Detector: 295 nmColumn: Develosil O

Detector: 295 nm
Column: Develosil ODS-HG-15/30 (cp5.0x500 mm; produced by Nomura

Chemical Co., Ltd.)



Seven-week-old male SD rats were habituated for one week and then classified

into a test food group (isolated โอลีโรเปอิน group) and a control group (each group consisting of 6 animals). Next, the isolated โอลีโรเปอิน was dissolved in distilled water (produced by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), and the สารละลาย was ถูกให้ทางปาก forcibly to the test food group at a dose of 200 mg/5 mL/kg once daily for 5 days. The control food group was orally fed forcibly with distilled water (produced by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a dose of 5 mL/kg once daily for 5 days. Four hours after the last treatment, liver sampling was done.
[0047] From the liver samples collected, total RNA was extracted according to a conventional method, and used to analyze the expression levels of the Bmall. and Per I clock genes by quantitative PCR (with Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System).


รูป 1 shows the expression level of the Bmall gene, and รูป 2 shows the expression level of the Per I gene. As compared to the control group, the isolated โอลีโรเปอิน group showed a significant decrease in Bmall expression and a significant

increase in Per 1 expression. As described in the foregoing, it has been found that the expression levels of Bmall and Per 1 are in แอนติเฟส ซึ่งกันและกัน in a normal รอบวัน rhythm. In this analysis, it was confirmed that the Bmall and Per 1 expressions in the isolated โอลีโรเปอิน group were varied in แอนติเฟส ซึ่งกันและกัน. More specifically, isolated โอลีโรเปอิน reduced Bmall expression while increasing Per 1 expression. That is to say, โอลีโรเปอิน was found to be capable of regulating the expressions of clock genes to their normal patterns, thereby helping to entrain shifted phases of the gene expressions to their normal patterns.
Example 2

[0048] Test Example 2: Regulatory effect of isolated 3,4-DHPEA-EA on clock gene expression levels
The regulatory effect of isolated 3,4-DHPEA-EA on clock gene expression levels was evaluated according to the procedure described below.


The isolated 3,4-DHPEA-EA used was obtained by following the step described below.
[0049] A p-glucosidase (produced by Sigma) was added to โอลีโรเปอิน (100 mg), and the

ของผสม was reacted in a buffer สารละลาย with a pH of 6.86 at 37°C for 15 hours. After completion of the reaction, the reaction ของผสม was concentrated under reduced pressure to obtain a coarse fraction of 3,4-DHPEA-EA. The resulting coarse fraction of 3,4-DHPEA• EA was subjected to preparative high-performance liquid chromatography to isolate 9.0 mg of 3,4-DHPEA-EA.
(Preparative HPLC conditions) Detector: 295 nm
Column: Develosil ODS-HG-15/30 (cp5.0x500 mm; produced by Nomura

Chemical Co., Ltd.)

Solvent: Aqueous 45% อะซีโตไนตริล สารละลาย

Column temperature: Room temperature


Flow rate: 30 mL/min

The nuclear magnetic resonance spectrum data of the obtained 3,4-DHPEA-EA

sample was shown below.

Cultured cells (human liver cancer-derived cell line HepG2) were seeded at 2.5 x

103 cells/cm2 in a T-75 flask (BD Falcon™), and medium replacement (RPMI1640, 10% FBS) was performed every three days. The cells reaching 80% confluence were passaged at a concentration of 4.2 x 104 cells/mL in a 6-well plate (BD Falcon™), and in order to entrain the phases of the รอบวัน rhythms of the cells, the medium was replaced with a
low-serum medium (RPMII 640, 2% FBS) after three days. Three days after the

replacement with a low-serum medium, the cells were subjected to testing. A สารละลาย of the test substance in DMSO (50 µg/µL) was prepared and added to the 6-well plate to give a final concentration of the test substance of 50 µg/mL. As a control, DMSO was added to the 6-well plate (to give a final concentration of 0.1%).
[0052] Eight hours after the addition of the test substance, the cells were harvested, and mRNA was extracted according to a conventional method. The extracted mRNA was used to analyze the expression levels of the Bmall and Per 1 clock genes by qPCR (with Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System).


