2.3. Cell culture experiments2.3.1.

2.3. Cell culture experiments
2.3.1. Cell culture
The normal human dermal fibroblasts (LF cells) were used for cell
culture experiments. The cells were maintained in Eagle's minimal essential
medium (provided by Institute of Molecular Genetics of the
ASCR) supplemented with 10% fetal bovine serum (Sigma-Aldrich)
and gentamicin (Sigma-Aldrich) in an incubator at 37 °C and 3.5% CO2
atmosphere. Cells were then detached with trypsin and seeded into
sterilized observation chambers with glass bottom coverslips (two plasma
coated coverslips and one control). The seeding densities were 15
cells/mm2 in order to achieve sparse coverage for the purposes of segmentation
of individual cells. The observation chambers were kept in
the incubator under the same conditions.
2.3.2. Cell imaging
The samples (control, CPA40, CPA42 and CPA43) were imaged by
CCHM at three time instants, 2, 3 and 4 days, after cell seeding (with
the interval approximately 24 h). At least 30 images were acquired
from each sample at each time point in pursuit of collecting data for
the statistical analysis. Images were acquired in a random manner
across each sample. While acquiring images for extraction of cell morphological
parameters, objectives Nikon 10×/0.3 were used. The imaged
area when using these objectives is 379 × 379 μm2
. For the cell
count and confluence determination, Nikon 4×/0.1 objectives providing
the field of view 947 × 947 μm2 were used.
CCHM [27,28] was built at Brno University of Technology. The optical
set-up of the microscope is based on Mach–Zehnder-type interferometer
modified for incoherent off-axis holographic microscopy
(Fig. 2) [28].The illumination is formed by a halogen lamp as a low

