After lysis of cells, it is importa

After lysis of cells, it is important to determine the total protein concentration of the sample. Accurate quantitation of the sample will allow you to load the proper amount of protein in each lane. This avoids overloading the lane but still allows adequate detection of the protein of interest. Proper quantitation is also critical when performing semi-quantitative or quantitative Westerns. For accurate determine of relative amounts of protein expression, the same amount of protein must be loaded into each lane.

There are several different methods for quantifying protein concentration in samples. Some (e.g. measurement of nitrogen content or radioactively labeling cells) do not rely upon absorptive properties of the protein sample. While these can be sensitive and accurate assays, the more commonly used assays rely on spectrophotometric determination of protein concentration and these will be the focus of this guide.


The different capabilities and limitations of several assays are discussed below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลัง lysis ของเซลล์ มันเป็นสิ่งสำคัญในการกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดของตัวอย่าง วิเคราะห์หาปริมาณตัวอย่างถูกต้องจะช่วยให้คุณสามารถโหลดจำนวนโปรตีนในแต่ละเลนเหมาะสม นี้หลีกเลี่ยงช่องทางมากเกินไป แต่ยัง ช่วยให้ตรวจพบโปรตีนน่าสนใจเพียงพอ การวิเคราะห์หาปริมาณเหมาะสมก็สำคัญเมื่อทำ Westerns กึ่งเชิงปริมาณ หรือเชิงปริมาณ สำหรับความถูกต้องกำหนดของจำนวนโปรตีนนิพจน์ ญาติต้องโหลดปริมาณโปรตีนที่เท่ากันในแต่ละเลนมีหลายวิธีที่แตกต่างกันสำหรับ quantifying ความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่าง บางอย่าง (เช่นวัดเนื้อหาไนโตรเจนหรือ radioactively ติดฉลากเซลล์) สามารถถือคุณสมบัติดูดซับของตัวอย่างโปรตีน ขณะนี้จะละเอียดอ่อน และแม่นยำ assays, assays ใช้บ่อยใช้ spectrophotometric กำหนดความเข้มข้นโปรตีน และเหล่านี้จะเป็นจุดเน้นของคู่มือนี้ความแตกต่างและข้อจำกัดของหลาย assays อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากที่สลายของเซลล์มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนรวมของกลุ่มตัวอย่าง ปริมาณที่ถูกต้องของตัวอย่างที่จะช่วยให้คุณสามารถโหลดปริมาณที่เหมาะสมของโปรตีนในแต่ละช่องทาง นี้หลีกเลี่ยงการบรรทุกเกินพิกัดเลน แต่ยังช่วยให้การตรวจสอบที่เพียงพอของโปรตีนที่น่าสนใจ ปริมาณที่เหมาะสมนอกจากนี้ยังเป็นสิ่งสำคัญเมื่อการปฏิบัติตะวันตกกึ่งเชิงปริมาณหรือเชิงปริมาณ สำหรับการตรวจสอบความถูกต้องของจำนวนเงินที่ญาติของการแสดงออกของโปรตีนในปริมาณที่เท่ากันของโปรตีนต้องโหลดลงในแต่ละช่องทาง. มีวิธีการที่แตกต่างกันสำหรับปริมาณความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างเป็น บางคน (เช่นการวัดปริมาณไนโตรเจนหรือเซลล์ติดฉลากกัมมันตภาพรังสี) ไม่ได้ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติการดูดซึมของตัวอย่างโปรตีน ในขณะที่เหล่านี้สามารถเป็นชุดตรวจที่มีความสำคัญและถูกต้อง, การตรวจใช้มากกว่าปกติพึ่งพาการกำหนดสเปกของความเข้มข้นของโปรตีนและสิ่งเหล่านี้จะมุ่งเน้นของคู่มือนี้. ความสามารถที่แตกต่างกันและข้อ จำกัด ของการตรวจหลายที่จะกล่าวถึงด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจากการสลายของเซลล์ มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะตรวจสอบรวมโปรตีนความเข้มข้นของตัวอย่าง เซลล์ที่ถูกต้องของตัวอย่างจะช่วยให้คุณสามารถ โหลด ปริมาณที่เหมาะสมของโปรตีนในแต่ละเลน นี้เพื่อหลีกเลี่ยงการบรรทุกเกินพิกัด เลน แต่ยังช่วยให้ตรวจจับการเพียงพอของโปรตีนที่น่าสนใจ เซลล์ที่เหมาะสมยังวิกฤต เมื่อแสดงกึ่งปริมาณ หรือ เชิงปริมาณคาวบอย .ที่ถูกต้องตรวจสอบปริมาณสัมพัทธ์ของการแสดงออกของโปรตีน , ปริมาณที่เท่ากันของโปรตีนต้องโหลดในแต่ละเลน

มีหลายวิธีที่แตกต่างกันที่ปริมาณความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่าง บางอย่าง ( เช่นการวัดปริมาณกัมมันตภาพรังสี หรือติดฉลากเซลล์ ) ไม่พึ่งพาคุณสมบัติการดูดซึมของโปรตีนในตัวอย่าง ในขณะที่เหล่านี้สามารถใช้ไวและถูกต้อง ,ที่ใช้บ่อยสามารถพึ่งพาการตัดสินใจ ) ของโปรตีนและเหล่านี้จะถูกโฟกัสของคู่มือนี้


ความสามารถที่แตกต่างกันและข้อจำกัดของหลายวิธีที่จะกล่าวด้านล่าง