รูป 3 shows the expression level of the Bmall gene, and รูป 4 shows the expression level of the Per 1 gene. As described in the foregoing, it has been found that
the expression levels of Bmall and Per 1 are in แอนติเฟส ซึ่งกันและกัน in a normal รอบวัน rhythm. In this analysis, it was confirmed that when 3,4-DHPEA-EA was added, the expression levels of Bmall and Per 1 were modulated in แอนติเฟส ซึ่งกันและกัน. More specifically, 3,4-DHPEA-EA reduced Bmall expression while increasing Per 1 expression.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจจับ: 295 nmคอลัมน์: Develosil ODS-HG-15/30 (cp5.0x500 มม. ผลิต โดยโนมูระสารเคมี Co., ltd)อายุ 7 สัปดาห์ชาย SD หนูเคยไปหนึ่งสัปดาห์ และจัดแล้วการทดสอบอาหารกลุ่มแยกโอลีโรเปอิน) และกลุ่มควบคุม (แต่ละกลุ่มที่ประกอบด้วยสัตว์ 6) ถัดไป โอลีโรเปอินแยกละลายในน้ำกลั่น (ผลิต โดย Otsuka เภสัชกรรม Co., Ltd.), และสารละลายก็ถูกให้ทางปากบังคับให้กับกลุ่มการทดสอบอาหารที่ปริมาณของ 200 mg/5 mL/kg วันละ 5 วันครั้ง กลุ่มอาหารควบคุมถูกรับประทานเลี้ยงบังคับให้ ด้วยน้ำกลั่น (ผลิต โดย Otsuka เภสัชกรรม Co., Ltd.) ที่ปริมาณ 5 มล./กก.วันละ 5 วันครั้ง สี่ชั่วโมงหลังจากการรักษาครั้งสุดท้าย การสุ่มตัวอย่างตับถูกทำ[0047] จากตัวอย่างตับรวบรวม RNA รวมแยกตามวิธีการทั่วไป และใช้ในการวิเคราะห์ระดับนิพจน์ของการ Bmall และต่อผมนาฬิกายีน โดย PCR เชิงปริมาณ (ด้วยศาสตร์เชิงชีวภาพใช้ 7900HT อย่างรวดเร็วเรียลไทม์ PCR ระบบ)รูป 1 แสดงระดับการแสดงออกของยีน Bmall และรูปที่ 2 แสดงระดับการนิพจน์ของการต่อผมยีน เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม โอลีโรเปอินแยกกลุ่มพบว่าลดลงอย่างมีนัยสำคัญในนิพจน์ Bmall และสำคัญ เพิ่มในนิพจน์ต่อ 1 ตามที่อธิบายไว้ในบัญญัติ จะได้รับพบว่า ระดับนิพจน์ของ Bmall และต่อ 1 ที่อยู่ในซึ่งกันและกันแอนติเฟสในจังหวะปกติรอบวัน ในการวิเคราะห์นี้ มันได้รับการยืนยันว่า นิพจน์ Bmall และต่อ 1 ในกลุ่มโอลีโรเปอินที่แยกได้แตกต่างกันในแอนติเฟสซึ่งกันและกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่ง โอลีโรเปอินแยกลดนิพจน์ Bmall ในขณะที่เพิ่มนิพจน์ต่อ 1 กล่าวคือ โอลีโรเปอินพบว่ามีความสามารถในการควบคุมการแสดงออกของยีนนาฬิกาเพื่อรูปแบบปกติของพวกเขา จึงช่วยนำพาการขั้นตอนที่ถูกเลื่อนของนิพจน์ยีนการรูปแบบปกติของพวกเขาตัวอย่างที่ 2ทดสอบ [0048] ตัวอย่างที่ 2: นาฬิกายีนนิพจน์ระดับกำกับดูแลผลของแยก 3, 4-DHPEA-เอผลบังคับของแยก 3, 4-DHPEA-เอระดับนาฬิกายีนนิพจน์ถูกประเมินตามขั้นตอนอธิบายไว้ด้านล่างแยก 3, 4-DHPEA-อีเอใช้มาโดยขั้นตอนที่อธิบายไว้ด้านล่าง[0049] A p-glucosidase (ผลิต โดย Sigma) เพิ่มโอลีโรเปอิน (100 mg), และของผสมเป็นปฏิกิริยาในสารละลายบัฟเฟอร์ด้วยกรด pH 6.86 ที่อุณหภูมิ 37° C 15 ชั่วโมง หลังปฏิกิริยา ของผสมปฏิกิริยามีความเข้มข้นภายใต้แรงดันลดลงรับส่วนหยาบของ 3, 4-DHPEA-เอ ส่วนหยาบผลของ EA 3, 4 DHPEA• ภายใต้การกราประสิทธิภาพสูงของเหลวฟีเพื่อแยก 3, 4-DHPEA-EA 9.0 มิลลิกรัม(เงื่อนไขของ HPLC กรา) การตรวจจับ: 295 nmคอลัมน์: Develosil ODS-HG-15/30 (cp5.0x500 มม. ผลิต โดยโนมูระสารเคมี Co., ltd)ตัวทำละลาย: ละลาย 45% อะซีโตไนตริลสารละลายคอลัมน์อุณหภูมิ: อุณหภูมิห้อง อัตราการไหล: 30 มล./นาทีข้อมูลคลื่นความถี่เรโซแนนซ์แม่เหล็กนิวเคลียร์เอได้รับ 3, 4-DHPEA-แสดงตัวอย่างด้านล่าง เพาะเลี้ยงเซลล์ (เซลล์ตับมะเร็งมามนุษย์เส้น HepG2) มีฟิตเนสที่ 2.5 x103 เซลล์/cm2 T-75 หนาว (™เหยี่ยว BD), และแทนกลาง (RPMI1640, 10% FBS) ทำทุกสามวัน เซลล์ถึงบรรจบ 80% ได้ passaged ที่ความเข้มข้นของ 4.2 x 104 เซลล์/มล.ในจานดี 6 (BD เหยี่ยว™), และเพื่อนำพาระยะของจังหวะรอบวันของเซลล์ การถูกแทนที่ด้วยการซีรั่มต่ำปานกลาง (RPMII 640, 2% FBS) หลังจากสามวัน สามวันหลังจากการ replacement with a low-serum medium, the cells were subjected to testing. A สารละลาย of the test substance in DMSO (50 µg/µL) was prepared and added to the 6-well plate to give a final concentration of the test substance of 50 µg/mL. As a control, DMSO was added to the 6-well plate (to give a final concentration of 0.1%).[0052] Eight hours after the addition of the test substance, the cells were harvested, and mRNA was extracted according to a conventional method. The extracted mRNA was used to analyze the expression levels of the Bmall and Per 1 clock genes by qPCR (with Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System).รูป 3 shows the expression level of the Bmall gene, and รูป 4 shows the expression level of the Per 1 gene. As described in the foregoing, it has been found thatthe expression levels of Bmall and Per 1 are in แอนติเฟส ซึ่งกันและกัน in a normal รอบวัน rhythm. In this analysis, it was confirmed that when 3,4-DHPEA-EA was added, the expression levels of Bmall and Per 1 were modulated in แอนติเฟส ซึ่งกันและกัน. More specifically, 3,4-DHPEA-EA reduced Bmall expression while increasing Per 1 expression.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตรวจวัด: 295 นาโนเมตร
คอลัมน์: Develosil ODS-HG-15/30 (cp5.0x500 มมผลิตโดยโนมูระChemical Co. , Ltd)





