2,4,6-Trinitrotoluene (TNT), the mo

2,4,6-Trinitrotoluene (TNT), the most widely used explosive, causes serious health and environment problems and is recalcitrant to degradation. Herein, we investigated the metabolic pathway of TNT catalyzed by purified nitroreductases NfsA and NfsB from Escherichia coli, and enhanced the transformation activity by structure-based mutagenesis. The two nitroreductases play similar roles in the transformation of TNT, which is converted initially to 4-hydroxylamino-2,6-dinitrotoluene and then 2,4-dihydroxylamino-6-nitrotoluene without production of any amine products. Of the mutants constructed, F123A and F124W mutants dramatically enhanced the catalytic activity towards TNT and its derivatives, suggesting that these two adjacent phenylalanines displayed different effects on the catalytic activity. Substitutions with Ala or Asn at Phe124 greatly impaired the reduction activity against TNT, while the mutation of Phe to Trp resulted in a substantially reduced apparent Km and improved activity, implying the importance of aromatic residues at position 124 for substrate binding. In contrast, Phe at position 123 caused adverse effects on the activity, may be due to the steric constraint limiting movement of Phe124.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2,4,6-trinitrotoluene (ภายหลัง), ระเบิดที่ใช้กันอย่างแพร่หลายมากที่สุด ทำให้เกิดปัญหาสุขภาพและสิ่งแวดล้อมอย่างจริงจัง และเป็น recalcitrant เพื่อย่อยสลาย นี้ เราสอบสวนเมแทบอลิซึมของกระบวน โดยบริสุทธิ์ nitroreductases NfsA และ NfsB จาก Escherichia coli ภายหลัง และปรับปรุงกิจกรรมการแปลง โดย mutagenesis ตามโครงสร้าง Nitroreductases สองเล่นบทบาทที่คล้ายคลึงกันในการเปลี่ยนแปลงของภายหลัง ซึ่งจะถูกแปลงเป็นครั้งแรก 4-hydroxylamino-2,6-dinitrotoluene แล้ว 2, 4-dihydroxylamino-6-nitrotoluene โดยไม่ผลิตสินค้าใด ๆ amine ของสายพันธุ์ที่สร้าง สายพันธุ์ F123A และ F124W อย่างมากเพิ่มกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยาต่อภายหลังและอนุพันธ์ แนะนำที่ phenylalanines ติดสองเหล่านี้แสดงลักษณะพิเศษต่าง ๆ ของกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยา ทดแทนกับอลา Asn ที่ Phe124 มากผู้พิการทางกิจกรรมลดการต่อต้านภายหลัง ในขณะที่การกลายพันธุ์ของเพ-Trp ผล Km ชัดเจนลดลงมากและปรับปรุงกิจกรรม หน้าที่ความสำคัญของหอมตกค้างที่ตำแหน่ง 124 สำหรับการรวมพื้นผิว ในทางตรงกันข้าม เพตำแหน่ง 123 ที่เกิดกระทบกิจกรรม อาจเกิดจากข้อจำกัด steric ที่จำกัดการเคลื่อนไหวของ Phe124

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2,4,6-trinitrotoluene (TNT) ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายระเบิดทำให้เกิดสุขภาพที่รุนแรงและปัญหาสภาพแวดล้อมและดื้อรั้นที่จะย่อยสลาย ในที่นี้เราตรวจสอบเส้นทางการเผาผลาญของทีเอ็นทีเร่งปฏิกิริยาด้วยบริสุทธิ์ nitroreductases NFSA และ NfsB จากอีโคและเพิ่มกิจกรรมการเปลี่ยนแปลงโดยฉับโครงสร้างตาม ทั้งสอง nitroreductases บทบาทที่คล้ายกันในการเปลี่ยนแปลงของทีเอ็นทีซึ่งจะถูกแปลงแรก 4 hydroxylamino-2,6-ไดไนโตรแล้ว 2,4-dihydroxylamino-6-nitrotoluene โดยไม่มีการผลิตของผลิตภัณฑ์ amine ใด ๆ การกลายพันธุ์สร้าง F123A กลายพันธุ์และการ F124W ที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในการเร่งปฏิกิริยาที่มีต่อทีเอ็นทีและอนุพันธ์บอกว่าทั้งสองที่อยู่ติดกัน phenylalanines แสดงผลกระทบที่แตกต่างกันในการเร่งปฏิกิริยา แทนด้วย Ala หรือ Asn Phe124 ที่มีความบกพร่องอย่างมากในการลดกิจกรรมกับทีเอ็นทีในขณะที่กลายพันธุ์ของเพ Trp จะส่งผลให้ลดลงอย่างมากเห็นได้ชัดกิโลเมตรและกิจกรรมที่ดีขึ้นหมายถึงความสำคัญของสารตกค้างหอมที่ตำแหน่ง 124 สำหรับพื้นผิวที่มีผลผูกพัน ในทางตรงกันข้ามเพที่ตำแหน่ง 123 ก่อให้เกิดผลกระทบกับกิจกรรมที่อาจจะเกิดจากข้อ จำกัด steric จำกัด การเคลื่อนไหวของ Phe124

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2,4,6-trinitrotoluene ( TNT ) ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายระเบิด ทำให้เกิดปัญหาสุขภาพและสิ่งแวดล้อมอย่างจริงจัง และหัวดื้อเพื่อการย่อยสลาย ในที่นี้ เราศึกษาวิถีเมตาโบลิซึมของทีเอ็นทีเร่งปฏิกิริยาด้วย nitroreductases nfsa 7 จาก Escherichia coli และบริสุทธิ์ และปรับปรุงเปลี่ยนแปลงโครงสร้างตามกิจกรรมโดยการ .สอง nitroreductases เล่นบทบาทที่คล้ายคลึงกันในการเปลี่ยนแปลงของทีเอ็นที ซึ่งแปลงเริ่มต้น 4-hydroxylamino-2,6-dinitrotoluene แล้ว 2,4-dihydroxylamino-6-nitrotoluene โดยไม่มีการผลิตผลิตภัณฑ์นใด ๆ ของสายพันธุ์กลายพันธุ์และสร้าง f123a f124w เป็นคุ้งเป็นแควเพิ่มฤทธิ์ต่อภายหลัง และอนุพันธ์แนะนำว่า สองคนนี้ติดกัน phenylalanines แสดงผลที่แตกต่างกันในกิจกรรมการเร่งปฏิกิริยา แทนกับ ala หรือขึ้นที่ phe124 อย่างมากที่มีการลดฤทธิ์ต่อการกลายพันธุ์ของทีเอ็นที ในขณะที่เพเพื่อ TRP มีผลในการลดลงอย่างมากเห็นได้ชัด km และปรับปรุงกิจกรรม หมายถึง ความหอมของตกค้างที่ตำแหน่ง 124 แผ่นเข้าเล่ม ในทางตรงกันข้ามเพที่ตำแหน่ง 123 ที่เกิดผลกระทบต่อกิจกรรม อาจจะเนื่องจากการ จำกัด การเคลื่อนไหวของ phe124 เอจำกัด .