First, reproducible quantification

First, reproducible quantification of any low abundance target (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แรก จำลองนับจำนวนเป้าหมายใด ๆ ความอุดมสมบูรณ์ต่ำ (< ชุด 1000) เป็นปัญหาเนื่องจากข้อจำกัดของเงินของแม่ที่มีอยู่ภายในเป็นส่วนผสมกรดนิวคลีอิกซับซ้อน (มอนติคาร์โลผล) กระบือโดยธรรมชาติ (Karrer et al. 1995) ประการที่สอง ตั้งแต่ตัวอย่างทางชีวภาพมากมายประกอบด้วยสารยับยั้งการ RT หรือ PCR ขั้นตอน มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อประเมินสถานะของสารยับยั้งใด ๆ ของกิจกรรมพอลิเมอเรสใน RT และ PCR นี่คือความสำเร็จได้ง่ายที่สุด โดยใช้การอ้างอิง RT-PCR assay ซึ่ง RNA อย่างเพิ่ม และวัดกะ Ct (Smith et al2003) . ประการที่สาม คุณจำเป็นต้องใช้กลยุทธ์ normalisation กับควบคุมจำนวนเริ่มต้นวัสดุ รูปแบบของการขยายประสิทธิภาพและความแตกต่างระหว่างตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ครั้งแรกที่สามารถทำซ้ำได้ปริมาณของเป้าหมายใด ๆ ความอุดมสมบูรณ์ต่ำ (<1,000 เล่ม) เป็นปัญหาอันเนื่องมาจากข้อ จำกัด โดยธรรมชาติของการขยาย PCR ของจำนวนเงินที่เล็ก ๆ ของแม่แบบที่มีอยู่ภายในที่ซับซ้อนผสมกรดนิวคลีอิก (ผล Monte Carlo) (Karrer et al. 1995) ประการที่สองตั้งแต่ตัวอย่างทางชีวภาพจำนวนมากมีสารยับยั้งของ RT และ / หรือขั้นตอนวิธี PCR มันเป็นสิ่งสำคัญในการประเมินการปรากฏตัวของสารยับยั้งการใด ๆ ของกิจกรรมโพลิเมอร์ใน RT และวิธี PCR นี่คือความสำเร็จได้ง่ายที่สุดโดยใช้การอ้างอิง RT-PCR ทดสอบซึ่งอาร์เอ็นเอของกลุ่มตัวอย่างมีการเพิ่มและการวัดการเปลี่ยนแปลงในกะรัต (สมิ ธ et al.
2003) ประการที่สามมันเป็นสิ่งสำคัญที่จะใช้กลยุทธ์การฟื้นฟูที่จะควบคุมปริมาณของวัสดุเริ่มต้นการเปลี่ยนแปลงของประสิทธิภาพการใช้เครื่องขยายเสียงและความแตกต่าง
ระหว่างกลุ่มตัวอย่าง