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การเพาะเลี้ยงเซลล์ทดลอง
2.3.1 การเพาะเลี้ยงเซลล์เซลล์ผิวหนังมนุษย์ปกติ (เซลล์ LF) ถูกนำมาใช้สำหรับเซลล์ทดลองวัฒนธรรม เซลล์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ในที่สำคัญของนกอินทรีน้อยขนาดกลาง (โดยสถาบันอณูพันธุศาสตร์ของ ASCR) เสริมด้วยซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ 10% (Sigma-Aldrich) และ gentamicin (Sigma-Aldrich) ในศูนย์บ่มเพาะที่ 37 องศาเซลเซียสและ CO2 3.5% บรรยากาศ. เซลล์ที่ถูกถอดออกแล้วด้วย trypsin และเมล็ดลงไปในห้องสังเกตฆ่าเชื้อด้วยcoverslips ด้านล่างกระจก (สองพลาสม่าcoverslips เคลือบและเป็นหนึ่งในการควบคุม) ความหนาแน่นเพาะ 15 เซลล์ / mm2 เพื่อให้บรรลุความคุ้มครองเบาบางสำหรับวัตถุประสงค์ของการแบ่งส่วนของแต่ละเซลล์ ห้องสังเกตที่ถูกเก็บไว้ในศูนย์บ่มเพาะภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน. 2.3.2 โทรศัพท์มือถือถ่ายภาพตัวอย่าง (ควบคุม CPA40, CPA42 และ CPA43) ได้รับการถ่ายภาพโดย CCHM ที่สาม instants เวลา, 2, 3 และ 4 วันหลังจากการเพาะเซลล์ (มีช่วงเวลาประมาณ24 ชั่วโมง) อย่างน้อย 30 ภาพที่ได้มาจากแต่ละตัวอย่างที่จุดในแต่ละครั้งในการแสวงหาการเก็บรวบรวมข้อมูลสำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ ภาพที่ได้มาในลักษณะสุ่มข้ามแต่ละตัวอย่าง ในขณะที่ภาพที่ได้รับการสกัดก้านเซลล์พารามิเตอร์วัตถุประสงค์ Nikon 10 × / 0.3 ถูกนำมาใช้ ถ่ายภาพพื้นที่เมื่อใช้วัตถุประสงค์เหล่านี้คือ 379 × 379 μm2 สำหรับมือถือนับและความมุ่งมั่นบรรจบ, Nikon 4 × / 0.1 วัตถุประสงค์ของการให้บริการด้านการดู947 × 947 μm2ถูกใช้. CCHM [27,28] ถูกสร้างขึ้นที่เบอร์โนมหาวิทยาลัยเทคโนโลยี แสงตั้งค่าของกล้องจุลทรรศน์จะขึ้นอยู่กับสัน Mach-Zehnder ชนิดแก้ไขเพื่อไม่ต่อเนื่องกันออกแกนกล้องจุลทรรศน์โฮโลแกรม(รูปที่. 2) [28] ส่องสว่างได้โดยเริ่มต้นจะเกิดขึ้นโดยเป็นหลอดฮาโลเจนต่ำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การทดลองเพาะเลี้ยงเซลล์
2.3.1 . การเพาะเลี้ยงเซลล์ไฟโบรบลาสต์ (
มนุษย์ธรรมดา ซึ่งถ้าเซลล์ ) ใช้สำหรับการทดลองเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ในนกอินทรีน้อยที่สุดที่จำเป็น
ขนาดกลาง ( โดยสถาบันอณูพันธุศาสตร์ของ
ascr ) เสริมด้วย 10% เซรั่มและทารกในครรภ์ ( ซิกม่า Aldrich )
( ซิกม่า Aldrich และ โปงลางสะออน ) ในตู้อบที่อุณหภูมิ 37 องศา C และ 3.5% CO2
บรรยากาศเซลล์มีแล้วเดี่ยวกับทริปลุยเข้าห้องสังเกต coverslips
ฆ่าเชื้อกับก้นแก้ว ( 2 )
coverslips เคลือบและควบคุม ) เมล็ดเมื่ออายุ 15
เซลล์ / แน่นเพื่อให้บรรลุความคุ้มครองที่ขึ้นเพื่อวัตถุประสงค์ของการแบ่งส่วน
ของเซลล์แต่ละคน แบบห้องถูกเก็บในตู้อบภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน
.
2.3.2 .
ภาพมือถือตัวอย่าง ( ควบคุม cpa40 cpa42 , และอื่นๆ cpa43 ) ด้วย
cchm 3 เวลา instants , 2 , 3 และ 4 วัน หลังจากเซลล์เพาะ (
ช่วงเวลาประมาณ 24 ชั่วโมง ) อย่างน้อย 30 ภาพได้มา
จากแต่ละตัวอย่างที่แต่ละจุดในการแสวงหารวบรวมข้อมูลสำหรับ
การวิเคราะห์ทางสถิติ ภาพที่ได้มาในลักษณะสุ่ม
ในแต่ละตัวอย่างในขณะที่การรับภาพเพื่อการสกัดเซลล์พารามิเตอร์สัณฐาน
มี Nikon 10 × / 0.3 มาใช้ ส่วนพื้นที่อื่นๆ
เมื่อใช้วัตถุประสงค์เหล่านี้คือ 379 × 379 μ M2
สำหรับเซลล์
นับและบรรจบความมุ่งมั่น , Nikon 4 × / 0.1 วัตถุประสงค์การให้
มุมมอง 947 × 947 μ M2 มาใช้ cchm
[ 27,28 ] ถูกสร้างขึ้นในมหาวิทยาลัยเทคโนโลยี Brno . แสง
การตั้งค่าของกล้องขึ้นอยู่กับมัค– ZEHNDER ประเภทอินเตอร์เฟอโรมิเตอร์สำหรับกล้องจุลทรรศน์แบบโฮโลแกรมนอกแกนดัด

( รูปที่ 2 ) [ 28 ] . ไฟส่องสว่างเป็นรูปโคมไฟฮาโลเจนเป็นต่ำ