required, taking care to monitor th

required, taking care to monitor the exact amount of each internal
standard added to each sample.
A system suitability solution was prepared by mixing 10 mL
retinyl propionate, 10 mL retinyl acetate, 10 mL retinyl palmitate,
10 mL of a-tocopheryl propionate, 10 mL a-tocopheryl acetate,
5mL of apo-ester and 5 mL b-carotene stock solutions, to ensure
optimal HPLC performance.
2.4. Extraction
20.0 g of milk powder or infant formula was accurately weighed
into a 200 mL beaker and 80.0 g warm water (40 C) added. The
mixture was stirred to dissolve the powder and 5.0 g of reconstituted
sample (equivalent to 1.0 g powder) weighed into a 50 mL
polypropylene centrifuge tube. In the case of liquid milk or
ready-to-feed formulations, 5.0 g was used and treated the same
way.
5 mL of 0.1 M Tris.HCl buffer, pH 8 was added to the centrifuge
tube followed by 20 lL thermostable protease (Megazyme, activity
>300 units/mL) and incubated at 50 ± 3 C for 30 min with occasional
mixing. After cooling, 200 lL of mixed internal standard
solution was accurately added, followed by 20 mL hexane:ethanol
mixture (50:50) and mixed for one minute by vortex or shaking.
The extraction was completed by adding 5 mL saturated sodium
chloride and vortex mixing or shaking again for one minute.
Phase separation was continued by standing in the dark for
30–60 min until complete, otherwise centrifuged for 10 min at
350 rcf. The upper hexane layer was filtered through a 0.45 lm
nylon filter and 2 mL collected in an amber crimp-topped HPLC
vial.
2.5. Chromatography
Sample extracts (10 lL) were injected into the HPLC with the
eluent monitored simultaneously by FLD and UVD. FLD gain settings
were adjusted as required to keep peaks on scale.
The usual flow-rate was 1.0 mL/min with the 3 lm,
150  4.6 mm ID, column, kept at 25 C, the low viscosity of hexane
producing minimal back-pressure. The flow was raised to
2 mL/min after the elution of the last peak of interest
(a-tocopheryl acetate) and continued for the duration of the chromatogram
to elute lipids in readiness for the next injection. Mobile
phase recycling was implemented in order to conserve solvent.
2.6. Calculations
The concentrations of each internal standard in the mixed standard
were calculated from their concentrations, as determined by
Eqs. (1)-(3) (in IU/mL, mg/mL or lg/mL, as stated), multiplied by
their proportions in the mixed standard (0.40 for vitamins A and
E or 0.20 for b-apo-Ester). The amount of each internal standard
added to the samples was calculated by multiplication with
0.2 mL, the typical volume added.
This data was used to calculate the vitamin concentrations in
reconstituted and liquid samples according to Eqs. (4), (5) and (6):
Vitamin A esters; IU=100 g¼ASMP A propionate added ðIUÞ100recon