เจ็ดสัปดาห์อายุหนู SD เพศผู้เคยเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์และจำแนกเป็นกลุ่มอาหารที่ทดสอบ (Isolated โอลีโรเปอิน Group) และกลุ่มควบคุม (แต่ละกลุ่มประกอบด้วย 6 สัตว์) ถัดไปที่แยกโอลีโรเปอินถูกละลายในน้ำกลั่น (ผลิตโดย Otsuka Pharmaceutical Co. , Ltd. ) และสารละลายก็ถูกให้ทางปากกวาดต้อนไปยังกลุ่มอาหารนั้นการทดสอบในขนาด 200 มก. / 5 มล A / กก. วันละครั้งเป็นเวลา 5 วัน กลุ่มอาหารควบคุมเป็นอาหารรับประทานบังคับด้วยน้ำกลั่น (ผลิตโดยโอซูก้า จำกัด ) ขนาด 5 มล / กิโลกรัมวันละครั้งเป็นเวลา 5 วัน สี่ชั่วโมงหลังการรักษาที่ผ่านมาการสุ่มตัวอย่างตับได้ทำ. [0047] จากตัวอย่างที่เก็บรวบรวมตับ, RNA ทั้งหมดถูกสกัดตามวิธีปกติและใช้ในการวิเคราะห์ระดับการแสดงออกของ Bmall และต่อผมยีนนาฬิกาโดยปริมาณ PCR (กับ Applied Biosystems 7900HT ด่วน Real-time PCR System)





