Batch cultivationsFor evaluation of

Batch cultivations

For evaluation of the malic acid production capabilities, batch cultivations in shake flasks and fermentors were carried out.

The cultivations in bioreactors were performed in 2.7-L Applikon bioreactors (Applikon, Schiedam, The Netherlands) with 2 L of working volume.

Reactors were equipped with two Rushton six-blade disc impellers, and the temperature was maintained at 34 °C. The pH was buffered by the calcium carbonate in the medium. The temperature, agitation, gassing, pH, and composition of the off-gas were monitored and/or controlled using the DasGip monitoring and control system (DasGip, Jülich, Germany).

The stirrer speed was set to 950 rpm and the aeration rate to 1 vvm (volume of gas per volume of fermentation broth per minute).

Concentrations of oxygen and carbon dioxide in the exhaust gas were analyzed with the DasGip fedbatch-pro® gas analysis systems with the off-gas analyzer GA4 based on zirconium dioxide and a two-beam infrared sensor.

In case of shake flask cultivations for enzyme assays and RNA extraction, the strains were incubated in 100 mL MAF4AS medium in 500-mL Erlenmeyer flasks with agitation at 250 rpm in an orbital shaker.

For 13C tracer experiments, the strains were cultivated in 250-mL shake flasks containing 50 mL MAF4AS with 1-13C-labelled glucose as the carbon source at a concentration of 25 g L−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชุด cultivationsสำหรับการประเมินความสามารถการผลิตกรด ชุด cultivations ในขวดเขย่าและ fermentors ดำเนินการ Cultivations ใน bioreactors ถูกดำเนินการใน 2.7 L bioreactors การ Applikon (Applikon สคีดัม เนเธอร์แลนด์) กับ 2 ลิตรทำ เตาปฏิกรณ์ได้พร้อมกับใบพัด 6 กลีบดิสก์ Rushton สอง และอุณหภูมิถูกเก็บรักษาไว้ที่ 34 องศาเซลเซียส ค่า pH คือบัฟเฟอร์ โดยแคลเซียมคาร์บอเนตในสื่อ อุณหภูมิ ก่อกวน แก๊ส pH และองค์ประกอบของก๊าซปิดถูกตรวจสอบ หรือควบคุมการใช้ DasGip การตรวจสอบ และควบคุมระบบ (DasGip ยือ เยอรมนี) ความเร็วในการช้อนคนตั้ง 950 รอบต่อนาทีและอัตราเติมอากาศ 1 vvm (ปริมาตรของแก๊สต่อปริมาตรของน้ำซุปหมักต่อนาที)ความเข้มข้นของออกซิเจนและคาร์บอนไดออกไซด์ในก๊าซไอเสียมาวิเคราะห์กับ DasGip fedbatch-pro ® ก๊าซระบบวิเคราะห์ ด้วยตัววิเคราะห์ก๊าซที่ออก GA4 อิงเซอร์โคเนียมไดออกไซด์และเซนเซอร์อินฟราเรดสองลำแสงในกรณี cultivations หนาวสั่น assays เอนไซม์และ RNA แยก สายพันธุ์ได้รับการกกในปานกลาง MAF4AS 100 มล. 500 มล.ขวด Erlenmeyer กับความปั่นป่วนที่ 250 rpm ในวัติวงการ สำหรับการทดลองติดตาม 13C สายพันธุ์ที่ถูกปลูกใน 250 มิลลิลิตรเขย่าขวด 50 mL ที่ประกอบด้วย MAF4AS มีกลูโคส 1 13C ปิดฉลากเป็นคาร์บอนแหล่งที่ความเข้มข้น 25 กรัม L−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปลูก Batch

สำหรับการประเมินผลของ malic สามารถในการผลิตกรดปลูกชุดในขวดสั่นและหมักได้ดำเนินการ.

ปลูกในถังหมักได้ดำเนินการใน 2.7 L Applikon bioreactors (Applikon, Schiedam, เนเธอร์แลนด์) กับ 2 ลิตรของปริมาณการทำงาน.

