2. Materials and methods2.1. Screen

2. Materials and methods
2.1. Screening of oleaginous yeasts
The waste samples were collected from soil and waste of palm oil mill and biodiesel plant in southern
region of Thailand. 5% of samples will be enriched in 25 mL YPD medium (yeast extract 10 g/L andpeptone 10 g/L) by using 40 g/L glucose or glycerol as a carbon source at acid pH (4.0) or neutral pH
(6.0) with 0.0001% chloramphenicol. Then 0.1 mL diluted culture was isolated on YPD agar medium
using spread-plate technique for 72 h at room temperature. Total yeast strains were stained with Sudan
black B technique and observed under a phase contrast microscope on oil immersion for the presence of
blue or greyish colored fat globules within the cell [7]. The yeast strains showing fat globules within the
cell were selected for further quantitative analysis. The yeast strains were precultured in inoculum
medium, and then 24 h old preculture were inoculated in 25 mL crude glycerol based (crude glycerol 100
g/L with corresponding glycerol concentration of 40 g/L, yeast extract 10 g/L and peptone 10 g/L, pH
6.0) at the C/N molar ratio of 7.4 and incubated for 72 h at room temperature with shaking at 140 rpm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การคัดกรองของ oleaginous yeastsตัวอย่างขยะรวบรวมจากดินและกากปาล์มน้ำมันไบโอดีเซลและโรงงานผลิตพืชภาคใต้ภาคของประเทศไทย 5% ของตัวอย่างจะอุดมไปในกลาง YPD 25 mL (10 g/L andpeptone สารสกัดจากยีสต์ 10 g/L) โดยใช้กลูโคส 40 g/L หรือกลีเซอรเป็นแหล่งคาร์บอนที่ค่า pH เป็นกลางหรือกรด pH (4.0)(6.0) กับ chloramphenicol มาก 0.0001% แล้ว 0.1 mL ผสมวัฒนธรรมถูกแยกต่างหากบนกลาง agar YPDการใช้เทคนิคการกระจายแผ่นสำหรับ h 72 ที่อุณหภูมิห้อง รวมยีสต์มีสีซูดานสีดำ B เทคนิค และสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์เปรียบระยะบนแช่น้ำมันสำหรับสถานะของสีฟ้าหรือ greyish สี globules ไขมันภายในเซลล์ [7] ยีสต์แสดง globules ไขมันภายในตัวเซลล์ที่ถูกเลือกสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ ยีสต์มี precultured ใน inoculumกลาง และ 24 h preculture เก่าถูก inoculated ในกลีเซอรดิบ 25 mL ตาม (ดิบกลีเซอร 100g/L กับกลีเซอรเข้มข้นที่สอดคล้องกันของ 40 g/L ยีสต์สกัด 10 g/L และ peptone 10 g/L ค่า pH6.0) ในอัตราส่วน C/N สบ 7.4 และ incubated สำหรับ h 72 ที่อุณหภูมิห้องด้วยการสั่นที่ 140 รอบต่อนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การคัดเลือกยีสต์ที่ผสมด้วยน้ำมัน
ของเสียโดยเก็บตัวอย่างจากดินและของเสียของโรงงานน้ำมันปาล์ม และน้ำมันพืชในภาคใต้
ภูมิภาคของประเทศไทย 5 % ของตัวอย่างจะร่ำรวยใน 25 มล. ypd ขนาดกลาง ( สารสกัดจากยีสต์ 10 กรัม / ลิตร andpeptone 10 กรัม / ลิตร ) 40 กรัม / ลิตร โดยการใช้กลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน หรือ กลีเซอรอลที่เป็นกรด ( pH 4.0 ) หรือ Ph เป็นกลาง
( 6.0 ) 0.0001 % ของส .แล้ว 0.1 มิลลิลิตร เจือจางวัฒนธรรมแยกบน
กลาง ypd ใช้จานวุ้นกระจายเทคนิค 72 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ยีสต์สายพันธุ์ทั้งหมดถูกย้อมด้วยสีดำซูดาน
เทคนิคและตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เฟสตรงกันข้ามน้ำมันแช่เพื่อการแสดงตนของ
สีฟ้าหรือสีเทาสีเม็ดไขมันภายในเซลล์ [ 7 ] ยีสต์สายพันธุ์ที่แสดงเม็ดไขมันภายใน
เซลล์ที่ถูกเลือกสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณเพิ่มเติม ยีสต์สายพันธุ์เชื้อ
1949 ในขนาดกลาง แล้ว 24 ชั่วโมงเก่าพันธุ์ปลูกเชื้อใน 25 ml ดิบ ( Crude กลีเซอรีนกลีเซอรอลจาก 100
g / L กับความเข้มข้นของกลีเซอรอลที่ 40 g / l , สารสกัดจากยีสต์ 10 กรัมต่อลิตร ตามลำดับ และ 10 กรัมต่อลิตรและ pH 6.0 ,
) C / N ที่ อัตราส่วนโดยโมลของ 74 และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 72 ชั่วโมงกับสั่นที่ 140 รอบต่อนาที