รูปที่ 1 แสดงระดับการแสดงออกของยีน Bmall และรูปที่ 2 แสดงระดับการแสดงออกของยีนต่อฉัน เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่แยกโอลีโรเปอินกลุ่มพบว่ามีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการแสดงออกของ Bmall และที่สำคัญเพิ่มขึ้นในการแสดงออกต่อ 1 ตามที่กล่าวไว้ในข้างต้นจะได้รับพบว่าระดับการแสดงออกของ Bmall และต่อ 1 อยู่ในแอนติเฟสซึ่งกันและกันในรอบวันปกติจังหวะ ในการวิเคราะห์นี้จะได้รับการยืนยันว่า Bmall และต่อ 1 นิพจน์ในแยกโอลีโรเปอินกลุ่มที่ได้รับแตกต่างกันในแอนติเฟสซึ่งกันและกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่งบางแห่งโอลีโรเปอินลดการแสดงออก Bmall ในขณะที่เพิ่มต่อ 1 การแสดงออก นั่นคือจะบอกว่าโอลีโรเปอินก็จะพบว่ามีความสามารถในการควบคุมการแสดงออกของยีนนาฬิการูปแบบปกติของพวกเขาจึงช่วยให้การรถไฟขั้นตอนการขยับตัวของการแสดงออกของยีนที่จะรูปแบบปกติของพวกเขา. ตัวอย่างที่ 2 [0048] ตัวอย่างทดสอบ 2 : ผลการกำกับดูแลของการแยก 3,4-DHPEA-EA บนนาฬิการะดับการแสดงออกของยีนผลการกำกับดูแลของการแยก 3,4-DHPEA-EA ตามระดับการแสดงออกของยีนนาฬิกาถูกประเมินตามขั้นตอนที่ระบุไว้ด้านล่าง








