Following the 14-day dehydration pe

Following the 14-day dehydration period, each animal was
euthanized and the posterior sublingual salt gland was excised and
cut in half lengthwise. Half of each gland was snap frozen in liquid
nitrogen, transported back to the University of Florida, and stored at
−80 °C for Western blot analysis. The other half of each gland was
fixed in Bouin's solution (71% saturated picric acid, 24% formaldehyde
(37%), 5% glacial acetic acid) for 24 h at room temperature (RT, 27 °C).
Following fixation, tissues were washed in three rinses of 10 mM
phosphate buffered saline (PBS) and stored in 75% ethanol for
transport back to the University of Florida. In preparation for histology
and immunohistochemistry, fixed salt glands were dehydrated
through a series of ethanol washes of increasing concentration (75
to 100%). Following dehydration, tissues were cleared in Citrisolv
(Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA), embedded in paraffin wax
(Tissue Prep 2, Fisher Scientific), and sectioned at 7 μm perpendicular
to the long axis of the gland. Sections were mounted on charged glass
microscope slides (Superfrost Plus, Fisher Scientific) and dried for 24 h
at 30 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากที่ระยะเวลาการคายน้ำ 14 วันสัตว์แต่ละ
euthanized
และหลังต่อมเกลือลิ้นถูกตัดและตัดในครึ่งตามยาว
ครึ่งหนึ่งของต่อมสแน็ปแต่ละคนถูกแช่แข็งในของเหลวไนโตรเจนส่งกลับไปยังมหาวิทยาลัยฟลอริด้าและเก็บไว้ที่
-80 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ดวงตะวัน อีกครึ่งหนึ่งของต่อมแต่ละคนถูกแก้ไขในการแก้ปัญหา Bouin ของ (71% กรด picric อิ่มตัวไฮด์ 24% (37%), 5% น้ำแข็งกรดอะซิติก) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (RT, 27 ° C). ต่อไปนี้การตรึงเนื้อเยื่อ ถูกล้างในสาม rinses 10 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ(พีบีเอส) และเก็บไว้ในเอทานอล 75% สำหรับการขนส่งกลับไปที่มหาวิทยาลัยฟลอริดา ในการเตรียมการสำหรับเนื้อเยื่อและ immunohistochemistry ต่อมเกลือคงได้รับการอบแห้งผ่านชุดของการล้างเอทานอลความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้น(75 ถึง 100%) ต่อไปนี้การคายน้ำเนื้อเยื่อถูกเก็บใน Citrisolv (ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์, พิตส์เบิร์ก, PA, สหรัฐอเมริกา) ที่ฝังอยู่ในขี้ผึ้งพาราฟิน(เนื้อเยื่อเตรียมที่ 2, ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์) และแบ่งที่ 7 ไมครอนตั้งฉากกับแกนยาวของต่อม ส่วนที่ถูกติดตั้งบนกระจกเรียกเก็บภาพนิ่งกล้องจุลทรรศน์ (Superfrost พลัสฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์) และแห้งเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ30 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต่อไปนี้การ ระยะเวลา 14 วัน แต่ละสัตว์ก็
euthanized และด้านหลังต่อมเกลือใต้ลิ้นถูกตัดและ
ตัดในครึ่งตามยาว ครึ่งหนึ่งของแต่ละต่อมเป็น snap แช่แข็งในไนโตรเจนเหลว
, เดินทางกลับมหาวิทยาลัยฟลอริดา และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 80 องศา C
−การวิเคราะห์ Western blot . อีกครึ่งหนึ่งของแต่ละต่อมมี
ซ่อม Bouin สารละลายอิ่มตัวกรดพิคริก ( 71% ,24 % ฟอร์มาลดีไฮด์
( 37% ) , 5% กรดแอซีติก ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ( RT , 27 ° C )
ต่อไปนี้การตรึง เนื้อเยื่อถูกซักสาม rinses ฟอสเฟต เกลือ 10 mm
2 ( PBS ) และเก็บไว้ใน 75 % เอทานอลสำหรับ
การขนส่งกลับไปมหาวิทยาลัยฟลอริดา . ในการเตรียมการและเนื้อเยื่อ
หลอดคงที่เป็นเกลือแห้ง
ต่อมผ่านชุดของเอทานอลล้างเพิ่มความเข้มข้น ( 75
100% ) ตามร่างกาย เนื้อเยื่อถูกล้างใน citrisolv
( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Pittsburgh , PA , USA ) , ฝังในพาราฟิน
( เนื้อเยื่อเตรียม 2 , ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) และตัดที่ 7 μ M ตั้งฉาก
กับแกนยาวของต่อม ส่วนที่ติดบนกระจกสไลด์กล้องจุลทรรศน์ค่าบริการ
( superfrost บวกฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) และแห้งเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่
ที่ 30 องศา