A patented chlorothalonil hydrolyti

A patented chlorothalonil hydrolytic dehalogenase (Chd) gene
(Wang, Li, Li, & Jiang, 2010) was cloned into the vector pP43NMK
under the control of P43 promoter and NprB signal peptideencoding
sequence to achieve its extracellularly expressed protein
in a protease-deficient strain B. subtilis WB800 (Meng et al.,
2015). Then, submerged fermentation was performed in 250-mL
Erlenmeyer flasks with a 30-mL working volume. The constructed
recombinant strain was cultured at 37 C, 175 rpm for 24 h in
medium of 25 g L
1 tryptone, 31.2 g L
1 yeast extract, 50 g L
1
glucose, 3 g L
1 K2HPO4,3gL
1 NaCl, 3 g L
1 MgSO4, 50 mg L
1
kanamycin, pH 7.0 and 10% (v/v) inoculum, 20 mg L
1 chlorothalonil
was added into the medium at 12 h.
After fermentation, the broth was centrifuged at 8000 rpm for
10 min to achieve solideliquid separation. The supernatant obtained
after centrifugation was used as crude enzyme and its activity
was assayed as previously described (Meng et al., 2015). One
unit of Chd activity was defined as the amount of enzyme needed to
decrease 1 mmol chlorothalonil per minute under optimal
conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การจดสิทธิบัตร chlorothalonil dehalogenase ไฮโดรไลติก (เด็ฏ) ยีน(วัง Li, Li และ เจียง 2010) เป็นการลอกแบบลงใน pP43NMK เวกเตอร์ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ P43 และ NprB สัญญาณ peptideencodingลำดับเพื่อให้ได้โปรตีนที่แสดง extracellularlyในสายพันธุ์รติเอสขาด B. subtilis WB800 (Meng et al.,2015) . จากนั้น ทำหมักจมใน 250 มิลลิลิตรErlenmeyer ขวด มีปริมาณ 30 มล.ทำ ที่สร้างขึ้นสายพันธุ์ recombinant เป็นอ่างที่ 37 C, 175 รอบต่อนาทีตลอด 24 ชั่วโมงในกลางของ tryptone L 1 25 กรัม 31.2 กรัมยีสต์ L 1 สารสกัดจาก 50 g L 1กลูโคส 3 g L 1 K2HPO4, 3gL NaCl 1, 3 g L 1 MgSO4, L 1 50 มิลลิกรัมกานามัยซิน ค่า pH 7.0 และ 10% (v/v) inoculum, 20 มิลลิกรัม chlorothalonil L 1ถูกเพิ่มลงในกลางที่ 12 ชมหลังจากหมัก น้ำซุปถูกเหวี่ยงที่ 8000 รอบต่อนาที10 นาทีให้แยก solideliquid Supernatant ที่ได้รับหลังจากที่ใช้หมุนเหวี่ยงเป็นเอนไซม์ดิบและกิจกรรมของถูก assayed เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Meng et al. 2015) อย่างใดอย่างหนึ่งหน่วยของเด็ฏกิจกรรมถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการลด 1 mmol chlorothalonil ต่อนาทีภายใต้ที่ดีที่สุดเงื่อนไขการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จดสิทธิบัตร chlorothalonil ย่อยสลาย dehalogenase (Chd) ยีน
(วังหลี่หลี่ & เจียง 2010) เป็นโคลนเข้าไปใน pP43NMK เวกเตอร์
ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ P43 และ NprB สัญญาณ peptideencoding
ลำดับเพื่อให้บรรลุโปรตีนของ extracellularly
ในสายพันธุ์น้ำย่อยขาด B. subtilis WB800 (เม้ง et al.,
2015) จากนั้นจมอยู่ใต้น้ำหมักที่ได้ดำเนินการใน 250 มิลลิลิตร
ขวด Erlenmeyer มีปริมาณการทำงาน 30 มิลลิลิตร สร้าง
ความเครียด recombinant เป็นที่เพาะเลี้ยงที่ 37 C, 175 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 24 ชั่วโมงใน
ขนาดกลาง 25 กรัม L? 1 Tryptone, 31.2 กรัม L? สารสกัดจากยีสต์ 1 50 กรัม L? 1
กลูโคส 3 G L? 1 K2HPO4,3gL 1 โซเดียมคลอไรด์ 3 G L? 1 MgSO4 50 mg L? 1
กานามัยซิพีเอช 7.0 และ 10% (v / v) หัวเชื้อ, 20 mg L? 1 chlorothalonil
ถูกเพิ่มเข้าไปในกลาง 12 ชม.
หลังจากการหมักน้ำซุปที่ถูกปั่น ที่ 8000 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อให้เกิดการแยก solideliquid สารละลายที่ได้รับ
หลังจากการหมุนเหวี่ยงถูกใช้เป็นเอนไซม์และกิจกรรม
ได้รับการวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (เม้ง et al., 2015) หนึ่ง
หน่วยของกิจกรรม Chd ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการ
ลดลง 1 มิลลิโมล chlorothalonil ต่อนาทีภายใต้การที่ดีที่สุด
เงื่อนไข