synthesis and mRNA expression quant

synthesis and mRNA expression quantification were performed
following the method of Jang et al. [16]. The sequences of primers
and probes are shown in Table 1. One-step quantitative real-time
PCR (qRT-PCR) was accomplished with the One Step Prime-
Script™ RT-PCR perfect real time kit (Takara Bio, Japan). The final
reaction volume was 20 mL, including 10 mL of 2  One-Step RT-PCR
Buffer III, 2 units of Takara Ex Hot Start Taq enzyme, 0.4 mL of
reverse transcript enzyme Mix II, and 0.4 mM each of forward
primer, reverse primer and TaqMan probe. The PCR was conducted
as follows: 42 C for 5 min, 95 C for 10 s, followed by 40 cycles of
95 C for 5 s and 60 C for 30 s. Fluorescent signal detection was
started from the first cycle of the annealing stage. All samples were
analyzed in triplicates and the relative expression was determined
by the comparative threshold cycle (CT) method (2
DDCT method)
[31] using b-actin as a reference. It involves the CT values of the
target gene and housekeeping gene, b-actin, and compares the
relative expression level among each sample by 2
DDCT method.
2.6. Statistical analysis
All experimental data were expressed as the mean ± SD (standard
deviation). Significant differences for each group were determined
using Dunnett's t-test by comparing to the baseline
(time ¼ 0 hpi). Significant differences among different treatments
at each time point were analyzed by Turkey's range test using a
statistical analysis system software (SPSS 17.0). P-values of 0.05 or
less were considered statistically significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดำเนินการสังเคราะห์และ mRNA นับนิพจน์ตามวิธีของแจง et al. [16] ลำดับของไพรเมอร์และคลิปปากตะเข้จะถูกแสดงในตารางที่ 1 ขั้นตอนเดียวเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์PCR (qRT-PCR) ได้สำเร็จด้วยการหนึ่งขั้นตอนนายก-™สคริปต์ RT-PCR เวลาจริงสมบูรณ์แบบชุด (Takara ไบ ญี่ปุ่น) สุดท้าย20 mL, 10 mL 2 รวมทั้งมีปริมาณปฏิกิริยาขั้นตอนเดียว RT-PCRบัฟเฟอร์ III, Takara อดีตร้อนเริ่ม Taq เอนไซม์ 0.4 mL ของหน่วย 2กลับเสียงบรรยายเอนไซม์ผสม II และ 0.4 มม.แต่ละของไปข้างหน้ารองพื้น รองพื้นกลับ และโพรบ TaqMan วิธี PCRดังนี้: C 42 สำหรับ 5 นาที 95 C 10 s ตามรอบ 40 ของ95 C สำหรับ 5 s และ 60 C 30 ตรวจสัญญาณฟลูออเรส s ได้ถูกเริ่มต้นจากรอบแรกของขั้นตอนการหลอม ตัวอย่างทั้งหมดได้วิเคราะห์ใน triplicates และญาติกำหนดนิพจน์โดยวิธีเปรียบเทียบขีดจำกัดรอบ (CT) (วิธีการ DDCT 2)[31] ใช้แอกตินบีเป็นการอ้างอิง เกี่ยวข้องกับค่า CTเป้าหมายยีน และยีนทำความสะอาด แอกติ นบี เปรียบเทียบ และการระดับนิพจน์สัมพันธ์ระหว่างแต่ละตัวอย่างโดยวิธี DDCT 22.6. สถิติวิเคราะห์ข้อมูลการทดลองทั้งหมดถูกแสดงเป็นการเฉลี่ย± SD (มาตรฐานความแตกต่าง) มีกำหนดแตกต่างกันสำหรับแต่ละกลุ่มใช้ของ Dunnett t-ทดสอบ โดยเทียบกับหลักการ(เวลา¼ 0 hpi) ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างการรักษาแตกต่างกันเวลาแต่ละจุดถูกวิเคราะห์ โดยของตุรกีช่วงทดสอบการใช้การวิเคราะห์ทางสถิติระบบซอฟต์แวร์ (โปรแกรม 17.0) ค่า P ของ 0.05 หรือน้อยได้ถืออย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสังเคราะห์และปริมาณ mRNA
