2.6. Protein carbonyl content measu

2.6. Protein carbonyl content measurement

The protein carbonyl content was measured according to the method described by Huang et al. (2006), which uses the reaction of 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) with the carbonyl groups of proteins.

Egg white protein solutions were diluted to 4 mg/mL.

In 2.0-mL capped polyethylene centrifuge tubes, 0.35 mL protein solution was mixed with 1 mL 10 mM DNPH in 2 N HCl and incubated at 20 C for 2 h.

Equivalent protein solution was mixed with 1 mL 2 N HCl (absence of DNPH) as a blank.

Then 0.45 mL 40% trichloroacetic acid was added and vortexed and stood for 20 min then centrifuged at 10,000g for 10 min.

The sediment was washed thrice with 1.5 mL ethyl acetate solution (1:1, v/v).

The protein was suspended in 1.0 mL 6 M guanidine hydrochloride solution by being incubated in a water bath (37 C) for 20 min and with vortexed every 5 min.

The absorbance at 367 nm was recorded and the results were expressed as nmoles carbonyl groups per milligram
of soluble protein with molar extinction coefficient of 22,000 M cm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ปริมาณโปรตีนคาร์บอนิลวัดเนื้อหาโปรตีนคาร์บอนิลวัดตามวิธีการอธิบายโดย Huang et al, (2006) ซึ่งใช้ปฏิกิริยาของ 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) กับกลุ่มคาร์บอนิลของโปรตีน. ไข่โซลูชั่นโปรตีนขาวลดลงเหลือ 4 มก. / มล. ใน 2.0 มิลลิลิตรต่อยอด centrifuge หลอดพลาสติก 0.35 มิลลิลิตรโปรตีนเป็นวิธีการแก้ปัญหา ผสมกับ 1 มิลลิลิตร 10 มิลลิ DNPH 2 ไม่มี HCl และบ่มที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง. วิธีการแก้ปัญหาที่มีโปรตีนเทียบเท่าผสมกับ 1 มิลลิลิตร 2 ไม่มี HCl (กรณีที่ไม่มี DNPH) เป็นที่ว่างเปล่า. แล้ว 0.45 มิลลิลิตร 40% กรดไตรคลอโรถูกเพิ่มเข้ามา และการ vortex และยืน 20 นาทีที่แล้วปั่น 10,000g เป็นเวลา 10 นาที. ตะกอนถูกล้างสามครั้งพร้อมกับ 1.5 มิลลิลิตรวิธีการแก้ปัญหาเอทิลอะซิเตท. (1: 1, v / v) โปรตีนที่ถูกระงับใน 1.0 มิลลิลิตร 6 M วิธีการแก้ปัญหาโดยการไฮโดรคลอไร guanidine ถูกบ่มในอ่างน้ำ (37 องศาเซลเซียส) เป็นเวลา 20 นาทีและมีการ vortex ทุก 5 นาที. การดูดกลืนแสงที่ 367 นาโนเมตรได้รับการบันทึกและผลที่ได้รับการแสดงเป็น nmoles กลุ่มคาร์บอนิลต่อมิลลิกรัมของโปรตีนที่ละลายน้ำมีค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียฟันกราม22,000 M ซม. .

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 โปรตีนคาร์บอนิลเนื้อหาการวัด

โปรตีนคาร์บอนิลเนื้อหาได้ตามวิธีการที่อธิบายโดย Huang et al . ( 2006 ) ซึ่งใช้ปฏิกิริยาของ 2,4-dinitrophenylhydrazine ( dnph ) กับคาร์บอนิลกลุ่มของโปรตีน

ไข่ขาวโปรตีนโซลูชั่นเพื่อลด 4 มก. / มล.

ใน 2.0-ml ฝาครอบพลาสติก centrifuge หลอด 035 ml ผสมกับโปรตีนในสารละลาย 1 มล. 10 มม. dnph 2 N HCl และบ่มที่อุณหภูมิ 20  C 2 H .

เทียบเท่าโปรตีนในสารละลายผสม 1 ml 2 N HCl ( ไม่มี dnph ) เป็นว่าง

งั้น 0.45 มิลลิลิตร 40% กรดไตรคลอโรอะซิติกถูกเพิ่มและ vortexed ยืน 20 นาที แล้วไฟฟ้าที่ 10000g 10 นาที

ตะกอนล้างสามครั้งกับ 1.5 ml สารละลายเอทิลอะซิเตท ( 1 : 1 1 : v / v )

โปรตีนที่ถูกระงับใน 1.0 มิลลิลิตร 6 M กัวนิดีน ไฮโดรคลอไรด์ แก้โดยการ บ่มในน้ำอาบ ( 37  C ) เป็นเวลา 20 นาที และ vortexed ทุก 5 นาที

มีการดูดกลืนแสงที่ 367 nm ที่ถูกบันทึกไว้และผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นในคาร์บอนิลกลุ่มต่อมิลลิกรัม
ของโปรตีนละลายกับค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ฟันกรามของ 22 , 000 เมตร ซม.