We have previously reported the pre

We have previously reported the presence of an apyrase in Mimosa pudica. However, only limited information is available for this enzyme. Thus, in this study, the apyrase was purified to homogeneity. The purified enzyme had a molecular mass of around 67 kD and was able to hydrolyze both nucleotide triphosphate and nucleotide diphosphate as substrates. The ratio of ATP to ADP hydrolysis velocity of the purified protein was 0.01 in the presence of calcium ion, showing extremely high substrate specificity toward ADP. Thus, we designated this novel apyrase as MP67. A cDNA clone of MP67 was obtained using primers designed from the amino acid sequence of trypsin-digested fragments of the protein. In addition, rapid amplification of cDNA ends-polymerase chain reaction was performed to clone a conventional apyrase (MpAPY2). Comparison of the deduced amino acid sequences showed that MP67 is similar to ecto-apyrases; however, it was distinct from conventional apyrase based on phylogenetic classification. MP67 and MpAPY2 were expressed in Escherichia coli, and the recombinant proteins were purified. The recombinant MP67 showed high substrate specificity toward ADP rather than ATP. A polyclonal antibody raised against the recombinant MP67 was used to examine the tissue distribution and localization of native MP67 in the plant. The results showed that MP67 was ubiquitously distributed in various tissues, most abundantly in leaves, and was localized to plasma membranes. Thus, MP67 is a novel ecto-apyrase with extremely high substrate specificity for ADP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นอกจากนี้เราก่อนหน้านี้มีรายงานของการ apyrase ในไมยราบ อย่างไรก็ตาม ข้อมูลที่จำกัดเฉพาะมีเอนไซม์นี้ ดังนั้น ในการศึกษานี้ apyrase มีบริสุทธิ์เพื่อ homogeneity เอนไซม์บริสุทธิ์มีมวลโมเลกุลของประมาณ 67 kD และสามารถ hydrolyze โนซีนไตรฟอสเฟตของนิวคลีโอไทด์และนิวคลีโอไทด์ diphosphate เป็นพื้นผิว อัตราส่วนของ ATP ที่ความเร็วไฮโตรไลซ์ ADP โปรตีนบริสุทธิ์ได้ 0.01 ในต่อหน้าของแคลเซียมไอออน แสดง specificity พื้นผิวสูงมากไปยัง ADP ดังนั้น เรากำหนด apyrase นี้นวนิยายเป็น MP67 โคลน cDNA ของ MP67 กล่าวโดยใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบจากลำดับกรดอะมิโนของทริปซินย่อยชิ้นส่วนของโปรตีน นอกจากนี้ ขยายอย่างรวดเร็วของปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสปลาย cDNA ที่ดำเนินการโคลน apyrase ปกติ (MpAPY2) เปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโน deduced พบว่า MP67 คล้ายกับ ecto-apyrases อย่างไรก็ตาม มันก็แตกต่างจากทั่วไป apyrase ตามการจัดประเภท phylogenetic MP67 และ MpAPY2 ได้แสดงใน Escherichia coli และ recombinant โปรตีนที่บริสุทธิ์ Recombinant MP67 พบ specificity สูงพื้นผิวไปยัง ADP มากกว่า ATP แอนติบอดี polyclonal ที่ขึ้นกับ recombinant MP67 ถูกใช้เพื่อตรวจสอบการกระจายของเนื้อเยื่อและแปลของ MP67 เป็นในโรงงาน ผลพบว่า MP67 ถูก ubiquitously กระจายอยู่ในเนื้อเยื่อต่าง ๆ ในใบ อุดมสมบูรณ์มากที่สุด และเป็นภาษาท้องถิ่นไปเยื่อหุ้มพลาสมา ดังนั้น MP67 เป็น ecto-apyrase นวนิยายที่ มี specificity สูงพื้นผิวสำหรับ ADP