แสดงออกได้ดำเนินการตามวิธีของจางและอัล [16] ลำดับของไพรเมอร์และยานสำรวจแสดงในตารางที่ 1 หนึ่งขั้นตอนแบบ real-time เชิงปริมาณ PCR (qRT-PCR) ก็ประสบความสำเร็จกับขั้นตอนที่หนึ่ง Prime- สคริปต์™ RT-PCR ที่สมบูรณ์แบบชุดเวลาจริง (Takara Bio ญี่ปุ่น) สุดท้ายปริมาณปฏิกิริยา 20 มลรวมทั้ง 10 มิลลิลิตร 2? ขั้นตอนที่หนึ่ง-RT-PCR บัฟเฟอร์ III, 2 หน่วย Takara อดีตฮอตเอนไซม์ Taq เริ่ม 0.4 มิลลิลิตรหลักฐานกลับเอนไซม์ผสมครั้งที่สองและ0.4 มิลลิแต่ละข้างหน้าไพรเมอร์ไพรเมอร์ย้อนกลับและการสอบสวนTaqMan PCR ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้? 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วินาทีตามด้วย 40 รอบของ95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 และ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที? การตรวจจับสัญญาณเรืองแสงได้เริ่มต้นจากรอบแรกของขั้นตอนการอบอ่อน ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์ใน triplicates และการแสดงออกของญาติถูกกำหนดโดยรอบเกณฑ์เปรียบเทียบ(CT) วิธีการ (2? วิธี DDCT) [31] โดยใช้ B-โปรตีนเป็นข้อมูลอ้างอิง มันเกี่ยวข้องกับค่า CT ของยีนเป้าหมายและยีนดูแลทำความสะอาดขโปรตีนและเปรียบเทียบระดับการแสดงออกในหมู่ญาติแต่ละตัวอย่างโดย2 วิธี DDCT. 2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลทั้งหมดทดลองแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD (มาตรฐานเบี่ยงเบน) แตกต่างที่สำคัญสำหรับแต่ละกลุ่มได้รับการพิจารณาโดยใช้ t-test Dunnett โดยเมื่อเทียบกับพื้นฐาน (เวลา¼ 0 HPI) ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่แตกต่างกันการรักษาที่จุดในแต่ละครั้งที่ได้มาวิเคราะห์โดยการทดสอบช่วงของตุรกีโดยใช้ซอฟต์แวร์ระบบการวิเคราะห์ทางสถิติ(SPSS 17.0) P-ค่า 0.05 หรือน้อยได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสังเคราะห์และการแสดงออกได้ปริมาณ mRNA
ต่อไปนี้วิธีจาง et al . [ 16 ] ลำดับของดีเอ็นเอโพรบและ
จะแสดงในตารางที่ 1 หนึ่งขั้นตอนเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์พีซีอาร์ ( PCR
ข้าพเจ้า ) ประสบความสำเร็จเป็นหนึ่งในขั้นตอนที่สำคัญ -
บทนี้™สมบูรณ์แบบจริงเวลา Kit ( ทาคาระไบโอ , ญี่ปุ่น ) ปริมาณ 20 ml ปฏิกิริยาสุดท้าย
รวมทั้ง 10 ML 2  ก้าว RT-PCR
บัฟเฟอร์ 3 ,2 หน่วยของทาคาระ อดีตจาเริ่มแท็คเอนไซม์ , 0.4 มิลลิลิตรเอนไซม์ผสม 2 ใบ
ย้อนกลับและ 0.4 มม. แต่ละข้างหน้า
ไพรเมอร์และกลับ taqman สอบสวน ร่วมดำเนินการ
ดังนี้ : 42  C เป็นเวลา 5 นาที 95  นาน 10 วินาที ตามด้วย 40 รอบ
 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาทีและ 60  เป็นเวลา 30 วินาที หลอดสัญญาณตรวจจับคือ
เริ่มจากรอบแรกของการอบอ่อนที่เวที ตัวอย่าง
วิเคราะห์ 3 ซ้ำ และการแสดงออก ญาติจึงตัดสินใจ
โดยรอบเกณฑ์เปรียบเทียบ ( CT ) วิธีการ ( วิธีการ ddct 2
)
[ 31 ] การใช้ b-actin เป็นอ้างอิง มันเกี่ยวข้องกับ CT ค่า
เป้าหมายยีนและยีน , แม่บ้าน b-actin และเปรียบเทียบระดับการแสดงออกของแต่ละตัวอย่างญาติ
2
ddct วิธี .
2.6
สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลข้อมูลทั้งหมดถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD ( ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน
) ความแตกต่างของแต่ละกลุ่ม กำหนด
ใช้ Dunnett ทีโดยการเปรียบเทียบกับ baseline
( เวลา¼ 0 HPI ) ความแตกต่างระหว่างการรักษาแตกต่างกัน
ที่แต่ละจุดเวลาวิเคราะห์ข้อมูลโดยทดสอบช่วงตุรกีใช้ระบบการวิเคราะห์ทางสถิติซอฟต์แวร์
( SPSS 17.0 ) p-values 0.05 หรือ
มีการพิจารณาน้อยลงอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