟต pH 7.2 0.5% (w/v) SDS ส่วนผสมที่ประกอบด้วยร้อนที่ 45° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงและ 300 µl ของการเตรียมการโอนย้ายการทดสอบท่อสำหรับย่อยอาหาร การเริ่มต้นการย่อยอาหาร 20 µl ของ lysylจาก Achromobacter lyticus, endopeptidase (5.0 µg/ml) ถูกเพิ่มส่วนผสม ที่แล้ว incubated ที่ 37° C เป็นเวลา 5 นาทีหยุด proteolysis โดยต้มสำหรับ 3 นาทีหน้า SDSดำเนินการ โดยวิธีการของ Laemmli (1970) ใน 10% อะคริลาไมด์เจมินิทริสเรทติ้ง Bis NuPAGE กับ MOPS บัฟเฟอร์ ตาม ด้วยการย้อมสีdestaining ตามที่เคย อธิบายไว้แล้ว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำแผนที่ของเปปไทด์และ ASC PSC ได้ดำเนินการตาม
วิธีการของ Kittiphattanabawon et al, (2005) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย.
ตัวอย่างคอลลาเจน (6 มก.) ถูกละลายใน 1 มิลลิลิตร 0.1 M โซเดียม
ฟอสเฟตค่า pH 7.2 ที่มี 0.5% (w / v) SDS ผสม
อุ่นที่ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมงและ 300 ไมโครลิตร ของการเตรียมการถ่ายโอน
ไปยังหลอดทดสอบสำหรับการย่อยอาหาร เพื่อเริ่มต้นการย่อยอาหาร 20 ไมโครลิตรของ lysyl
endopeptidase จาก Achromobacter lyticus (5.0 g / ml) ถูกเพิ่ม
ส่วนผสมที่ถูกบ่มแล้วที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที.
proteolysis ก็หยุดโดยการต้มเป็นเวลา 3 นาที ระบบ SDS-PAGE ได้รับการ
ดำเนินการโดยวิธีการของ Laemmli (1970) โดย 10% ริลาไมด์
NuPAGE Bis-Tris มินิเจลกับ MOPS บัฟเฟอร์ตามด้วยการย้อมสี
และ destaining ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แผนที่ของ ASC เปปไทด์และการปฏิบัติตามการดูแลรักษาวิธี kittiphattanabawon et al . ( 2005 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยคอลลาเจนตัวอย่าง ( 6 มก. ) ละลายใน 1 ml เท่ากับ 0.1 โมลาร์โซเดียมฟอสเฟต pH 7.2 ที่มี 0.5% ( w / v ) SDS , ผสมเตาอบที่อุณหภูมิ 45 องศา C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงและ 300 µล. เตรียมโอนทดสอบหลอดสำหรับการย่อยอาหาร เริ่มย่อยอาหาร µ lysyl 20 ล.โดเพปทิเดสจาก lyticus โครโมแบคเตอร์ ( 5.0 µ g / ml ) คือเพิ่มในการผสม ซึ่งเป็น แล้วบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 5 นาทีโปรตีโ ลซิสถูกหยุดโดยต้มนาน 3 นาที เอนไซม์ คือดำเนินการโดยวิธีการของ laemmli ( 1970 ) 10% อะคริลาไมด์nupage ทวิบริษัทมินิเจลกับไม้ถูพื้น บัฟเฟอร์ ตามด้วย .และ destaining ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้