We found that RNA purification meth

We found that RNA purification method needed to be improved in ordrer to perform RT-PCR successfully .
We improved following things;
1. Total leaf volume was increased.
2. Samples ware freezed with liquid nitrogen and suspended in ISOGEN more rapidly.
3. We centrifuged samples and collected supernatant twice after adding ISOGEN.
After the improvement, 260nm peak became higher and the degradation is minimized(Fig.4-4A.)
Then we used better quality of RNA for reverse transcription and retried RT-PCR. Fig.4-4C shows the result of this RT-PCR.

After we purified RT-PCR via the new method, we performed RT-PCR again for SEP3 and FUL. The result is shown in fig. We were able to get sufficiently purified RNA, and amplify each gene.
To confirm the exact differnece between experimental group(FT+) and negative control(FT-), we conducted qPCR and compared the relative RNA expression of each gene. However, there was not significant difference between experimental group and negative control.

Checking FT protein purification by Western Blotting
We could not confirm FT function though enough quality of RNA was extracted. Therefore, we questioned about FT protein quality, and performed western blotting to confirm FT protein is successfully purified.
Unfortunately, the band of FT was not detected. Because of the time shortage, we could not conduct further experiment. We have to reconsider about FT purification and now we are trying

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราพบว่า RNA วิธีการฟอกต้องถูกปรับปรุงใน ordrer การทำ RT-PCR เสร็จเรียบร้อยแล้วเราปรับปรุงต่อไปนี้1. รวมปริมาณเพิ่มขึ้น2. ตัวอย่างเครื่อง freezed ด้วยไนโตรเจนเหลว และถูกระงับใน ISOGEN ขึ้นอย่างรวดเร็ว3. เราจากตัวอย่าง และรวบรวม supernatant สองครั้งหลังเพิ่ม ISOGENหลังจากปรับปรุง 260nm peak กลายเป็นสูง และเสื่อมสภาพเป็น minimized(Fig.4-4A.) แล้วเราใช้คุณภาพดีกว่าของอาร์เอ็นเอถอดรหัสย้อนกลับ และลอง RT-PCR Fig.4 - 4C แสดงผลลัพธ์ของ RT-PCR นี้หลังจากที่เราบริสุทธิ์ RT-PCR ผ่านวิธีการใหม่ เราดำเนินการ RT-PCR อีกครั้งสำหรับ SEP3 และดื่ม ผลลัพธ์จะแสดงในรูป เราได้รับอย่างพอเพียงบริสุทธิ์ RNA และขยายยีนแต่ละเพื่อยืนยันการใช้ที่แน่นอนระหว่างทดลอง group(FT+) และลบ control(FT-) เราดำเนินการ qPCR และเปรียบเทียบนิพจน์ RNA สัมพัทธ์ของแต่ละยีน อย่างไรก็ตาม ไม่มีความแตกต่างที่สำคัญระหว่างกลุ่มทดลองและควบคุมค่าลบฟุตทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ โดยเวสเทิร์น blotting วิธีการตรวจสอบนอกจากนี้เราไม่สามารถยืนยันฟังก์ชันฟุตแม้ว่าคุณภาพพอของ RNA ถูกแยก ดังนั้น เราถามเกี่ยวกับฟุตคุณภาพโปรตีน และดำเนินการ blotting วิธีตะวันตกเพื่อยืนยันเรียบร้อยบริสุทธิ์โปรตีนฟุตอับ วงดนตรีของฟุตไม่พบ เนื่องจากขาดแคลนเวลา เราไม่สามารถทำการทดลองเพิ่มเติม เราต้องพิจารณาเกี่ยวกับฟอกฟุต และตอนนี้ เรากำลังพยายาม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. เราพบวิธี RNA บริสุทธิ์ที่จำเป็นต้องได้รับการปรับปรุงในการดำเนินการ ordrer RT-PCR ประสบความสำเร็จ
เราปรับปรุงสิ่งต่อไปนี้;
1 ปริมาณใบรวมเพิ่มขึ้น.
2 ตัวอย่างพัสดุแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลวและระงับใน ISOGEN มากขึ้นอย่างรวดเร็ว.
3 เราหมุนเหวี่ยงตัวอย่างและเก็บรวบรวมใสครั้งที่สองหลังจากการเพิ่ม ISOGEN.
หลังจากการปรับปรุง, 260nm สูงสุดกลายเป็นที่สูงขึ้นและการย่อยสลายจะลดลง (Fig.4-4A.)
จากนั้นเราใช้ที่มีคุณภาพที่ดีขึ้นของ RNA สำหรับการถอดความย้อนกลับและลอง RT-PCR Fig.4-4C แสดงให้เห็นถึงผลจากการนี้ RT-PCR ได้.

