CRs were isolated from mature ovari

CRs were isolated from mature ovaries according to the method described by Lynn and Clark [18]. Briefly, pieces of ovaries were homogenized in an isolation medium (IM; 500 mM NaCl, 9 mM CaCl2, 14 mM KCl, 15 mM MgCl2, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.6) containing 30% sucrose. The homogenate was centrifuged (1000 × g, 5 min, 4°C). The pellet containing CRs was resuspended in IM, and the suspension was overlaid onto 60% sucrose in IM and centrifuged (8000 × g, 60 min, 4°C). The white pellet containing mainly CRs was washed four times with IM. As in physiological conditions, isolated CRs were left overnight (4°C) in artificial seawater (ASW; same compositions as CFASW, but with 9.3 mM CaCl2, pH 7.8) to obtain soluble materials. Solubilization of CRs was also facilitated by brief sonications (100 W, 15 sec, 4°C, three times) before the overnight incubation. Protein concentration of the solubilized CRs was measured as described above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

CRs ถูกแยกจากแม่รังไข่ตามวิธีที่อธิบายไว้ โดยลินน์และคลาร์ก [18] สั้น ๆ ชิ้นส่วนของรังไข่ถูก homogenized ในการแยกกลาง (IM; 500 มม. NaCl, CaCl2 9 มม. 14 mM KCl, MgCl2 15 มม. และ 10 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, pH 7.6) ที่ประกอบด้วย 30% ซูโครส Homogenate ถูก centrifuged (1000 × g, 5 นาที 4° C) เม็ดที่ประกอบด้วย CRs ถูก resuspended ใน IM และระบบกันสะเทือนถูกวางทับลงบน 60% ซูโครสใน IM และผลิตภัณฑ์ (8000 × g, 60 นาที 4° C) เม็ดสีขาว CRs ส่วนใหญ่ถูกล้างสี่ครั้ง ด้วย IM ในสภาพสรีรวิทยา แยก CRs ถูกซ้ายค้างคืน (4 ° C) ในน้ำทะเลเทียม (ASW องค์ประกอบเดียวกัน เป็น CFASW แต่ กับ CaCl2, pH 7.8 9.3 มิลลิเมตร) เพื่อขอรับวัสดุละลาย Solubilization ของ CRs ถูกประกอบ โดยย่อ sonications (100 W, 15 วินาที 4° C, 3 ครั้ง) ก่อนบ่มข้ามคืน ความเข้มข้นของโปรตีนของ solubilized CRs ถูกวัดตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

CR ที่แยกได้จากรังไข่ผู้ใหญ่ตามวิธีการอธิบายโดยลินน์และคลาร์ก [18] สั้น ๆ , ชิ้นส่วนของรังไข่ถูกปั่นในกลางแยก (IM 500 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, 9 มม CaCl2, KCl 14 mm, 15 มม MgCl2 และ 10 มิลลิ Tris-HCl ค่า pH 7.6) ที่มีน้ำตาลซูโครส 30% homogenate ถูกหมุนเหวี่ยง (1000 × G, 5 นาที, 4 ° C) เม็ดที่มี CRs ถูก resuspended ใน IM, และระงับถูกวางทับลงบน 60% น้ำตาลซูโครสใน IM และหมุนเหวี่ยง (8000 × G, 60 นาที, 4 ° C) เม็ดสีขาวที่มีส่วนใหญ่ CRs ถูกล้างครั้งที่สี่กับ IM ในขณะที่สภาพร่างกายจำบางแห่งถูกทิ้งไว้ข้ามคืน (4 ° C) ในน้ำทะเลเทียม (ASW; องค์ประกอบเดียวกับ CFASW แต่ด้วย 9.3 มิลลิ CaCl2 ค่า pH 7.8) เพื่อให้ได้วัสดุที่ละลายน้ำได้ การละลายของยังจำได้รับการอำนวยความสะดวกโดย sonications สั้น ๆ (100 วัตต์, 15 วินาที 4 ° C, สามครั้ง) ก่อนที่จะมีการบ่มในชั่วข้ามคืน ความเข้มข้นของโปรตีนจำละลายวัดตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่แยกได้จากผู้ใหญ่จำนวนมากรังไข่ตามวิธีการที่อธิบายโดย Lynn และคลาร์ก [ 18 ] สั้น ๆ , ชิ้นของรังไข่ถูกบดในการแยกปานกลาง ( Im ; 500 มม. ขนาด 9 มม. ผลิต 14 mm . , 15 มม. MgCl2 และ HCl จาก 10 มม. pH 7.6 ) ที่มี 30 % ซูโครส โดยแยกเป็นระดับ ( 1 × G , 5 นาที , 4 ° C ) เม็ดที่มีจำนวนมากถูก resuspended ใน IM และถูกระงับลง 60% และซูโครสใน IM และไฟฟ้า ( 8 ×กรัม , 60 นาที , 4 ° C ) เม็ดสีขาวที่มีส่วนใหญ่จำซักสี่ครั้งด้วย IM ในเงื่อนไขทางสรีรวิทยา , แยกจำนวนมากถูกทิ้งข้ามคืน ( 4 ° C ) ในน้ำทะเลเทียม ( ASW ; เดียวกันของ cfasw แต่ด้วย CaCl2 9.3 มม. , pH 7.8 ) เพื่อให้ได้วัสดุที่ละลายน้ำได้ การสกัดของ CRS มีความสะดวก โดย sonications สั้น ( 100 W , 15 วินาที , 4 ° C , สามครั้ง ) ก่อนที่จะบ่มค้างคืน ความเข้มข้นของสารละลายโปรตีนจำนวนมากวัดตามที่อธิบายไว้ข้างต้น