ACE-inhibitory activity was measure

ACE-inhibitory activity was measured by HPLC method (Wang
et al., 2008). The supernatants of soluble fractions (pH 4.3) obtained
from fermentation samples were diluted in distilled
water to the same protein concentration (1 mg/mL) before ACEinhibitory
activity assay. According to the HPLC method, 50 L
of the buffered substrate solution (5 mM HHL in 50 mM HEPES
with 300 mM NaCl, pH 8.3) was mixed with 40 L of the supernatant
sample and pre-incubated at 37 °C for 5 min and then
10 L of ACE (0.1 U/mL) was added and further incubated at
37 °C for 30 min. After incubation, 250 L of 1M HCl was added
to stop the reaction. The amount of hippuric acid (HA) released
in the ACE reaction was measured by RP-HPLC (2690
Waters, Milford, MA, USA) equipped with C18 column
(4.6 × 150 mm, 5 m, Waters) and variable wavelength absorbance
detector set at 228 nm. The elution consisted of 70%
solvent A (0.05% (v/v) trifluoroacetic acid and 0.05% (v/v) triethylamine
in water to maintain pH value at 2.9–3.3) and 25%
(v/v) solvent B (100% (v/v) acetonitrile) and eluted at a flow rate
of 1 mL/min. The inhibitory activity was calculated using the
following equation.
where A is the concentration of HA without adding sample, B
is the concentration of HA with sample added and I is used
to express the percentage of ACE inhibition by sample.
The IC50 value was defined as the concentration of peptide
required to inhibit 50% of the ACE activity under the assayed
conditions, which was estimated by non-linear regression by
fitting data to a four-parameter logistic curve (SPSS20).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรมเอลิปกลอสไขถูกวัด โดยวิธี HPLC (วังร้อยเอ็ด al., 2008) Supernatants ของเศษส่วนที่ละลายน้ำ (pH 4.3) ที่ได้รับจากตัวอย่างถูกทำให้เจือจางในการหมักกลั่นน้ำไปที่เดียวกันโปรตีนเข้มข้น (1 mg/mL) ก่อน ACEinhibitoryวิเคราะห์กิจกรรมการ ตามวิธี HPLC, 50 Lของการแก้ปัญหาพื้นผิวถูกบัฟเฟอร์ (5 มม. HHL HEPES 50 มม.มี NaCl, pH 8.3 มม. 300) ถูกผสมกับ L 40 ของ supernatantชิ้นงานตัวอย่าง และ incubated ก่อนที่ 37 ° C สำหรับ 5 นาทีแล้วเอซ 10 L เพิ่ม และ incubated เพิ่มเติม ที่ (0.1 U/mL)37 ° C สำหรับ 30 นาที หลังจากบ่ม เพิ่ม 250 L 1 M HClหยุดปฏิกิริยา จำนวนกรด hippuric (ฮา) ออกใน ACE ปฏิกิริยาถูกวัด โดย RP-HPLC (2690น้ำ ลฟอร์ด MA, USA) พร้อมคอลัมน์ C18(4.6 × 150 mm, 5 เมตร น้ำ) และ absorbance ที่ความยาวคลื่นที่แปรเครื่องตรวจจับที่ตั้ง 228 nm Elution ที่ประกอบด้วย 70%ตัวทำละลาย (0.05% (v/v) กรด trifluoroacetic และ triethylamine 0.05% (v/v)ในน้ำเพื่อรักษาค่า pH ที่ 2.9-3.3) และ 25%(v/v) ตัวทำละลาย B (acetonitrile 100% (v/v)) และ eluted ที่อัตราการไหลของ 1 mL/นาที ลิปกลอสไขกิจกรรมถูกคำนวณโดยใช้การสมการต่อไปนี้ซึ่งคือ ความเข้มข้นของฮาโดยไม่ต้องเพิ่มตัวอย่าง Bมีความเข้มข้นของ HA ด้วยตัวอย่างเพิ่ม มาเป็นใช้แสดงเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง ACE โดยตัวอย่างค่า IC50 ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นของเพปไทด์ต้องยับยั้งกิจกรรมหนึ่งภายใต้การ assayed 50%เงื่อนไข ซึ่งถูกประเมิน โดยถดถอยไม่เชิงเส้นโดยพอดีข้อมูลเส้นโค้งโลจิสติก 4 พารามิเตอร์ (SPSS20)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรมการยับยั้ง ACE-วัดโดยวิธี HPLC (Wang
et al., 2008) supernatants เศษส่วนที่ละลายน้ำได้ (pH 4.3)
ที่ได้รับจากตัวอย่างการหมักถูกเจือจางในกลั่นน้ำเพื่อความเข้มข้นของโปรตีนเดียวกัน
(1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ก่อนที่จะ ACEinhibitory
ทดสอบกิจกรรม ตามวิธี HPLC 50? L
ของการแก้ปัญหาพื้นผิวบัฟเฟอร์ (5 มิลลิ HHL ใน 50 มิลลิ HEPES
300 มิลลิโซเดียมคลอไรด์มีค่า pH 8.3) ผสมกับ 40
ลิตรใสตัวอย่างและpre-บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 และจากนั้นนาที
10 ลิตร ACE (0.1 U / มิลลิลิตร)
ถูกบันทึกและบ่มเพิ่มเติมได้ที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที หลังจากการบ่ม 250? ลิตร 1M HCl
ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดปฏิกิริยา ปริมาณของกรด hippuric (HA)
ออกในปฏิกิริยาACE โดยวัดจาก RP-HPLC (2690
Waters, ฟอร์ด, MA, USA) พร้อมกับคอลัมน์ C18
(4.6 × 150 มม 5? มน้ำ)
และความยาวคลื่นตัวแปรการดูดกลืนแสงตรวจจับตั้งอยู่ที่ 228 นาโนเมตร ชะประกอบด้วย 70%
ตัวทำละลาย A (0.05% (v / v) กรด TRIFLUOROACETIC และ 0.05% (v / v) triethylamine
ในน้ำที่จะรักษาค่าพีเอชที่ 2.9-3.3) และ 25%
(v / v) เป็นตัวทำละลาย B (100 % (v / v) acetonitrile) และชะที่อัตราการไหล
1 มิลลิลิตร / นาที
กิจกรรมการยับยั้งที่คำนวณโดยใช้สมการต่อไป.
ซึ่งเป็นความเข้มข้นของ HA โดยไม่ต้องเพิ่มตัวอย่าง B
คือความเข้มข้นของฮากับตัวอย่างเพิ่มและฉันจะใช้ในการแสดงร้อยละของการยับยั้ง ACE โดยตัวอย่าง. ค่า IC50 ถูกกำหนดเป็น ความเข้มข้นของเปปไทด์ที่จำเป็นในการยับยั้งการ50% ของกิจกรรมภายใต้ ACE assayed เงื่อนไขซึ่งได้รับการประเมินโดยการถดถอยที่ไม่ใช่เชิงเส้นโดยข้อมูลที่เหมาะสมกับสี่พารามิเตอร์โค้งโลจิสติก (SPSS20)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอซยับยั้งกิจกรรมถูกวัดโดยวิธี HPLC ( วัง
et al . , 2008 ) การ supernatants เศษส่วน ละลายน้ำ ( pH 4.3 ) ที่ได้จากการหมักซึ่งเจือจางตัวอย่าง