AIS W ðgÞRF
ð4Þ
Vitamin E acetate; mg=100 g¼ASMP E propionate added ðmgÞ100recon
AIS W ðgÞRF
ð5Þ
b-Carotene; lg=100 g¼ASMP apo-ester added ðlgÞ100recon
AIS W ðgÞRF
ð6Þ

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำเป็น ดูแลการตรวจสอบยอดเงินแน่นอนภายในแต่ละมาตรฐานที่เพิ่มแต่ละตัวอย่างโซลูชันระบบความเหมาะสมถูกเตรียม โดยผสม 10 mLretinyl propionate, acetate retinyl 10 mL, 10 mL retinyl palmitate10 mL ของเป็นหน่วยสากล propionate, 10 mL เป็นหน่วยสากล acetate5mL 5 mL และอาโปเอสบีแคโรทีนหุ้นโซลูชั่น เพื่อให้แน่ใจประสิทธิภาพสูงสุดของ HPLC2.4 การแยก20.0 g ของนมผงสูตรทารกมีน้ำหนักถูกต้องเป็นแบบ 200 mL บีกเกอร์และ 80.0 g น้ำอุ่น (40 C) เพิ่ม ที่มีกวนส่วนผสมให้ละลายผง และ 5.0 g ของ reconstitutedอย่างหนักเป็น 50 มล (เทียบเท่ากับ 1.0 g ผง)เครื่องหมุนเหวี่ยง polypropylene หลอด ในกรณีที่นมของเหลว หรือพร้อมอาหารสูตร 5.0 g ใช้ และถือว่าเหมือนกันวิธีการ5 mL ของบัฟเฟอร์ 0.1 M Tris.HCl, pH 8 ถูกเพิ่มลงในเครื่องหมุนเหวี่ยงหลอดตาม ด้วย 20 จะ thermostable รติเอส (Megazyme กิจกรรม> 300 หน่วย/มล) และ incubated ที่ 50 ± 3 C สำหรับ 30 นาทีด้วยเป็นครั้งคราวผสม หลังจากทำความเย็น 200 จะมาตรฐานผสมภายในแก้ปัญหาได้อย่างถูกต้องเพิ่ม ตาม ด้วย 20 mL เฮกเซน: เอทานอลส่วนผสม (คนละครึ่ง) และแบบผสมหนึ่งนาที โดย vortex หรือสั่นสกัดเสร็จ โดยการเพิ่มโซเดียม 5 mL ที่อิ่มตัวคลอไรด์และ vortex ผสม หรือสั่นอีกหนึ่งนาทีแยกขั้นตอนได้อย่างต่อเนื่อง โดยยืนในมืดสำหรับ30 – 60 นาทีจนกระทั่งเสร็จสมบูรณ์ มิฉะนั้น centrifuged สำหรับ 10 นาทีที่350 rcf ชั้นบนโพลีถูกกรองผ่าน 0.45 lmกรองไนลอนและ 2 mL เก็บในแอมเบอร์ใจคับราด HPLCคอนแทค2.5. chromatographyตัวอย่างบางส่วน (10 จะ) ถูกฉีดเข้าไปใน HPLC กับการตรวจสอบกันทาง FLD UVD eluent การตั้งค่ากำไร FLDได้ปรับปรุงเป็นต้องรักษายอดในระดับอัตราไหลที่ปกติถูก 1.0 mL/min 3 lmรหัส 150 4.6 มม. คอลัมน์ เก็บที่ 25 C ความหนืดต่ำของเฮกเซนผลิตดันกลับน้อยที่สุด ขั้นตอนการขึ้นไป2 mL/min หลังจาก elution ของพีคสุดท้ายน่าสนใจ(เป็นหน่วยสากล acetate) และต่อในระยะเวลา chromatogramการ elute โครงการในความพร้อมสำหรับการฉีดต่อไป โทรศัพท์มือถือขั้นตอนการรีไซเคิลนำมาใช้เพื่อรักษาตัวทำละลาย2.6 การคำนวณความเข้มข้นของแต่ละมาตรฐานภายในห้องผสมคำนวณได้จากความเข้มข้นของพวกเขา เป็นไปตามEqs (1)-(3) (ใน IU/mL, mg/mL หรือ lg/mL ตามที่ระบุไว้), คูณสัดส่วนของพวกเขาในห้องผสม (0.40 สำหรับวิตามิน A และE หรือ 0.20 สำหรับบีอาโปเอส) ยอดเงินของแต่ละมาตรฐานภายในเพิ่มตัวอย่างคำนวณ โดยคูณด้วย0.2 mL เพิ่มระดับเสียงโดยทั่วไปข้อมูลนี้ถูกใช้เพื่อคำนวณความเข้มข้นของวิตามินในตัวอย่าง reconstituted และของเหลวตาม Eqs (4), (5) และ (6):วิตามินเอ esters IU = 100 g¼ASMP A propionate เพิ่มกระทบ 100 ðIUÞเอไอเอส W ðgÞ RFð4ÞVitamin E acetate mg = 100 g¼ASMP E propionate เพิ่มกระทบ 100 ðmgÞเอไอเอส W ðgÞ RFð5Þb-แคโรทีน lg = 100 g¼ASMP อาโปเอสเพิ่มกระทบ 100 ðlgÞเอไอเอส W ðgÞ RFð6Þ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จำเป็นต้องมีการดูแลในการตรวจสอบจำนวนเงินที่แน่นอนของแต่ละภายในมาตรฐานเพิ่มเข้าไปในแต่ละตัวอย่าง.
