The strategy for the generation of

The strategy for the generation of cardiac Fpn knockout mice is outlined in Fig. S4. Briefly, C57BL/6N mice harboring a knockout first mutation at the Fpn (Slc40a1) locus were obtained from the European Mouse Mutant Cell Consortium and were crossed with a C57BL/6 Flp recombinase deleter mouse, Tg(ACTB-FlpE)9205Dym/J, to remove the selection cassette and generate a Fpn allele with floxed exons 4 and 5, which encode the transmembrane domain. As a first line of validation, we crossed floxed mice (Fpn fl/fl) with mice transgenic for the ubiquitously expressed Pgk1-Cre recombinase, Tg(Pgk1-cre) (32), and confirmed embryonic lethality in ubiquitous homozygous knockouts (Fpn−/−). Cardiac Fpn knockouts then were generated by crossing homozygous Fpn fl/fl animals with mice transgenic for Myh6-Cre recombinase B6.FVB-Tg(Myh6-cre)2182Mds/J (33), which is under the control of cardiomyocyte-specific myosin alpha heavy-chain 6 promoter. The subsequent breeding strategy was designed to produce cardiac Fpn knockouts and homozygous floxed controls (hereafter referred to as “Fpn fl/fl Myh6.Cre+” and “Fpn fl/fl,” respectively) in the same litter.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กลยุทธ์สำหรับการสร้างหัวใจหนูชนะน็อกโดยเทคนิค Fpn มีรายละเอียดในฟิก S4 สั้น ๆ หนู C57BL/6N harboring กลายพันธุ์แรกชนะน็อกโดยเทคนิคที่โลกัสโพล Fpn (Slc40a1) ได้รับมาจากยุโรปเมาส์ Mutant เซลล์ Consortium และถูกข้าม ด้วยเมาส์ Flp C57BL/6 recombinase deleter, Tg (ACTB-FlpE) 9205Dym/J การเอาเทปเลือกสร้าง allele Fpn กับ floxed exons 4 และ 5 การเข้ารหัสโดเมน transmembrane บรรทัดแรกของการตรวจสอบ เราข้ามหนู floxed (fl Fpn fl) กับหนูถั่วเหลือง ubiquitously แสดง Pgk1 Cre recombinase, Tg(Pgk1-cre) (32), และ lethality ยืนยันตัวอ่อนที่สมบูรณ์ homozygous knockouts (Fpn− −) หัวใจ Fpn knockouts แล้วมีสร้าง โดยข้ามสัตว์ fl/fl Fpn homozygous กับหนูถั่วเหลืองสำหรับ recombinase Myh6 Cre B6 FVB-Tg(Myh6-cre) 2182Mds/J (33), ซึ่งอยู่ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ cardiomyocyte เฉพาะไมโอซินอัลฟาโซ่หนัก 6 กลยุทธ์การปรับปรุงพันธุ์ต่อมาถูกออกแบบให้ผลิต knockouts Fpn หัวใจและ homozygous floxed ควบคุม (โดยเรียกว่า "Fpn fl/fl Myh6.Cre+" และ "Fpn fl/fl ตามลำดับ) ในแคร่เดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กลยุทธ์ในการสร้าง FPN หัวใจหนูที่น่าพิศวงจะอธิบายในรูป S4 สั้น ๆ , C57BL / 6N หนูเก็บงำสิ่งที่น่าพิศวงกลายพันธุ์เป็นครั้งแรกที่ FPN (Slc40a1) สถานที่ที่ได้รับจาก Mutant เมาส์ยุโรป Consortium เซลล์และถูกข้ามกับ C57BL / 6 FLP recombinase เมาส์ Deleter, TG (ACTB-FlpE) 9205Dym / เจ ที่จะเอาเทปการเลือกและการสร้างอัลลีล FPN กับ floxed exons ที่ 4 และ 5 ซึ่งเข้ารหัสโดเมนรน ในฐานะที่เป็นบรรทัดแรกของการตรวจสอบเราข้ามหนู floxed (FPN ชั้น / FL) กับหนูพันธุ์สำหรับแสดง ubiquitously Pgk1-Cre recombinase, TG (Pgk1-CRE) (32) และได้รับการยืนยันจากตัวอ่อนตายใน knockouts homozygous แพร่หลาย (Fpn- / -) หัวใจ FPN knockouts นั้นถูกสร้างขึ้นโดยข้าม homozygous FPN ชั้น / ชั้นสัตว์ที่มีหนูพันธุ์สำหรับ Myh6-Cre recombinase B6.FVB-TG (Myh6-CRE) 218​​2Mds / J (33) ซึ่งอยู่ภายใต้การควบคุมของ myosin cardiomyocyte เฉพาะอัลฟา ห่วงโซ่หนัก 6 โปรโมเตอร์ กลยุทธ์การปรับปรุงพันธุ์ต่อมาได้รับการออกแบบมาเพื่อผลิต knockouts FPN การเต้นของหัวใจและการควบคุม f​​loxed homozygous (ต่อจากนี้จะเรียกว่า "FPN ชั้น / ชั้น Myh6.Cre +" และ "FPN ชั้น / ชั้น" ตามลำดับ) ในครอกเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กลยุทธ์สำหรับการสร้าง fpn น็อกหัวใจหนูจะอธิบายไว้ในรูปที่ S4 . สั้น ๆ , c57bl / ทัวร์หนูที่น่าพิศวงแรกการกลายพันธุ์ที่ fpn ( slc40a1 ) ตนได้รับจากยุโรปเมาส์กลายพันธุ์เซลล์และให้คำปรึกษาได้ข้ามกับ c57bl / 6 flp recombinase Deleter เมาส์ TG ( พ.ศ. flpe ) 9205dym / เจเพื่อลบการเทปและสร้างกลุ่ม fpn กับ floxed โค 4 และ 5 ซึ่งเข้ารหัสเยื่อหุ้มเซลล์ . เป็นบรรทัดแรกของการตรวจสอบ เราข้าม floxed หนู ( fpn FL / FL ) กับหนูพันธุ์สำหรับ ubiquitously แสดง pgk1 CRE recombinase TG ( pgk1 CRE ) ( 32 ) และยืนยันตัวในยีน knockouts Lethality แพร่หลาย ( fpn / −− )หัวใจ fpn knockouts แล้วถูกสร้างขึ้นโดยข้ามสัตว์ / FL fpn FL โฮโมไซกัสยีนให้กับหนู myh6 CRE recombinase B6 fvb TG ( myh6 CRE ) 2182mds / J ( 33 ) ซึ่งอยู่ภายใต้การควบคุมของ cardiomyocyte เฉพาะ myosin อัลฟาหนักโซ่ 6 โปรโมเตอร์กลยุทธ์การปรับปรุงพันธุ์ต่อมาถูกออกแบบมาเพื่อผลิต fpn knockouts หัวใจและส่วน floxed การควบคุม ( ต่อจากนี้จะเรียกว่า " fpn FL / FL myh6 . TV " และ " fpn FL / FL , ตามลำดับ ) ในครอกเดียวกัน