A SBgl3 gene without the signal pep

A SBgl3 gene without the signal peptide was expressed in
P. pastoris to determine the structural elements involved in the catalytic site of SBgl3. The purification of rSBgl3 was facilitated by
fusion of (His)6 at the C-terminus. The SBgl3 gene fused with and
without (His)6 at its C-terminus was successfully cloned into pPICZaA,
and designated pPICZaA/SBgl3His and pPICZaA/SBgl3, respectively.
P. pastoris harboring pPICZaA/SBgl3 produced SBgl3 with the same
level of activity as that harboring pPICZaA/SBgl3His (Supplementary
Fig. 2). These results suggested that the polyhistidine (His)6 tag did
not affect SBgl3 activity. The rSBgl3 fused with the polyhistidine
(His)6 tag (rSBgl3His) was, therefore, expressed for purification
and characterization. After adjusting the optimal conditions for
expression, rSBgl3His produced by P. pastoris cultured in BMMY
at 16 C was detected at 0.5 nkat/ml using 1 mM torvoside A(1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยีน SBgl3 เพปไทด์สัญญาณโดยไม่ได้แสดงออกในP. pastoris เพื่อตรวจสอบโครงสร้างองค์ประกอบเกี่ยวข้องในเว็บไซต์ตัวเร่งปฏิกิริยาของ SBgl3 เป็นการอำนวยความสะดวกโดยการทำให้บริสุทธิ์ของ rSBgl3ฟิวชั่น 6 (ของ) ที่ C เทอร์มินัส ยีน SBgl3 ผสมผสานกับ และไม่สำเร็จถูกโคลน 6 (ของเขา) ที่ของ C terminus เป็น pPICZaAและกำหนด pPICZaA/SBgl3His และ pPICZaA/SBgl3 ตามลำดับP. pastoris เก็บงำ pPICZaA/SBgl3 ผลิต SBgl3 ด้วยเหมือนกันระดับของกิจกรรมเป็นที่ harboring pPICZaA/SBgl3His (ตีนจกกินข้าวแดง 2 ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำว่า polyhistidine การแท็ก 6 (ของเขา) ได้ไม่มีผลต่อกิจกรรม SBgl3 RSBgl3 ที่ผสมผสานกับการ polyhistidineแท็ก (ของเขา) 6 (rSBgl3His),ดังนั้น แสดงสำหรับการทำให้บริสุทธิ์และสมบัติ หลังจากปรับเงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับนิพจน์ rSBgl3His ผลิต โดย P. pastoris ล้างใน BMMYที่ 16 C พบที่ 0.5 nkat/ml ใช้ 1 มม. torvoside A(1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีน SBgl3 โดยไม่ต้องเปปไทด์สัญญาณถูกแสดงออกมาใน
พี pastoris เพื่อตรวจสอบองค์ประกอบโครงสร้างที่เกี่ยวข้องในการเร่งปฏิกิริยาของเว็บไซต์ SBgl3 บริสุทธิ์ของ rSBgl3 อำนวยความสะดวกโดย
การหลอมรวมของ (ของเขา) 6 ใน C-ปลายทาง ยีน SBgl3 ผสมกับและ
โดยไม่ต้อง (ของเขา) 6 ในของ C-ปลายทางเป็นโคลนประสบความสำเร็จใน pPICZaA,
และได้รับมอบหมาย pPICZaA / SBgl3His และ pPICZaA / SBgl3 ตามลำดับ.
พี pastoris เก็บงำ pPICZaA / SBgl3 ผลิต SBgl3 เดียวกับ
ระดับของกิจกรรมเป็นที่เก็บงำ pPICZaA / SBgl3His (เสริม
รูป. 2) ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่า polyhistidine นี้ (ของเขา) 6 แท็กไม่
ได้มีผลต่อกิจกรรม SBgl3 rSBgl3 หลอมละลายกับ polyhistidine
(ของเขา) 6 Tag (rSBgl3His) เป็นจึงแสดงสำหรับการทำให้บริสุทธิ์
และลักษณะ หลังจากปรับสภาวะที่เหมาะสมสำหรับ
การแสดงออก rSBgl3His ผลิตโดย P. pastoris เพาะเลี้ยงใน BMMY
ที่ 16 องศาเซลเซียสถูกตรวจพบที่ 0.5 nkat / ml ใช้ 1 มิลลิ torvoside A (1)