ที่แยก 3,4-DHPEA-EA ใช้ที่ได้รับโดยทำตามขั้นตอนที่อธิบายด้านล่าง.
[0049] P-glucosidase (ผลิตโดย Sigma) ถูกบันทึกอยู่ในโอลีโรเปอิน (100 มิลลิกรัม) และของผสมได้รับปฏิกิริยาตอบสนอง ในสารละลายบัฟเฟอร์ที่มีค่า pH 6.86 ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 ชั่วโมง หลังจากเสร็จสิ้นการเกิดปฏิกิริยาปฏิกิริยาของผสมเข้มข้นภายใต้ความกดดันที่ลดลงเพื่อให้ได้ส่วนหยาบของ 3,4-DHPEA-EA ส่วนที่หยาบที่เกิดจาก 3,4-DHPEA •อีเอได้ภายใต้การเตรียมที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography เพื่อแยก 9.0 มิลลิกรัม 3,4-DHPEA ก. (เงื่อนไข preparative HPLC) ตรวจวัด: 295 นาโนเมตรคอลัมน์: Develosil ODS-HG- 15/30 (cp5.0x500 มมผลิตโดยโนมูระChemical Co. , Ltd) เป็นตัวทำละลาย: น้ำ 45% อะซีโตไนตริลสารละลายอุณหภูมิคอลัมน์: ห้องอุณหภูมิอัตราการไหล: 30 มิลลิลิตร / นาทีแม่เหล็กนิวเคลียร์ข้อมูลเสียงสะท้อนของคลื่นความถี่ ที่ได้รับ 3,4-DHPEA-EA ตัวอย่างที่แสดงด้านล่าง


















เซลล์เพาะเลี้ยง (ตับมนุษย์โรคมะเร็งที่ได้มาจากเซลล์สาย HepG2) เมล็ด 2.5 x 103 เซลล์ / cm2 ใน T-75 ขวด (BD เหยี่ยว™) และการเปลี่ยนกลาง (RPMI1640 10% FBS) ได้ดำเนินการทุกสามวัน เซลล์ถึงจุดบรรจบ 80% ถูก passaged ที่ความเข้มข้น 4.2 x 104 เซลล์ / มิลลิลิตรในแผ่น 6 ดี (BD เหยี่ยว™) และเพื่อที่จะขึ้นรถไฟขั้นตอนของรอบวันจังหวะของเซลล์กลางถูกแทนที่ ที่มีขนาดกลางต่ำซีรั่ม (RPMII 640, 2% FBS) ในวันที่สาม สามวันหลังจากการทดแทนที่มีขนาดกลางต่ำเซรั่มเซลล์ถูกยัดเยียดให้ทดสอบ สารละลายของสารทดสอบใน DMSO (50 ไมโครกรัม / ไมโครลิตร) ถูกจัดทำขึ้นและเพิ่มไปยังแผ่น 6 อย่างดีเพื่อให้ได้ความเข้มข้นของสารทดสอบ 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร เป็นตัวควบคุม, DMSO ถูกบันทึกอยู่ในแผ่น 6 ดี (เพื่อให้ได้ความเข้มข้น 0.1%). [0052] แปดชั่วโมงหลังจากการเพิ่มขึ้นของสารทดสอบที่เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวและ mRNA ถูกสกัดตามธรรมดา วิธี. ที่สกัด mRNA ถูกใช้ในการวิเคราะห์ระดับการแสดงออกของ Bmall และต่อ 1 ยีนนาฬิกาโดย qPCR (กับ Applied Biosystems 7900HT ด่วน Real-time PCR System)








รูปที่ 3 แสดงระดับการแสดงออกของยีน Bmall และรูปที่ 4 แสดงระดับการแสดงออกของยีนต่อ 1 ตามที่กล่าวไว้ในข้างต้นจะได้รับพบว่า
ระดับการแสดงออกของ Bmall และต่อ 1 อยู่ในแอนติเฟสซึ่งกันและกันในรอบวันปกติจังหวะ ในการวิเคราะห์นี้จะได้รับการยืนยันว่าเมื่อ 3,4-DHPEA กได้รับการเพิ่มระดับการแสดงออกของ Bmall และต่อ 1 ถูก modulated ในแอนติเฟสซึ่งกันและกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่ง 3,4-DHPEA-EA ลดการแสดงออก Bmall ในขณะที่เพิ่มต่อ 1 การแสดงออก