ในกลั่นน้ำความเข้มข้นโปรตีนเดียวกัน ( 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ก่อน aceinhibitory
กิจกรรมการทดสอบ ตามวิธี  กรัม 50 L
ของพื้นผิวในสารละลาย ( 5 มม. 50 มม. hhl ฮีเปส
เติม 300 มม. ที่ pH 83 ) ผสมกับ 40  L ของตัวอย่างและนำ
ก่อนบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว
10  L ของเอซ ( 0.1 U / ml ) คือการเพิ่มและเพิ่มเติม บ่มที่ 37 ° C
เป็นเวลา 30 นาที หลังจากบ่ม , 250  l 1M HCl เพิ่ม
หยุด ปฏิกิริยา ปริมาณกรดฮิพ ( ฮา ) ปล่อย
ใน Ace ปฏิกิริยาถูกวัดด้วยๆ ( 0
น้ำ Milford , MA , USA ) พร้อม c18 คอลัมน์
( 4.6 × 150 มม.5  M , น้ำ ) และตัวแปรความยาวคลื่นค่า
ตรวจจับไว้ที่ 228 นาโนเมตร การใช้จำนวน 70 %
ตัวทำละลาย ( 0.05 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) และกรด trifluoroacetic 0.05 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ไตรเอตทิลามีน
ในน้ำเพื่อรักษาค่า pH ที่ 2.9 ( 3.3 ) และ 25 %
( v / v ) ตัวทำละลาย B ( 100 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ไน ) และตัวอย่างที่ อัตราการไหล
1 มิลลิลิตร / นาที ยับยั้งกิจกรรมคำนวณได้โดยใช้สมการต่อไปนี้

.ซึ่งมีความเข้มข้นของฮาโดยไม่ต้องเพิ่มตัวอย่าง B
คือความเข้มข้นของ ฮา กับตัวอย่างเพิ่มและฉันใช้เพื่อแสดงร้อยละของเอซ

ค่าการยับยั้งโดยตัวอย่าง ic50 ถูกกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์
ต้องยับยั้ง 50% ของ ACE กิจกรรมภายใต้ assayed
เงื่อนไข ซึ่ง ประมาณเส้นถดถอยโดย
โดยข้อมูลที่เหมาะสมกับสี่พารามิเตอร์ logistic curve ( spss20 )