Adenine nucleotide measurement (ATP

Adenine nucleotide measurement (ATP/ADP/AMP)
ATP, ADP and AMP levels were measured by
HPLC. For adenine nucleotide extraction, after one rinse
in cold PBS, 0.5 ml PBS and 0.5 ml perchloric acid/
EDTA were added to each dish. Cells were scraped from
the dishes, placed in 1 ml micro-centrifuge tubes and
centrifuged for 2 minutes at 14,000 × g. Pellets were then
re-suspended in 50 μl of 1 M NaOH and later used for
protein quantification by the BCA protein assay (23227,
Thermo Scientific; Rockford, IL, USA). The supernatant
was neutralized with 3 M KOH in 1.5 M Tris and
centrifuged again. The supernatant was again collected
and stored at –80°C until analyzed by reverse-phase high
performance liquid chromatography. The chromatographic
apparatus was a Beckman-System Gold, consisting of a
126 Binary Pump Model and a 166 Variable UV detector,
controlled by computer. The detection wavelength was 254 nm, and the column was a Lichrospher 100RP-18
from Merck (Darmstadt, Germany). An isocratic elution
with 100 mM phosphate buffer (KH2PO4), pH 6.5 and 1%
methanol was performed with a flow rate of 1 ml/min. The
time required for each analysis was 5 minutes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัดนิวคลีโอไทด์ adenine (ATP/ADP/AMP)มีวัดระดับ ATP, ADP และ AMP โดยHPLC สำหรับแยกนิวคลีโอไทด์ adenine หลังจากล้างหนึ่งใน PBS เย็น PBS 0.5 ml และกรด perchloric 0.5 ml /EDTA ที่เพิ่มแต่ละจาน มีขูดเซลล์จากอาหาร วางท่อเครื่องหมุนเหวี่ยงไมโคร 1 ml และcentrifuged นาที 2 ที่ซื้อ 14000 กรัมขี้ได้แล้วหยุดชั่วคราวอีกครั้งใน 50 μl ของ 1 M NaOH และใช้สำหรับภายหลังโปรตีนนับ โดยการวิเคราะห์โปรตีนของ BCA (23227วิทยาศาสตร์ เทอร์โม ร็อคฟอร์ด IL สหรัฐอเมริกา) Supernatantมี neutralized เมตร 3 เกาะในทริสเรทติ้ง 1.5 M และcentrifuged อีก Supernatant ถูกรวบรวมอีกครั้งและเก็บไว้ที่ –80 ° C จนกว่าจะวิเคราะห์ตามขั้นตอนย้อนกลับสูงประสิทธิภาพของเหลว chromatography การ chromatographicเครื่องเป็นระบบ Beckman ทอง ประกอบด้วยการปั๊มรุ่นไบนารี 126 และแปร UV ที่ 166 จับควบคุม โดยคอมพิวเตอร์ ความยาวคลื่นตรวจจับมี 254 nm คอลัมน์ไม่มี Lichrospher 100RP-18จากเมอร์ค (ดาร์มส เยอรมนี) การ elution isocratic คิดมีบัฟเฟอร์ 100 มม.ฟอสเฟต (KH2PO4), pH 6.5 และ 1%เมทานอลทำ ด้วยอัตราไหล 1 มิลลิลิตร/นาทีเวลาที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์แต่ละ 5 นาทีได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

adenine วัดเบื่อหน่าย (ATP / ADP / AMP)
เอทีพี ADP และระดับแอมป์ถูกวัดโดย
วิธี HPLC สำหรับการสกัดเบื่อหน่าย adenine หลังจากล้างหนึ่ง
ในพีบีเอสเย็น 0.5 มล. พีบีเอสและ 0.5 มล. กรดเปอร์คลอริก /
EDTA ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละจาน เซลล์ที่ถูกคัดลอกมาจาก
อาหารที่วางไว้ใน 1 มิลลิลิตรหลอดไมโคร centrifuge และ
ปั่น 2 นาทีที่ 14,000 ×กรัม เม็ดจากนั้นก็
กลับมาที่ลอยอยู่ใน 50 ไมโครลิตร 1 M NaOH และนำมาใช้สำหรับ
ปริมาณโปรตีนโดยการทดสอบโปรตีน BCA (23227,
เทอร์โมวิทยาศาสตร์; ฟอร์ด, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) ใส
ถูกเป็นกลาง 3 M KOH ใน 1.5 M Tris และ
หมุนเหวี่ยงอีกครั้ง ใสถูกเก็บรวบรวมอีกครั้ง
และเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนวิเคราะห์โดยเฟสกลับสูง
ของเหลว chromatography ประสิทธิภาพ โครมา
เป็นเครื่องทองเบคค์ระบบประกอบด้วย
ปั๊มไบนารีรุ่น 126 และ 166 เครื่องตรวจจับรังสียูวีตัวแปร
ควบคุมด้วยคอมพิวเตอร์ การตรวจสอบเป็นความยาวคลื่น 254 นาโนเมตรและมีคอลัมน์เป็น LiChrospher 100RP-18
จากเมอร์ (Darmstadt, Germany) ชะ isocratic
100 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (KH2PO4), พีเอช 6.5 และ 1%
เมทานอลได้ดำเนินการกับอัตราการไหล 1 มล. / นาที
เวลาที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์แต่ละ 5 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัดสารอัลคาลอยด์ ( ATP ADP / เบส / แอมป์ )
ATP ADP ) , และระดับวัดจาก
4 . สำหรับเบสและการสกัดหลังจาก
ล้างหนึ่งใน PBS เย็น 0.5 ml PBS และ 0.5 มล. เปอร์คลอริกแอซิด /
EDTA ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละจาน เซลล์ถูกขูด
อาหารที่วางไว้ใน 1 มิลลิลิตรไมโครขายขาดและ
ไฟฟ้าสำหรับ 2 นาทีที่ 14 ×กรัมเม็ดแล้ว
Re μแขวนลอยใน 50 ลิตร 1 M NaOH และต่อมาใช้
โปรตีนปริมาณโปรตีนโดย BCA assay ( 23227
, เทอร์โมวิทยาศาสตร์ ; Rockford , IL , USA ) และน่าน
3 M อยู่กลางเกาะและ 1.5 เมตรโดย
ไฟฟ้าอีกครั้ง การรวบรวมและนำกลับมาเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 80 องศา )
c จนของเหลวโครมาโทกราฟีสมรรถนะสูงแบบย้อนกลับ
เฟส และ
อุปกรณ์ระบบเบคทองประกอบด้วย
126 ไบนารีและ 166 ปั๊มรูปแบบตัวแปร UV เครื่อง
ควบคุมโดยคอมพิวเตอร์ การตรวจหาความยาวคลื่น 254 นาโนเมตรและมี , คอลัมน์เป็น lichrospher 100rp-18
จากเมอร์ค ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) แบบ Isocratic
( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 100 มม. ( kh2po4 ) , pH 6.5 และ 1 %
เมทานอลได้ ด้วยอัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาที
เวลาที่ต้องใช้สำหรับแต่ละกลุ่ม 5 นาที