We perform structural and functiona

We perform structural and functional studies of PrtV . For this work, large quantities of pure and soluble protein are
needed. In this study, we address the difficulties of protein domain expression of the PrtV protease by applying a divide and conquer approach. Screening of domain boundaries for individual domains and combinations of domains was carried out, and constructs obtained were further screened for solubility and expression levels. Recombinant PrtV fragments were obtained for three constructs including the N-terminal domain (residues 23–103), the PKD1 domain (residues 755–839), and a longer 25 kDa construct containing part of the M6 domain and PKD1 (residues 581–839) (Fig. 1). The previously described purification procedure for the 81 kDa pro-protein was modified and improved to increase yield and
purity. Interestingly, proteolytic activity measurements of purified
domains suggest that the 37 kDa domain alone is sufficient for protein activity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราทำการศึกษาโครงสร้าง และหน้าที่ของ PrtV สำหรับงานนี้ มีจำนวนมากของโปรตีนบริสุทธิ์ และละลาย
จำ ในการศึกษานี้ เราความลำบากของโปรตีนค่าโดเมนของรติเอส PrtV โดยใช้การแบ่ง และวิธีพิชิต ทำการคัดกรองของขอบเขตของโดเมนสำหรับโดเมนแต่ละชุดของโดเมน และโครงสร้างที่ได้รับถูกฉายและการละลายระดับเพิ่มเติม บางส่วนของ PrtV recombinant ได้รับมาสำหรับสามโครงสร้างรวมถึงโดเมนเทอร์มินัล N (ตก 23 – 103), โดเมน PKD1 (ตก 755-839), และ kDa 25 ยาวการสร้างส่วนที่มีโดเมน M6 และ PKD1 (ตก 581-839) (Fig. 1) กระบวนการฟอกที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับ kDa 81 โปรตีนสนับสนุนถูกปรับเปลี่ยน และปรับปรุงเพื่อเพิ่มผลผลิต และ
ความบริสุทธิ์ เป็นเรื่องน่าสนใจ กิจกรรม proteolytic วัดบริสุทธิ์
โดเมนแนะนำว่า 37 kDa โดเมนเพียงอย่างเดียวเพียงพอสำหรับกิจกรรมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราดำเนินการศึกษาโครงสร้างและการทำงานของ PrtV สำหรับงานนี้จำนวนมากของโปรตีนที่ละลายน้ำบริสุทธิ์และถูก
ต้อง ในการศึกษานี้เราอยู่ในความยากลำบากของการแสดงออกของโปรตีนโดเมนของโปรติเอส PrtV โดยใช้การแบ่งและพิชิตวิธี การคัดกรองของขอบเขตโดเมนสำหรับโดเมนแต่ละบุคคลและการรวมกันของโดเมนถูกหามออกและสร้างได้ถูกคัดกรองเพิ่มเติมสำหรับการละลายและการแสดงออกในระดับ เศษ PrtV recombinant ที่ได้รับเป็นเวลาสามรวมทั้งสร้างโดเมน n-ขั้ว (ตกค้าง 23-103) โดเมน PKD1 (ตกค้าง 755-839) และ 25 กิโลดาลตันที่มีการสร้างเป็นส่วนหนึ่งของโดเมน M6 และ PKD1 (ตกค้าง 581-839 ) (รูปที่ 1) ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับ 81 กิโลดาลตันโปรโปรตีนมีการปรับเปลี่ยนและปรับปรุงเพื่อเพิ่มผลผลิตและ
ความบริสุทธิ์ ที่น่าสนใจการวัดกิจกรรมของโปรตีนบริสุทธิ์
โดเมนแนะนำว่า 37 กิโลดาลตันโดเมนเพียงอย่างเดียวไม่เพียงพอสำหรับกิจกรรมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราทำการศึกษาโครงสร้างและการทำงานของ prtv . งานนี้มีขนาดใหญ่ปริมาณของโปรตีนที่ละลายน้ำได้บริสุทธิ์ และมี
ต้องการ ในการศึกษานี้เราแก้ไขปัญหาของการแสดงออกของโปรตีนโดเมน prtv ติ การแบ่งและพิชิตการ การคัดเลือกขอบเขตโดเมนแต่ละโดเมนและโดเมนมีการรวมกันของ ,และโครงสร้างที่ได้เพิ่มเติมจากการละลายและระดับการแสดงออก รีคอมบิแนนท์ prtv เศษได้สามโครงสร้างรวมทั้งโดเมนถูก ( ตกค้าง 23 – 103 ) , PKD1 โดเมน ( ตกค้าง 755 – 839 ) และอีก 25 กิโลดาลตันสร้างที่ประกอบด้วยส่วนของ M6 โดเมนและ PKD1 ( ตกค้าง 581 – 839 ) ( รูปที่ 1 )ขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้การ 81 กิโล Pro โปรตีนดัดแปลงและปรับปรุงเพื่อเพิ่มผลผลิตและ
ความบริสุทธิ์ ทั้งนี้ กิจกรรม การวัดโปรตีนบริสุทธิ์
โดเมนชี้ให้เห็นว่า 37 kDa โดเมนอย่างเดียวก็เพียงพอสำหรับกิจกรรมของโปรตีน