แก้ปัญหาระบบความเหมาะสมได้รับการจัดทำขึ้นโดยการผสม 10 มิลลิลิตร
propionate retinyl 10 มิลลิลิตร acetate retinyl, palmitate 10 มิลลิลิตร retinyl,
10 มิลลิลิตร propionate A-tocopheryl 10 มิลลิลิตรแบบอะซิเตทโทโคเฟอริ,
5ml ของ APO-เอสเตอร์และ 5
มิลลิลิตรแก้ปัญหาสต็อกบีแคโรทีนเพื่อให้แน่ใจว่าผลการดำเนินงานที่ดีที่สุดHPLC.
2.4 สกัด
20.0
กรัมนมผงสูตรสำหรับทารกหรือได้รับการชั่งน้ำหนักอย่างถูกต้องลงในบีกเกอร์ขนาด200 มิลลิลิตรและ 80.0 กรัมน้ำอุ่น (40 องศาเซลเซียส) เพิ่ม
ส่วนผสมถูกกวนให้ละลายผงและ 5.0
กรัมสร้างตัวอย่าง(เทียบเท่า 1.0 กรัมผง) ชั่งน้ำหนักเป็น 50
มิลลิลิตรโพรพิลีนหลอดหมุนเหวี่ยง ในกรณีของนมหรือของเหลวสูตรพร้อมให้อาหาร 5.0 กรัมถูกนำมาใช้และรับการรักษาที่เหมือนกันวิธี. 5 มิลลิลิตร 0.1 บัฟเฟอร์ M Tris.HCl ค่า pH 8 ได้ถูกเพิ่มเข้าไปแปะหลอดตามด้วย20 จะน้ำย่อยร้อน (Megazyme กิจกรรม> 300 หน่วย / มิลลิลิตร) และบ่มที่ 50 ± 3 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีเป็นครั้งคราวที่มีการผสม หลังจากที่ระบายความร้อน 200 LL มาตรฐานผสมภายในทางออกที่ถูกเพิ่มเข้ามาอย่างถูกต้องตามด้วยเฮกเซนมิลลิลิตร20: เอทานอล. ผสม (50:50) และผสมเป็นเวลาหนึ่งนาทีโดยกระแสน้ำวนหรือสั่นสกัดเสร็จสมบูรณ์โดยการเพิ่ม5 มิลลิลิตรอิ่มตัวโซเดียมคลอไรด์และน้ำวนผสมหรือเขย่าอีกครั้งเป็นเวลาหนึ่งนาที. ระยะที่แยกได้อย่างต่อเนื่องโดยยืนอยู่ในที่มืดเป็นเวลา30-60 นาทีจนเสร็จสมบูรณ์ปั่นเป็นอย่างอื่นเป็นเวลา 10 นาทีที่? 350 RCF ชั้นบนเฮกเซนถูกกรองผ่าน 0.45 ไมครอนกรองไนลอนและ2 มิลลิลิตรเก็บรวบรวมในสีเหลืองอำพัน HPLC จีบราดขวด. 2.5 โครมาโตสารสกัดจากตัวอย่าง (10 LL) ถูกฉีดเข้าไปใน HPLC ได้ด้วยตัวชะตรวจสอบไปพร้อมๆ กันโดย FLD และ UVD การตั้งค่า FLD กำไรมีการปรับตามความจำเป็นเพื่อให้ยอดในระดับ. ปกติอัตราการไหลเป็น 1.0 มิลลิลิตร / นาทีกับ 3 LM, 150? 