2.5. Synthesizing cross-linked FCA/

2.5. Synthesizing cross-linked FCA/COSs scaffold
Scaffold consisted of FC and SA was initially fabricated by blending
and freeze drying technique. COSs were added subsequently in
the second stage of cross-linking.Initially, SA was dissolved in dH2O
at 60 ◦C to obtain 3% (w/v) solution and FC in 0.02 M acetic acid at
4 ◦C to obtain 0.8% (w/v) solution. FC was then neutralized by 2 M
NaOH in 1× PBS and both FC and SA solutions were initially well
mixed at 4 ◦C using homogenizer for 5 min and thereafter mixed for
two days under continuous string using magnetic stirrer to obtain
clear solution with the ratio of 70: 30 (w/w) of collagen to alginate.
The blends were then centrifuge at 3000 rpm for 15 min to
discharge air accumulated in the blend solution. Resultant mixture
was loaded into cell culture plates depending on the destination of
the scaffolds by avoiding air bubble trap in solution. After that, the
molded FCA blend solution was kept at 25 ◦C for 12 h allowing collagen
gelation and freeze first at −20 ◦C, subsequently at −80 ◦C for
12 h per each. Freeze dried blend was lipolyzed to result FCA blend
P. Chandika et al. / International Journal of Biological Macromolecules 81 (2015) 504–513 507
scaffolds. Thereafter, lypolyzed 3D scaffolds were chemically crosslinked
by EDC/NHS in MES buffer solution for 4 h. Briefly, 50 mg of
dry weight of lypolyzed scaffolds were incubated in 20 ml of 50 mM
MES buffer (pH5.5)for 0.5 handthenimmersedin19.5 ml of 50 mM
MES containing 33 mM EDC and 6 mM NHS (pH 5.5). Subsequently,
COSs (COS1, COS2, COS3, COS4 were 1–3 kDa, 3–5 kDa, 5–10 kDa,
>10 kDa, respectively) were added to the cross-linking solution till
concentration reaches 1%, and allowed to cross-link for another
20 h to develop FCA/COS1, FCA/COS2, FCA/COS3, FCA/COS4. Crosslinked
scaffolds (FCA/COSs) were then thoroughly washed by dH2O
for 2 days at 4 ◦C and freeze dried (schematic chemical reaction
represented in Fig. 1) and stored at 4 ◦C until use.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การสังเคราะห์ cross-linked FCA/COSs นั่งร้านประกอบนั่งร้าน FC และ SA ถูกประดิษฐ์ โดยการผสมครั้งแรกและตรึงเทคนิคการอบแห้ง COSs ถูกเพิ่มเข้ามาในขั้นสองของการเชื่อมโยง ตอนแรก ละลาย SA ใน dH2Oที่ 60 ◦C รับโซลูชัน 3% (w/v) และ FC ในกรด 0.02 M ที่◦C 4 ขอโซลูชัน 0.8% (w/v) FC ถูกแล้ว neutralized ได้ โดย 2 เมตรNaOH 1 × PBS และ FC และ SA โซลูชั่นดีในตอนแรก4 ◦C ใช้ homogenizer สำหรับ 5 นาที และหลังจากนั้นผสมสำหรับวันที่สองภายใต้ต่อเนื่องสายที่ใช้ช้อนคนแม่เหล็กได้ลบโซลูชันที่ มีอัตราส่วน 70:30 (w/w) ของคอลลาเจนให้แอลจิเนตผสมได้เหวี่ยงที่ 3000 rpm 15 นาทีไปแล้วปล่อยอากาศสะสมในการแก้ไขปัญหาผสมผสาน ผลลัพธ์ผสมถูกโหลดลงในแผ่นวัฒนธรรมเซลล์ขึ้นอยู่กับปลายทางของเกิด โดยการหลีกเลี่ยงฟองอากาศดักในโซลูชัน หลังจากนั้น การหล่อแบบ FCA ผสมผสานโซลูชันที่ถูกเก็บไว้ที่ 25 ◦C สำหรับ 12 ชั่วโมงช่วยให้คอลลาเจนgelation และหยุดก่อนที่ ◦C −20 มาที่ ◦C −80 สำหรับ12 ชม.ละ แช่แข็งอบแห้งจึงเป็น lipolyzed ที่ผสมผสาน FCAP. Chandika ร้อยเอ็ดนานาชาติของ macromolecules เป็นชีวภาพ 81 (2015) 504-513 507เกิด หลังจากนั้น lypolyzed 3D เกิดถูกสารเคมีกระแทกโดย EDC/NHS ในโซลูชันบัฟเฟอร์ MES สำหรับ 4 สั้น ๆ 50 มก.น้ำหนักแห้งของ lypolyzed ที่ได้รับการกกเกิดใน 20 ml 50 มม.MES บัฟเฟอร์ (pH5.5) สำหรับ 0.5 ml handthenimmersedin19.5 50 มม.MES ประกอบด้วย 33 มม. 6 มม.และ EDC NHS (pH 5.5) ต่อมาCOSs (COS1, COS3, COS2, COS4 ถูก kDa 1-3, 3-5 kDa, kDa 5-10> 10 kDa ตามลำดับ) เพิ่มเพื่อการแก้ไขปัญหา cross-linking จนถึงความเข้มข้นถึง 1% และอนุญาตให้ cross-link อีกชม.ที่ 20 การพัฒนา FCA/COS1, FCA/COS2, FCA/COS3, FCA/COS4 กระแทกเกิด (FCA COSs) ถูกแล้วอย่างล้าง โดย dH2O2 วันที่ 4 ◦C และแช่แข็งอบแห้ง (แผนผังปฏิกิริยาเคมีแสดงในรูปที่ 1) และเก็บไว้ที่ 4 ◦C จนถึงใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 สังเคราะห์ cross-linked FCA / COSS นั่งร้าน
นั่งร้านประกอบด้วยเอฟซีและ SA ถูกสร้างขึ้นโดยการผสม
และแช่แข็งเทคนิคการอบแห้ง COSS ถูกเพิ่มในภายหลัง
ขั้นตอนที่สองของการข้าม linking.Initially, SA ถูกละลายใน dH2O
ที่ 60 ◦Cที่จะได้รับ 3% (w / v) การแก้ปัญหาและเอฟซีใน 0.02 M กรดอะซิติกที่
4 ◦Cที่จะได้รับ 0.8% ( w / v สารละลาย) เอฟซีได้รับการเป็นกลางแล้วโดย 2 M
NaOH ใน 1 ×พีบีเอสเอฟซีและทั้งสองและการแก้ปัญหา SA อยู่ในขั้นต้นดี
ผสมที่ 4 ◦Cใช้ homogenizer เป็นเวลา 5 นาทีและหลังจากนั้นผสมสำหรับ
สองวันภายใต้สตริงอย่างต่อเนื่องโดยใช้ stirrer แม่เหล็กที่จะได้รับ
การแก้ปัญหาที่ชัดเจนกับอัตราส่วน 70: 30 (w / w) คอลลาเจนให้กับอัลจิเนต.
ผสมแล้วถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีในการ
ปล่อยอากาศสะสมในการแก้ปัญหาการผสมผสาน ส่วนผสมผลลัพธ์
ถูกโหลดลงในจานเพาะเลี้ยงเซลล์ขึ้นอยู่กับปลายทางของ
โครงโดยหลีกเลี่ยงกับดักฟองอากาศในการแก้ปัญหา หลังจากนั้น
การแก้ปัญหาการผสมผสาน FCA แม่พิมพ์ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 25 ◦Cเป็นเวลา 12 ชั่วโมงช่วยให้คอลลาเจน
เจลและแช่แข็งเป็นครั้งแรกที่ -20 ◦Cภายหลังที่ -80 ◦Cสำหรับ
12 ชั่วโมงละ ตรึงผสมผสานแห้ง lipolyzed จะส่งผล FCA ผสมผสาน
พี Chandika et al, / วารสารนานาชาติทางชีวภาพ Macromolecules 81 (2015) 504-513 507
โครง หลังจากนั้นเป็นต้นมา lypolyzed โครง 3D ถูกเชื่อมขวางทางเคมี
โดย EDC / พลุกพล่านในสารละลายบัฟเฟอร์ MES สำหรับ 4 ชั่วโมง สั้น ๆ , 50 mg ของ
