Screening and Identification of Cel

Screening and Identification of Cellulase Producers

Five microlitres of overnight grown culture was spot plated on CMC agar (0.2% NaNO3, 0.1% K2HPO4, 0.05% MgSO4, 0.05% KCl, 0.2% carboxymethylcellulose (CMC) sodium salt, 0.02% peptone, and 1.7% agar) (HiMedia, India). Plates incubated at 28ºC for 48 hours were flooded with 1% hexadecyltrimethyl ammonium bromide (HAB) for 30 to 40 minutes [6]. From cellulase-producing microorganisms, two potential bacterial strains RK3 (Gram +ve) and MN34 (Gram –ve) and one fungal strain RS2 were selected for identification and further studies. Genomic DNA from bacterial strains was isolated and amplified by using universal 16S rRNA primers [9], and fungal DNA was isolated and amplified by using internal transcribed spacer 1 (ITS 1) and internal transcribed spacer 4 (ITS 4) primers [15]. The amplified gene products were purified from agarose gel using Qiaquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Germany). Nucleotide sequencing of the genes was done by using Big Dye Terminator Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems) and 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystems). The BLASTN program (http://​www.​ncbi.​nlm.​nih.​gov/​BLAST/​; National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD) was used for homology searches with the standard program default.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คัดกรองและผลิตรหัส Cellulase

microlitres ห้าของแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์วัฒนธรรมปลูกถูกจุดชุบใน CMC agar (0.2% NaNO3, 0.1% K2HPO4, 0.05% MgSO4, 0.05% KCl เกลือโซเดียม carboxymethylcellulose (CMC) 0.2%, peptone 0.02% และ 1.7% agar) (HiMedia อินเดีย) แผ่น incubated ที่ 28ºC ภายใน 48 ชั่วโมงถูกน้ำท่วม ด้วย 1% hexadecyltrimethyl แอมโมเนียโบรไมด์ (ถล่ม) 30-40 นาที [6] จาก cellulase ผลิตจุลินทรีย์ สองอาจเกิดแบคทีเรียสายพันธุ์ RK3 (กรัม ve) และ MN34 (–ve กรัม) และต้องใช้เชื้อราหนึ่ง RS2 ถูกเลือกสำหรับการระบุ และศึกษาเพิ่มเติม Genomic DNA จากแบคทีเรียสายพันธุ์แยกต่างหาก และขยายโดยสากล 16S rRNA ไพรเมอร์ [9], และเชื้อราดีเอ็นเอแยกต่างหาก และขยาย โดยใช้เป็นตัวเว้นวรรคใช้ทับภายใน 1 (เป็น 1) และเป็นตัวเว้นวรรคใช้ทับภายใน 4 (เป็น 4) ไพรเมอร์ [15] ผลิตภัณฑ์ยีนเอาต์ได้บริสุทธิ์จากเจ agarose ใช้ Qiaquick เจแยกชุด (Qiagen เยอรมนี) ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนที่ถูกทำ โดยใช้ขนาดใหญ่ย้อมเทอร์มิเนเตอร์วงจรลำดับชุด (Biosystems ใช้) และวิเคราะห์พันธุกรรม 3130xl (Biosystems ใช้) โปรแกรม BLASTN (http:// www. ncbi. nlm. nih. gov ระเบิด / ศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ เบเทสดา MD แห่งชาติ) ที่ใช้สำหรับค้นหา homology ด้วยค่าเริ่มต้นโปรแกรมมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คัดกรองและการระบุตัวตนของ cellulase ผู้ผลิต

ห้า microlitres พักค้างคืนของวัฒนธรรมขึ้นเป็นที่เคลือบทองในเจ๋อหมิสาหร่ายทะเล( nano3 0.2% , 0.1% K 2 hpo4 , 0.05% mgso4 , 0.05% kcl , 0.2% carboxymethylcellulose (เจ๋อหมิ)เกลือโซเดียม, 0.02% เนื้อยุ่ยเมื่อถูกเพพซิน,และ 1.7% สาหร่ายทะเล)( himedia ,อินเดีย) แผ่นทำความร้อน incubated ใน C 28 ºC สำหรับ 48 ชั่วโมงมีน้ำท่วมพร้อมด้วย 1% hexadecyltrimethyl its ammonium ไม่น่าทึ่ง(ตัวเบียนฯลฯทํา)สำหรับ 30 ถึง 40 นาที[ 6 ]จากจุลชีพ cellulase - การผลิตทั้งสองเกิดจากเชื้อแบคทีเรียพันธุ์ที่อาจเกิดขึ้น RK 3 ( ve กรัม)และนาที 34 (กรัม - ve )และหนึ่งพอร์ต RS ความเมื่อยล้าเชื้อรา 2 คนที่เลือกสำหรับการระบุตัวตนและการศึกษาต่อไป ดีเอ็นเอ genomic จากความตึงเครียดเกิดจากเชื้อแบคทีเรียได้ถูกโดดเดี่ยวและแอมพลิฟายโดยการใช้อเนกประสงค์ 16 S rrna primers [ 9 ]และดีเอ็นเอเชื้อราก็ถูกแยกออกจากกันและแอมพลิฟายโดยการใช้ ภายใน ถอดสคริปต์ spacer graphic 1 ( 1 ของ)และ spacer graphic ที่ถอดสคริปต์แล้ว ภายใน 4 ( 4 ของ) primers [ 15 ] ผลิตภัณฑ์ ยีนที่มีแอมพลิฟายบริสุทธิ์จากเจลเจล qiaquick agarose โดยใช้การขุดชุด( qiagen เยอรมัน)การจัดลำดับ nucleotide ของยีนที่ทำได้โดยใช้ขนาดใหญ่สีย้อมเพชฌฆาตขี่จักรยานการจัดลำดับชุด(ใช้ biosystems )และ 3130 ขนาด XL พันธุกรรม Security Analyzer (ใช้ biosystems ) โปรแกรม blastn ( National Center http://​www.​ncbi.​nlm.​nih.​gov/​blast/​; ด้าน เทคโนโลยีชีวภาพ ข้อมูลไปยัง Bethesda MD )ได้ถูกใช้สำหรับการค้นหาลักษณะซึ่งเทียบเคียงกันได้ด้วยค่าเริ่มต้นโปรแกรมมาตรฐาน