4.6 มม ID คอลัมน์เก็บไว้ที่ 25 องศาเซลเซียส, ความหนืดต่ำของเฮกเซนผลิตแรงดันย้อนกลับน้อยที่สุด การไหลถูกยกขึ้นไป2 มิลลิลิตร / นาทีหลังจากชะของยอดล่าสุดของดอกเบี้ย(A-acetate โทโคเฟอริ) และต่อเนื่องในช่วงระยะเวลาของ chromatogram ที่จะชะไขมันในการเตรียมความพร้อมสำหรับการฉีดต่อไป มือถือรีไซเคิลขั้นตอนได้ดำเนินการในการสั่งซื้อเพื่อการอนุรักษ์ตัวทำละลาย. 2.6 การคำนวณความเข้มข้นของแต่ละมาตรฐานภายในในมาตรฐานผสมจะถูกคำนวณจากความเข้มข้นของพวกเขาตามที่กำหนดโดยEQS (1) - (3) (ใน IU / mL มิลลิกรัม / มิลลิลิตรหรือ LG / มิลลิลิตรตามที่ระบุไว้) คูณด้วยสัดส่วนของพวกเขาในมาตรฐานผสม(0.40 วิตามิน A และE หรือ 0.20 สำหรับ B-APO-Ester) จำนวนเงินของแต่ละมาตรฐานภายในเพิ่มให้กับกลุ่มตัวอย่างที่คำนวณได้จากการคูณด้วย0.2 มิลลิลิตรปริมาณทั่วไปเพิ่ม. ข้อมูลนี้ถูกใช้ในการคำนวณความเข้มข้นของวิตามินในกลุ่มตัวอย่างที่สร้างขึ้นและของเหลวตาม EQS (4) (5) และ (6): เอสเทอวิตามิน; ? IU = 100 g¼ASMP propionate เพิ่มðIUÞ 100 ลาดตระเวน? เอไอเอส W ðgÞ RF? ð4Þ acetate วิตามินอี; ? = 100 มก. g¼ASMP E propionate เพิ่มðmgÞ 100 ลาดตระเวน? เอไอเอส W ðgÞ RF? ð5Þขแคโรทีน; LG = 100 g¼ASMP? APO-เอสเตอร์เพิ่มðlgÞ? 100? ลาดตระเวนเอไอเอส? W ðgÞ? RF ð6Þ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต้องดูแลเพื่อตรวจสอบจำนวนเงินที่แน่นอนของแต่ละมาตรฐานเพิ่มแต่ละตัวอย่างภายใน
.
ระบบความเหมาะสม โซลูชั่น เตรียมโดยการผสม 10 propionate เรติน มล.
, เรติน อะซิเตท 10 ml Retinyl Palmitate 10 ml
10 มิลลิลิตร a-tocopheryl propionate a-tocopheryl อะซิเตท 10 ml
5ml ของเอสเทอร์ อาโป และ 5 มิลลิลิตร - หุ้นโซลูชั่น เพื่อให้แน่ใจว่าประสิทธิภาพสูงที่สุด
.
2.4 . การสกัด
200 กรัมของผงนมหรือสูตรทารกถูกแม่นหนัก
เป็น 200 ml บีกเกอร์และ 80.0 กรัมน้ำอุ่น (  40  C ) เพิ่ม
ส่วนผสมถูกกวนให้ละลายผงและ 5.0 กรัมธรรมชาติ
ตัวอย่าง ( เท่ากับ 1.0 กรัมผง ) ชั่งเป็น 50 มล.
Polypropylene centrifuge หลอด ในกรณีของนมเหลวหรือ
พร้อมที่จะป้อนสูตร , 5.0 กรัม และใช้รักษาเหมือนกัน
.
