he WAT SVF cells were isolated usin

he WAT SVF cells were isolated using collagenase digestion followed by density separation (35, 36). Briefly, forelimb subcutaneous WAT depots were collected and minced into 2- to 5-mm2 pieces. WAT pieces were then digested in 1.5 mg/ml collagenase at 37°C for 1.5–2 h. The digestions were stopped with DMEM containing 10% FBS, filtered (100 μm), and centrifuged at 450 g for 5 min. The freshly isolated SVF cells from the WAT were seeded and cultured in growth medium containing DMEM, 20% FBS, and 1% penicillin/streptomycin at 37°C with 5% CO2 for 3 d, followed by feeding with fresh medium every 2 d. On confluence, the cells were induced with induction medium containing DMEM, 10% FBS, 2.85 μM insulin, 0.3 μM dexamethasone, and 0.63 mM 3-isobutyl-methylxanthine (IBMX) for 3 d and then differentiated in differentiation medium containing DMEM, 200 nM insulin, and 10 nM T3 for 4 d until adipocytes matured. For fibronectin type III domain containing 5 (Fndc5) treatment, SVF cells were induced to differentiate, and Fndc5 peptide (ab117436, 20 nM; Abcam, Cambridge, MA, USA) was added in the differentiation medium during the last 2 d. For the CM treatment, SVF cells were induced to differentiate with 50% CM (1:1 CM:fresh induction medium) for 3 d and then maturated in differentiation medium containing 50% CM for 4 d until adipocytes matured. For the Fndc5 antibody-neutralizing experiments, 1.25 μg/ml of Fndc5 antibody (ab93373; Abcam) was used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เขาวัด SVF เซลล์ถูกแยกโดยใช้ collagenase ย่อยตาม ด้วยการแยกความหนาแน่น (35, 36) สั้น ๆ forelimb ใต้วัดคลังได้เก็บรวบรวม และสับเป็นชิ้น 2 กับ 5 mm2 วัดชิ้นได้แล้วย่อยสลายใน collagenase 1.5 mg/ml ที่อุณหภูมิ 37° C สำหรับ 1.5 – 2 ชม Digestions ที่ได้ถูกหยุดลง ด้วย DMEM ที่ประกอบด้วย 10% FBS กรอง (100 ไมครอน), และเหวี่ยงที่ 450 กรัมสำหรับ 5 นาที เซลล์ SVF สดแยกจากวัดถูกเตรียม และเพาะเลี้ยงในการเจริญเติบโตที่ประกอบด้วย DMEM, 20% FBS และราคายาเพนนิซิลลิน 1% ต่อ streptomycin ที่ 37° C กับ 5% CO2 สำหรับ 3 d ตามด้วยนมกับกลางสดทุก d 2 บนจุดบรรจบ เซลล์เหนี่ยวนำ ด้วยสื่อเหนี่ยวนำที่ประกอบด้วย DMEM, FBS, 2.85 ไมครอนอินซูลิน 0.3 ไมครอน dexamethasone และ 0.63 มม. 3-isobutyl-methylxanthine (IBMX) สำหรับ 3 d แล้ว ที่แตกต่างในความแตกต่างที่ประกอบด้วย DMEM, 200 nM อินซูลิน และ 10 nM ที่ T3 สำหรับ 4 d จนสุก adipocytes สำหรับ fibronectin ชนิด III โดเมนที่ประกอบด้วยการรักษา (Fndc5) 5 เซลล์ SVF นำแยกความแตกต่าง และเปปไทด์ Fndc5 (ab117436, 20 nM Abcam เคมบริดจ์ MA สหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่มในการสร้างความแตกต่างระหว่าง d 2 ครั้งสุดท้าย สำหรับการรักษา CM, SVF เซลล์นำไปแตกต่างกับ 50% ซม. (1:1 CM:fresh เหนี่ยวนำกลาง) สำหรับ 3 d และ maturated ในความแตกต่างที่ประกอบด้วย 50% แล้ว ซม.สำหรับ 4 d จนสุก adipocytes สำหรับ Fndc5 ขจัดแอนติบอดีทดลอง 1.25 ไมโครกรัม/มล.