เครื่องปฏิกรณ์ พร้อมกับสองรัชตันหกใบใบพัดแผ่นดิสก์และอุณหภูมิที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 34 องศาเซลเซียส ค่าพีเอชได้รับการบัฟเฟอร์โดยแคลเซียมคาร์บอเนตในระยะกลาง อุณหภูมิปั่นป่วนแก๊ส pH และองค์ประกอบของการปิดก๊าซถูกตรวจสอบและ / หรือควบคุมการใช้การตรวจสอบ DasGip และระบบควบคุม (DasGip, Jülich, เยอรมัน).

ความเร็วในการกวนถูกกำหนดให้ 950 รอบต่อนาทีและมีอัตราการเติมอากาศเพื่อ 1 VVM (ปริมาณของก๊าซต่อปริมาณของน้ำหมักต่อนาที).

ความเข้มข้นของออกซิเจนและก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ในไอเสียถูกนำมาวิเคราะห์กับ DasGip fedbatch-Pro®วิเคราะห์ระบบก๊าซกับออกก๊าซวิเคราะห์ GA4 อยู่บนพื้นฐานของเซอร์โคเนียมไดออกไซด์และ สองลำแสงอินฟราเรดเซ็นเซอร์.

ในกรณีของการสั่นปลูกขวดสำหรับสมรรถนะของเอนไซม์และการสกัดอาร์เอ็นเอสายพันธุ์ถูกบ่มใน 100 กลางมล MAF4AS ใน 500 มิลลิลิตร Erlenmeyer flasks กับความปั่นป่วนที่ 250 รอบต่อนาทีในเครื่องปั่นโคจร.

ทดลอง Tracer สำหรับ 13C ที่ สายพันธุ์ที่ได้รับการปลูกฝังใน 250 มิลลิลิตรขวดที่มีการสั่นไหว 50 มล MAF4AS กับกลูโคส 1-13C ติดฉลากเป็นแหล่งคาร์บอนที่มีความเข้มข้นของ L-1 25 กรัม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพาะรุ่นสำหรับการประเมินความสามารถในการผลิตกรด malic , ชุดเพาะในขวดเขย่าและใช้การหมักแบบ พบว่าการเพาะในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพได้ใน 2.7-l applikon เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ( applikon Schiedam , เนเธอร์แลนด์ , ) 2 ชั้นของการทำงานปริมาตรเครื่องปฏิกรณ์เป็นอุปกรณ์ที่มีสอง Rushton 6 ใบดิสก์ใบพัด และอุณหภูมิไว้ที่ 34 องศา C pH กรด โดยแคลเซียมคาร์บอเนตในระดับปานกลาง อุณหภูมิการปั่น gassing pH และองค์ประกอบของปิดแก๊สได้ตรวจสอบและ / หรือควบคุมการใช้ dasgip ตรวจสอบและควบคุมระบบ ( dasgip ลิมบวร์ก , เยอรมนี )ความเร็วหมุนตั้ง 950 รอบต่อนาทีและอัตราการให้อากาศ 1 ( ปริมาตรต่อปริมาตรของแก๊ส น้ำหมักต่อนาที )ความเข้มข้นของก๊าซออกซิเจนและคาร์บอนไดออกไซด์ในไอเสียก๊าซวิเคราะห์ด้วย dasgip fedbatch Pro ®การวิเคราะห์ระบบแก๊สกับปิด ga4 เครื่องวิเคราะห์ก๊าซขึ้นอยู่กับเซอร์โคเนียมไดออกไซด์และสองแสงอินฟราเรดเซ็นเซอร์ในกรณีของการเขย่าขวดเพาะเพื่อใช้เอนไซม์และการสกัดอาร์เอ็นเอ สายพันธุ์ ถูกเลี้ยงใน maf4as ขนาดกลาง 100 มล. ในขวด 500 มิลลิลิตร เออร์เลนเมเยอร์ด้วยการกวน 250 รอบต่อนาทีใน shaker ที่โคจรสำหรับ 13C ติดตามการทดลอง สายพันธุ์ปลูกในขวดเขย่าขนาด 250 มิลลิลิตรที่ประกอบด้วย 50 ml maf4as กับ 1-13c-labelled กลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอนที่ความเข้มข้น 25 กรัม L − 1