5 ml 0.1 M ทริสไฮโดรคลอไรด์บัฟเฟอร์ pH 8 ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในการหมุนเหวี่ยง
หลอดตามด้วย 20 จะสร้างสารโปรตีน ( megazyme กิจกรรม
> 300 หน่วย / มิลลิลิตร ) และบ่มที่อุณหภูมิ 50 ± 3  C นาน 30 นาทีกับ
ผสมเป็นครั้งคราว หลังจากเย็น 200 จะผสมภายในมาตรฐาน
โซลูชั่นเพิ่มได้อย่างถูกต้อง ตามด้วย 20 ml เฮกเซนผสมเอทานอล
( 50 : 50 ) และผสมเป็นเวลาหนึ่งนาที โดยวอร์
หรือสั่นการสกัดแล้วเสร็จ โดยการเพิ่ม 5 มิลลิลิตร ไขมันอิ่มตัวและโซเดียมคลอไรด์
vortex ผสมหรือสั่นอีกนาทีเดียว
เฟสเป็นอย่างต่อเนื่องโดยยืนอยู่ในที่มืด
30 – 60 นาทีจนกว่าจะเสร็จสมบูรณ์ มิฉะนั้นไฟฟ้า 10 นาที
 350 rcf . ชั้นเฮกเซนบนถูกกรองผ่านแผ่นกรองไนลอน 0.45 LM
2 มิลลิลิตร และเก็บในขวดสีเหลืองจีบหน้า 2
.
2.5 โครมาโตกราฟี
ตัวอย่างสารสกัด ( 10 จะถูกฉีดเข้าไปใน HPLC ด้วย
ตัวตรวจสอบพร้อมกันโดย FLD และโปรเซสเซอร์ . ได้รับการปรับข้อมูลเป็น FLD
ต้องรักษายอดในระดับ อัตราการไหลปกติ
เป็น 1.0 มล. / นาที กับ 3 อิม
 4.6 มิลลิเมตร 150 , รหัส , คอลัมน์ , เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 25  C , ความหนืดต่ำของเฮกเซน
การผลิตน้อยที่สุด กลับมากดดัน การไหลเพิ่มขึ้น

2 มล. / นาทีหลังจากใช้ ยอดล่าสุดของดอกเบี้ย
( a-tocopheryl acetate ) และอย่างต่อเนื่องสำหรับระยะเวลาของการปลูกถ่ายไต
เพื่อ elute ไขมันในความพร้อมสำหรับการฉีดต่อไป ขั้นตอนการรีไซเคิลโทรศัพท์มือถือ
ถูกนำมาใช้เพื่อรักษาตัวทำละลาย .
2.6 การคำนวณความเข้มข้นของแต่ละภายใน

ผสมมาตรฐานมาตรฐานคำนวณจากความเข้มข้นของพวกเขาตามที่กำหนดโดย
EQS . ( 1 ) - ( 3 ) ( IU / ml mg / ml หรือ LG / ml , ตามที่ระบุไว้ ) , คูณ
สัดส่วนของพวกเขาในมาตรฐานผสม ( 0.40 สำหรับวิตามิน A และ E
หรือ 0.20 สำหรับ b-apo-ester ) ยอดเงินของแต่ละภายในมาตรฐาน
เพิ่มจำนวนที่คำนวณโดยการคูณด้วยปริมาณ 0.2 มิลลิลิตร
,
ปกติเพิ่ม ข้อมูลนี้ถูกใช้เพื่อคำนวณความเข้มข้น
วิตามินสร้างและเก็บตัวอย่างของเหลวจาก EQS . ( 4 ) , ( 5 ) และ ( 6 ) :
วิตามินเอสเทอร์ ; IU = 100 กรัม¼ asmp  เป็น propionate เพิ่มð IU Þ  100  Recon
AIS  W ðกรัมÞ  RF 4 Þ

ð Acetate วิตามินอี ; มก. = 100 กรัม¼ asmp  E propionate เพิ่มðมก. Þ  100  Recon
AIS  W ðกรัมÞ  RF ð 5 Þ
-
; LG = 100 กรัม¼ asmp  โพลิเอสเทอร์เพิ่มð LG Þ  100  Recon
AIS  W ðกรัมÞ  RF
ð 6 Þ