หลังจากที่เราบริสุทธิ์ RT-PCR ผ่านวิธีการใหม่ที่เราดำเนินการ RT-PCR อีกครั้งสำหรับ SEP3 และ FUL ผลที่ได้คือที่แสดงในรูป เราก็สามารถที่จะได้รับอาร์เอ็นเอบริสุทธิ์เพียงพอและขยายยีนแต่ละ.
หากต้องการยืนยัน differnece ที่แน่นอนระหว่างกลุ่มทดลอง (FT +) และการควบคุมลบ (FT-) เราดำเนินการ qPCR และเมื่อเทียบกับการแสดงออก RNA ญาติของแต่ละยีน แต่มีไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มทดลองและการควบคุมเชิงลบ.

ตรวจสอบ FT ทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ด้วย Western blotting
เราไม่สามารถยืนยันการทำงานของ FT แม้ว่าคุณภาพเพียงพอของ RNA ถูกสกัด ดังนั้นเราจึงถามเกี่ยวกับคุณภาพโปรตีน FT, และดำเนินการซับตะวันตกเพื่อยืนยันโปรตีน FT บริสุทธิ์ประสบความสำเร็จ.
แต่น่าเสียดายที่วง FT ไม่ได้ถูกตรวจพบ เพราะขาดแคลนเวลาที่เราไม่สามารถดำเนินการทดลองต่อไป เราต้องพิจารณาเกี่ยวกับ FT บริสุทธิ์และตอนนี้เรากำลังพยายาม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราพบว่าวิธีนี้ทำให้ต้องมีการปรับปรุงใน ordrer เพื่อดำเนินการต่อเรียบร้อยแล้วเราได้ปรับปรุงสิ่งต่อไปนี้ ;1 . รวมปริมาณใบเพิ่มขึ้น2 . ตัวอย่างเครื่อง freezed ด้วยไนโตรเจนเหลว และพักงานใน isogen อย่างรวดเร็วมากขึ้น3 . เราเก็บรวบรวมตัวอย่างระดับและนำสองครั้งหลังจากการเพิ่ม isogen .หลังจากการปรับปรุง 260nm สูงสุดกลายเป็นที่สูงขึ้นและการลด ( fig.4-4a )แล้วเราใช้คุณภาพของอาร์เอ็นเอ ที่ดีสำหรับการถอดความและ retried ย้อนกลับนี้ fig.4-4c แสดงผลของวิธีนี้หลังจากที่เราแยกนี้ผ่านวิธีการใหม่ ที่เราแสดงต่ออีกครั้ง และ sep3 ful . ผลจะแสดงในรูปที่เราสามารถที่จะได้รับเพียงพอโปรตีน RNA และการขยายแต่ละยีนเพื่อยืนยัน differnece แน่นอนระหว่างกลุ่มทดลอง ( FT + ลบ ) และการควบคุม ( ฟุต - ) เราดำเนินการ qpcr เปรียบเทียบกับญาติซึ่งการแสดงออกของแต่ละยีน อย่างไรก็ตาม ไม่มีความแตกต่างกันระหว่างกลุ่มทดลอง และกลุ่มควบคุมลบตรวจสอบผลิตโปรตีนฟุตโดย Western blottingเราไม่สามารถยืนยันได้ถึงคุณภาพของฟังก์ชันฟุตพอ RNA ถูกสกัด ดังนั้นเราจึงถามเกี่ยวกับคุณภาพของโปรตีน ft และดำเนินการ Western blotting เพื่อยืนยันความบริสุทธิ์ของโปรตีน ft .แต่น่าเสียดายที่วงดนตรีของ FT ก็ไม่พบ เพราะเวลาที่ขาดแคลน เราไม่สามารถทำการทดลองต่อไป เราต้องพิจารณาเรื่องบำบัดน้ำเสีย และตอนนี้เรากำลังพยายามและ