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้มีการรายงานก่อนหน้านี้การปรากฏตัวของ apyrase ในไมยราบ อย่างไรก็ตามข้อมูลที่ จำกัด เพียงสามารถใช้ได้สำหรับเอนไซม์นี้ ดังนั้นในการศึกษาครั้งนี้ apyrase บริสุทธิ์จะเป็นเนื้อเดียวกัน เอนไซม์มีมวลโมเลกุลประมาณ 67 kD และก็สามารถที่จะย่อยสลายทั้ง triphosphate เบื่อหน่ายและเพทเบื่อหน่ายเป็นพื้นผิว อัตราส่วนของเอทีพีความเร็วไฮโดรไลซิ ADP ของโปรตีนบริสุทธิ์เป็น 0.01 ในการปรากฏตัวของแคลเ​​ซียมไอออนแสดงความจำเพาะพื้นผิวสูงมากต่อการ ADP ดังนั้นเราจึงกำหนด apyrase นิยายเรื่องนี้เป็น MP67 โคลน cDNA ของ MP67 ที่ได้รับการออกแบบโดยใช้ไพรเมอร์จากลำดับกรดอะมิโนของชิ้นส่วน trypsin ย่อยของโปรตีน นอกจากนี้ยังมีการขยายตัวอย่างรวดเร็วของ cDNA สิ้นสุด-polymerase ปฏิกิริยาลูกโซ่ได้ดำเนินการในการโคลน apyrase ธรรมดา (MpAPY2) เปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนที่อนุมานได้แสดงให้เห็นว่า MP67 คล้ายกับ ecto-apyrases; แต่มันก็แตกต่างจาก apyrase ธรรมดาขึ้นอยู่กับการจำแนกสายวิวัฒนาการ MP67 และ MpAPY2 ถูกแสดงใน Escherichia coli และโปรตีนที่ถูกทำให้บริสุทธิ์ MP67 recombinant แสดงให้เห็นพื้นผิวจำเพาะสูงต่อการ ADP มากกว่าเอทีพี แอนติบอดีต่อต้าน MP67 recombinant ถูกใช้ในการตรวจสอบการกระจายเนื้อเยื่อและการแปลของ MP67 พื้นเมืองในโรงงาน ผลการศึกษาพบว่า MP67 ถูกแจกจ่าย ubiquitously ในเนื้อเยื่อต่าง ๆ ส่วนใหญ่มากในใบและได้รับการแปลเป็​​นภาษาท้องถิ่นที่แผ่นเยื่อพลาสม่า ดังนั้น MP67 เป็นนวนิยาย ecto-apyrase พื้นผิวมีความจำเพาะสูงมากสำหรับ ADP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราเคยมีรายงานการปรากฏตัวของ apyrase ในไมยราบ . อย่างไรก็ตาม , เพียง จำกัด ข้อมูลสามารถใช้ได้สำหรับเอนไซม์นี้ ดังนั้นในการศึกษานี้ apyrase บริสุทธิ์วิธีการ . เอนไซม์มีมวลโมเลกุลประมาณ 67 ชนิด และสามารถย่อยสลายได้ทั้งเบสและเป็นยีนไดฟอสเฟต ไตรฟอสเฟตทอัตราส่วนของเอนไซม์ ATP ADP ความเร็วของโปรตีนคือ 0.01 ในการแสดงตนของแคลเซียมไอออนแสดงความจำเพาะต่อสาร ADP สูงมาก . ดังนั้น เรากำหนด apyrase ใหม่นี้เป็น mp67 . สายพันธุ์ของ mp67 โคลนได้ใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาจากลำดับกรดอะมิโนของเอนไซม์ย่อยสลายเศษโปรตีน นอกจากนี้การเพิ่มอย่างรวดเร็วของ cDNA Ends ปฏิกิริยาลูกโซ่ได้โคลน apyrase ธรรมดา ( mpapy2 ) การเปรียบเทียบกรดอะมิโน พบว่า mp67 คล้ายกับ ecto apyrases ; อย่างไรก็ตาม , มันแตกต่างจาก apyrase ปกติตามประเภทต่างๆ . mp67 mpapy2 และแสดงออกในแบคทีเรีย Escherichia coli และโปรตีนรีคอมบิแนนท์เป็นบริสุทธิ์การ mp67 recombinant พบความจำเพาะต่อแผ่นสูงมากกว่า ATP ADP . เป็นแอนติบอดีที่ใช้เลี้ยงกับ mp67 โปรตีนที่ถูกใช้ในการตรวจสอบการกระจายและการ mp67 พื้นเมืองในพืช ผลการศึกษาพบว่า mp67 อยู่ระหว่างกระจายในเนื้อเยื่อต่าง ๆ มากที่สุด มากในใบ และถูกแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในพลาสมาเมมเบรน . ดังนั้นmp67 เป็น apyrase ecto นวนิยายที่มีความจำเพาะสูงมากสำหรับพื้นผิว ADP .