Protocols for the extraction and ch

Protocols for the extraction and chromatographic HPLC separation were developed and adapted to each vegetable matrix according to the extraction methods and chromatographic columns employed in previous studies published in literature (Edelenbos et al., 2001, Emenhiser et al., 1995, Puspitasari-Nienaber et al., 2002 and Sander et al., 2000). A C30 reversed phase column and photodiode array (DAD) and fluorescence (FLU) detectors were used. By means of these procedures it was possible to identify: lutein, β-cryptoxanthin, α-carotene, β-carotene, 13-cis-β-carotene, lycopene, chlorophyll a, chlorophyll b, chlorophyll a′, chlorophyll b′, pheophytin a and pheophytin b.

Carotenoids and chlorophylls were extracted with acetone. Approximately 1 g for spinach, carrot, tomato and red pepper and 1.5 g for broccoli and green pepper were extracted in 20 ml of acetone by grinding in an ultraturrax (Polytron system PT 10-35 GT). Pyrogallol was added to avoid oxidation. The obtained extract was vortex mixed and filtered through a syringe filter (Olimpeak PTFE 0.22 μm) before injection into the HPLC column. During the extraction procedure, light exposure was avoided to prevent carotenoid degradation. Analysis of each sample was performed in triplicate.

The HPLC equipment consisted of an Agilent 1200 Series coupled to a diode array detector DAD and a fluorescence detector (Agilent Technologies, Waldbronn, Germany). Carotenoids and chlorophylls were separated on a YMC C30 polymeric column (3 μm particle size, 4.6 mm × 150 mm) (YMC, Wilmington, NC, USA), coupled to a corresponding C30 guard cartridge and equilibrated at appropriate temperature (30 °C for carrot, tomato and green vegetables extracts and 20 °C for red pepper extracts). The mobile phase was composed of methanol, MTBE, and milli-Q water. The DAD detector was operated from 200 nm to 700 nm. Carotenoids and chlorophylls were detected at 450 nm. Fluorescence detector was operated at 440 nm (excitation) and 660 nm (emission) for chlorophylls identification. Four different chromatographic methods were performed depending on the matrix to minimize analysis time (Table 1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพรโทคอลการสกัดและแยก HPLC chromatographic ถูกพัฒนา และดัดแปลงกับเมทริกซ์แต่ละผักตามวิธีสกัดและคอลัมน์ chromatographic จ้างในการเผยแพร่ในเอกสารประกอบการศึกษาก่อนหน้า (Edelenbos และ al., 2001, Emenhiser และ al., 1995, Puspitasari Nienaber และ al., 2002 และแซนเดอร์และ al., 2000) C30 ย้อนกลับขั้นตอนแถวคอลัมน์และ photodiode (DAD) และใช้เครื่องตรวจจับ fluorescence (ไข้หวัด) โดยขั้นตอนเหล่านี้ ก็สามารถระบุ: ลูทีน β-cryptoxanthin แคโรที นด้วยกองทัพ β-แคโรทีน 13-cis-β-แคโรทีน lycopene คลอโรฟิลล์เอ คลอโรฟิลล์บี a′ คลอโรฟิลล์ คลอโรฟิลล์ b′, pheophytin เป็น pheophytin b และCarotenoids และ chlorophylls ถูกสกัด ด้วยอะซิโตน ประมาณ 1 g สำหรับผักโขม แครอท มะเขือเทศ และพริกแดงและ 1.5 g บรอกโคลีและพริกเขียวถูกสกัดในปริมาณ 20 ml ของอะซีโตน โดยบดในการ ultraturrax (ฝากระจกโค้งระบบ GT PT 10-35) มีเพิ่ม pyrogallol เพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดออกซิเดชัน สารสกัดได้รับมี vortex ผสม และกรองผ่านตัวกรองเข็ม (PTFE Olimpeak $ 0.22 μm) ก่อนที่จะฉีดลงในคอลัมน์ HPLC ในระหว่างขั้นตอนการสกัด แสงไฟถูกหลีกเลี่ยงเพื่อป้องกันการย่อยสลาย carotenoid การวิเคราะห์ตัวอย่างแต่ละที่ดำเนินการใน triplicateอุปกรณ์ HPLC ประกอบด้วยชุด Agilent 1200 ควบคู่กับไดโอดอาร์เรย์จับพ่อและจับ fluorescence (Agilent เทคโนโลยี Waldbronn เยอรมนี) Carotenoids และ chlorophylls ถูกแยกจากกันใน YMC C30 ชนิดคอลัมน์ (3 ขนาดอนุภาค μm, 4.6 มม. × 150 มม.) ควบคู่กับตลับหมึกยาม C30 ที่สอดคล้องกัน (YMC วิลมิ NC, USA), และ equilibrated ที่อุณหภูมิที่เหมาะสม (30 ° C สารสกัดจากผักแครอท มะเขือเทศ และสีเขียว และ 20 ° C สำหรับสารสกัดจากพริกแดง) เฟสเคลื่อนประกอบด้วยเมทานอล MTBE และน้ำ Q จับพ่อถูกดำเนินการจาก 200 nm ถึง 700 nm Carotenoids และ chlorophylls พบที่ 450 nm Fluorescence จับถูกดำเนินการที่ 440 nm (ในการกระตุ้น) และ 660 nm (มลพิษ) สำหรับรหัส chlorophylls วิธี chromatographic สี่ได้ดำเนินตามเมตริกซ์เพื่อลดเวลาในการวิเคราะห์ (ตาราง 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอลสำหรับการสกัดและโครมาแยก HPLC ได้รับการพัฒนาและปรับให้เข้ากับเมทริกซ์ผักแต่ละตามวิธีการสกัดและคอลัมน์โครมาใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ตีพิมพ์ในวรรณคดี (Edelenbos et al., 2001 Emenhiser et al., 1995 Puspitasari-Nienaber et al., 2002 และซานเดอร์ et al., 2000) C30 กลับคอลัมน์เฟสและอาเรย์โฟโตไดโอด (DAD) และการเรืองแสง (ไข้หวัดใหญ่) เครื่องตรวจจับถูกนำมาใช้ โดยวิธีการขั้นตอนเหล่านี้มันเป็นไปได้ที่จะระบุ: ลูทีน, β-cryptoxanthin, αแคโรทีนβแคโรทีน 13 ถูกต้อง-βแคโรทีนไลโคปีนซึ่งเป็นคลอโรฟิล, คลอโรฟิล B, คลอโรฟิล, คลอโรฟิล b ', pheophytin และ pheophytin ข. Carotenoids และ chlorophylls ถูกสกัดด้วยอะซิโตน ประมาณ 1 กรัมสำหรับผักโขมแครอทมะเขือเทศและพริกแดงและ 1.5 กรัมผักชนิดหนึ่งและพริกเขียวสกัด 20 มล. ของอะซิโตนโดยการบดใน ultraturrax (Polytron ระบบ PT 10-35 GT) pyrogallol ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดออกซิเดชัน สารสกัดที่ได้รับเป็นน้ำวนผสมและกรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยา (Olimpeak PTFE 0.22 ไมครอน) ก่อนที่จะฉีดลงในคอลัมน์ HPLC ได้ ในระหว่างขั้นตอนการสกัดการเปิดรับแสงหลีกเลี่ยงเพื่อป้องกันไม่ให้การย่อยสลาย carotenoid การวิเคราะห์ของแต่ละตัวอย่างที่ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า. อุปกรณ์ HPLC ประกอบไปด้วย Agilent 1200 ซีรีส์คู่กับอาร์เรย์ไดโอดเครื่องตรวจจับ DAD และเครื่องตรวจจับเรืองแสง (Agilent Technologies, Waldbronn, เยอรมนี) carotenoids และ chlorophylls ถูกแยกบน YMC C30 คอลัมน์พอลิเมอ (3 ไมครอนขนาดอนุภาค 4.6 มิลลิเมตร× 150 มิลลิเมตร) (YMC, Wilmington, NC, USA) คู่กับตลับหมึกยาม C30 ที่สอดคล้องกันและ equilibrated ที่อุณหภูมิที่เหมาะสม (30 องศาเซลเซียส แครอทมะเขือเทศและสารสกัดจากผักสีเขียวและ 20 ° C เป็นสารสกัดจากพริกแดง) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเมทานอล MTBE และน้ำพัน-Q เครื่องตรวจจับ DAD ได้รับการดำเนินการจาก 200 นาโนเมตรถึง 700 นาโนเมตร carotenoids และ chlorophylls ตรวจพบที่ 450 นาโนเมตร เครื่องตรวจจับการเรืองแสงได้รับการดำเนินการใน 440 นาโนเมตร (กระตุ้น) และ 660 นาโนเมตร (ปล่อยก๊าซเรือนกระจก) สำหรับการระบุ chlorophylls สี่วิธีโครมาดำเนินการที่แตกต่างกันขึ้นอยู่กับเมทริกซ์เพื่อลดเวลาในการวิเคราะห์ (ตารางที่ 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรโตคอลสำหรับการสกัดและการแยกและ HPLC ได้มีการพัฒนาและดัดแปลงให้พืชแต่ละเมทริกซ์ตามสกัดและวิธีโครมาโตกราฟีคอลัมน์ที่ใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ตีพิมพ์ในวรรณคดี ( edelenbos et al . , 2001 , emenhiser et al . , 1995 , puspitasari nienaber et al . , 2002 และขัด et al . , 2000 )เป็นคอลัมน์จึงกลับเฟส และโฟโตไดโอดเรย์ ( พ่อ ) และการเรืองแสง ( ไข้หวัด ) ตรวจจับแบบ ด้วยวิธีการเหล่านี้ วิธีการ มันเป็นไปได้ที่จะระบุ : lutein , บีตา - แซนทินแอลฟาแคโรทีน , บีตา - แคโรทีน 13 - บีตา - CIS แคโรทีน ไลโคปีน คลอโรฟิลล์ , คลอโรฟิลล์ บี ได้รับคลอโรฟิลล์ เอ , คลอโรฟิลล์บี’ฟีโอไฟติน , และฟีโอไฟตินบี