น้ำหนักแห้งของโครง lypolyzed ถูกบ่มใน 20 มล. 50 มิลลิ
MES บัฟเฟอร์ (pH5.5) 0.5 handthenimmersedin19.5 มิลลิลิตรขนาด 50 มม
MES มี 33 มิลลิ EDC และ 6 มิลลิพลุกพล่าน (pH 5.5) ต่อมา
COSS (COS1, COS2, COS3, COS4 ได้ 1-3 กิโลดาลตัน 3-5 กิโลดาลตัน 5-10 กิโลดาลตัน
> 10 กิโลดาลตันตามลำดับ) ถูกเพิ่มเพื่อแก้ปัญหาการเชื่อมโยงข้ามจน
ความเข้มข้นถึง 1% และได้รับอนุญาตให้ ข้ามการเชื่อมโยงต่อไปอีก
20 ชั่วโมงเพื่อพัฒนา FCA / COS1, FCA / COS2, FCA / COS3, FCA / COS4 เชื่อมขวาง
โครง (FCA / COSS) จากนั้นก็ล้างให้สะอาดโดย dH2O
2 วันที่ 4 ◦Cและแช่แข็งแห้ง (ปฏิกิริยาทางเคมีแผนผัง
แสดงในรูปที่ 1). และเก็บไว้ที่ 4 ◦Cจนถึงการใช้งาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 สังเคราะห์เชื่อมโยง FCA / coss นั่งร้านนั่งร้าน ประกอบด้วย เอฟซี และ ซา ได้เริ่มประดิษฐ์โดยผสมและแช่แข็งแห้ง coss เพิ่มในภายหลังในขั้นที่สองของ cross-linking.initially ละลายใน dh2o สา60 ◦ C จะได้รับ 3% ( w / v ) โซลูชั่น และ เอฟซี อยู่ที่ 0.02 M กรดอะซิติก4 ◦ C ได้รับ 0.8 % ( w / v ) โซลูชั่น เอฟซีก็เป็นกลาง โดย 2 ม.ใช้ใน 1 × PBS และทั้ง ชลบุรี เอฟซี และซาโซลูชั่นเริ่มต้นได้ดี4 ◦ C ใช้ผสมในเครื่องปั่นและผสมเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากนั้นสำหรับสองวันภายใต้สตริงต่อเนื่องโดยใช้ stirrer แม่เหล็ก ที่จะได้รับล้างสารละลายที่มีอัตราส่วน 70 : 30 ( w / w ) ของคอลลาเจนให้อัล .ผสมแล้วเครื่อง 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีอากาศสะสมในการผสมสารละลาย ส่วนผสม ผลลัพธ์ถูกโหลดลงในจานเพาะเลี้ยงเซลล์ขึ้นอยู่กับปลายทางของโครง โดยการหลีกเลี่ยงกับดักฟองอากาศในสารละลาย หลังจากนั้นแม่พิมพ์ FCA ผสมผสานโซลูชั่นถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสนาน 12 ชั่วโมง◦ช่วยให้คอลลาเจนการเกิดเจลและตรึงแรกที่− 20 ◦ C ต่อมาที่− 80 ◦ C สำหรับ12 ชั่วโมงต่อแต่ละ ตรึงแห้งผสมอยู่ lipolyzed ผล FCA ผสมผสานหน้า chandika et al . / วารสารทางชีววิทยาโมเลกุล 81 ( 2015 ) 504 - 513 507นั่งร้าน หลังจากนั้น lypolyzed 3D นั่งร้านถูกเคมีน้ำหนักโดย NHS ในสารละลายบัฟเฟอร์ EDC / เดือน 4 ชั่วโมง สั้น 50 มิลลิกรัมน้ำหนักแห้งของ lypolyzed นั่งร้านถูกบ่มใน 20 ml 50 มม.นอกจากนี้ บัฟเฟอร์ ( ph5.5 ) 0.5 มล. handthenimmersedin19.5 50 มม.เดือนที่มี 33 มม. และ 6 มม. EDC NHS ( pH 5.5 ) ต่อมาcoss ( cos1 cos2 cos3 , , , cos4 1 – 3 ( 3 – 5 กิโล , 5 – 10 kDa> 10 kDa ตามลำดับ ) เพิ่มไปจนเมื่อ โซลูชั่นความเข้มข้นถึงร้อยละ 1 และได้รับอนุญาตให้ข้ามเชื่อมโยงอีก20 ชั่วโมง เพื่อพัฒนา cos1 FCA FCA / , / cos2 FCA cos3 FCA , / , / cos4 . น้ำหนักนั่งร้าน ( FCA / coss ) แล้วล้างให้สะอาด โดย dh2o2 วัน 4 ◦ C และตรึงแห้ง ( แผนผังปฏิกิริยาเคมีแสดงในรูปที่ 1 ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 ◦ C จนใช้