ของแอนติบอดี Fndc5 (ab93373 ใช้ Abcam)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์เขา WAT SVF ถูกแยกย่อยอาหารโดยใช้คอลลาตามด้วยการแยกความหนาแน่น (35, 36) สั้น ๆ , ขาคลังวัดใต้ผิวหนังถูกเก็บรวบรวมและสับออกเป็น 2 ชิ้นเล็กชิ้นน้อย 5 mm2 ชิ้น WAT ถูกย่อยแล้วใน 1.5 mg / คอลลา ml ที่ 37 ° C เป็นเวลา 1.5-2 ชั่วโมง ย่อยได้ถูกหยุดด้วย DMEM มี FBS 10% กรอง (100 ไมครอน) และหมุนเหวี่ยงที่ 450 กรัมเป็นเวลา 5 นาที ที่แยกเซลล์สดจากวัด SVF มีเมล็ดและเพาะเลี้ยงในอาหารที่มีการเจริญเติบโต DMEM, FBS 20% และ 1% penicillin / streptomycin ที่ 37 ° C มี 5% CO2 3 D ตามด้วยการให้อาหารที่มีขนาดกลางสดทุก 2 D บนจุดบรรจบเซลล์ที่ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดกับสื่อเหนี่ยวนำที่มี DMEM 10% FBS, 2.85 ไมครอนอินซูลิน 0.3 ไมครอน dexamethasone และ 0.63 มิลลิ 3 Isobutyl-methylxanthine (IBMX) 3 D และแล้วความแตกต่างในระดับปานกลางความแตกต่างที่มี DMEM 200 นาโนเมตร อินซูลินและ 10 นาโนเมตร T3 4 จนกว่า adipocytes ครบกำหนด สำหรับประเภท fibronectin โดเมน III มี 5 (Fndc5) การรักษาเซลล์ SVF ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดความแตกต่างและ Fndc5 เปปไทด์ (ab117436 20 นาโนเมตร; Abcam เคมบริดจ์, แมสซาชูเซต, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ถูกบันทึกอยู่ในสื่อความแตกต่างในช่วง 2 D สำหรับการรักษา CM เซลล์ SVF ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดความแตกต่างกับ CM 50% (1: 1 CM: สื่อเหนี่ยวนำสด) 3 D และ maturated ในสื่อที่มีความแตกต่าง CM 50% 4 จนกว่า adipocytes ครบกำหนดแล้ว สำหรับการทดลอง Fndc5 แอนติบอดี neutralizing 1.25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร Fndc5 แอนติบอดี (ab93373; Abcam) ถูกนำมาใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เขาวัด svf เซลล์แยกย่อยใช้คอลลาเจนตามแยกความหนาแน่น ( 35 , 36 ) สั้น ๆ , ลักลอบใต้ผิวหนัง วัดคลังเก็บและสับเป็น 2 - 5-mm2 ชิ้น วัดชิ้นก็ย่อยใน 1.5 มก. / มล. ที่อุณหภูมิ 37 องศา C คอลลาเจน 1.5 – 2 ชั่วโมง digestions ถูกหยุดด้วย dmem ที่มี 10% FBS , กรอง ( 100 μ m ) และที่ระดับ 450 กรัม สำหรับ 5 นาที svf เซลล์แยกสด ๆจากวัด เป็นเมล็ดที่เพาะเลี้ยงในอาหารที่มี dmem และการเจริญเติบโต , FBS 20% และ 1 % เพนนิซิลลิน / 37 ° C จังกับคาร์บอนไดออกไซด์ 5% 3 D ตามด้วยอาหารกลางใหม่ทุก 2 วันในบรรจบ เซลล์ที่ถูกชักนำด้วย induction medium ที่มี dmem 10% FBS 2.85 μ M อินซูลิน , 0.3 μ M เดกซาเมทาโซน และ 3-isobutyl-methylxanthine ( ibmx 0.63 มม. ) 3 D แล้ว ความแตกต่างในการสื่อที่มี dmem , 200 nm อินซูลิน และ 10 nm T3 D ได้ที่ 4 จนครบกําหนด สำหรับประเภทของไฟโบรเนกติน 3 โดเมนที่มี 5 ( fndc5 ) การรักษา svf เซลล์ถูกกระตุ้นให้แยกแยะ และ fndc5 เปปไทด์ ( ab117436 20 nm ; ABCAM Cambridge , MA , USA ) ถูกเพิ่มเข้ามาในการขนาดกลางในช่วง 2 วันสำหรับการรักษาเซนติเมตร svf cells ที่มีความแตกต่างกับ 50 ซม. ( 1 : 1 CM : สื่อชักนำสด ) 3 D และจากนั้นในการ maturated ขนาดกลางที่มีซม. 50% 4 D จนสุกได้ที่ . สำหรับ fndc5 neutralizing แอนติบอดี ( 1.25 μ g / ml fndc5 แอนติบอดี ( ab93373 ; ABCAM ) คือใช้