Carotenoids และคลอโรฟิลล์สกัดด้วยอะซีโตน .ประมาณ 1 กรัมผักโขม แครอท มะเขือเทศ และพริกและ 1.5 กรัมผักพริกไทยสกัด 20 มิลลิลิตร สำหรับบดใน ultraturrax ( ระบบ PT 10-35 GT polytron ) ซึ่งถูกเพิ่มเพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดออกซิเดชัน โดยแยกเป็น Vortex ผสมและกรองผ่านตัวกรอง ( olimpeak เข็ม PTFE 0.22 μ M ) ก่อนฉีดเข้าไปใน HPLC คอลัมน์ในขั้นตอนการสกัด การเปิดรับแสง คือ หลีกเลี่ยงเพื่อป้องกันไม่ให้เชื้อลดลง การวิเคราะห์ของแต่ละตัวอย่างถูกดำเนินการทั้งสามใบ

อุปกรณ์ HPLC ประกอบด้วย Agilent 1200 ชุด คู่กับ ไดโอด เรย์และเครื่องตรวจจับเครื่องตรวจจับพ่อเรือง ( Agilent Technologies , waldbronn , เยอรมัน )Carotenoids และคลอโรฟิลล์ถูกแยกในคอลัมน์ ymc C30 พอลิ ( 3 μ M ขนาด 4.6 มม. × 150 มม. ) ( ymc Wilmington , NC , USA ) ควบคู่ไปที่ตลับหมึกและ equilibrated C30 ยามที่อุณหภูมิที่เหมาะสม ( 30 ° C และสารสกัดจากแครอท มะเขือเทศ ผักสีเขียวและ 20 ° C จาก พริกสีแดง ) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเมทานอล มทีบีอี และ milli-q น้ำพ่อเครื่อง ดำเนินการจาก 200 nm 700 นาโนเมตร Carotenoids และคลอโรฟิลล์พบ 450 nm . เครื่องตรวจจับการเรืองแสงที่ nm 440 ( กระตุ้น ) และ 660 nm ( Emission ) คลอโรฟิลล์ บัตรประชาชน สี่ที่แตกต่างกันและวิธีการดำเนินการขึ้นอยู่กับเมทริกซ์ เพื่อลดเวลาในการวิเคราะห์ ( ตารางที่ 1 )