was solidified on ice and the colle

was solidified on ice and the collected HepG2 cells were immobilized in the third layer. Approximately 2×104 cells were mixed with 0.7% low melting point agarose (LMP) and spread over the slides as the third layer. After removing the cover glasses, the slides were covered with 500 μL of 0.5% LMP agarose (the fourth layer) to prevent nuclear DNA escaping during cell lysis and electrophoresis. One-hour incubation in alkaline lysis buffer followed. The slides were submerged in electrophoretic buffer (pH >13) to unwind the nuclear DNA for 1hr and then subjected to electrophoresis in the same buffer. The electrophoresis was carried out at 2V/cm and 300 mA; for 30 min. Following electrophoresis the gels were neutralized in 400 mM Tris-HCl pH 7.5 for 15 min. The damaged DNA traveled toward the anode during electrophoresis and formed an image of a “comet” tail. After staining the slides with ethidium bromide (20 μg/mL) the comets were detected and quantified as described below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไม่หล่อน้ำแข็งและ HepG2 รวบรวมเซลล์ที่ถูกตรึงในชั้นที่สาม ประมาณ 2 × 104 เซลล์ถูกผสมกับ 0.7% agarose จุดหลอมเหลว (LMP) ต่ำ และนิ่งแผ่เป็นชั้นสาม หลังจากเอาแก้วครอบ ภาพนิ่งถูกปกคลุม ด้วย μL 500 ของ 0.5% LMP agarose (ชั้นสี่) เพื่อป้องกันนิวเคลียร์ดีเอ็นเอหลบหนีระหว่างเซลล์ lysis electrophoresis คณะทันตแพทยศาสตร์ 1 ชั่วโมงในบัฟเฟอร์ lysis ด่างตาม ภาพนิ่งที่มีน้ำท่วมในบัฟเฟอร์ด้วย (pH > 13) เหนื่อย DNA นิวเคลียร์ 1 ชั่วโมง และอยู่ภายใต้การ electrophoresis ในบัฟเฟอร์เดียวกัน การ electrophoresis ทำออกที่ 2V/ซม. และ 300 mA สำหรับ 30 นาที ต่อ electrophoresis เจถูก neutralized 400 มม.ทริสเรทติ้ง HCl pH 7.5 สำหรับ 15 นาที ดีเอ็นเอที่เสียหายได้เดินทางไปยังขั้วบวกระหว่าง electrophoresis และรูปภาพของหาง "ดาวหาง" หลังจากการย้อมสีภาพนิ่งกับโบรไมด์ ethidium (20 μg/mL) ดาวหางถูกตรวจพบ และ quantified ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ได้รับการเสริมความมั่นคงบนน้ำแข็งและเก็บรวบรวมเซลล์ HepG2 ถูกตรึงอยู่ในชั้นที่สาม ประมาณ 2 × 104 เซลล์ได้รับการผสมกับ 0.7% จุดหลอมเหลวต่ำ agarose (LMP) และแผ่กระจายไปทั่วภาพนิ่งเป็นชั้นที่สาม หลังจากถอดแว่นตาปกภาพนิ่งถูกปกคลุมไปด้วย 500 ไมโครลิตร 0.5% agarose LMP (ชั้นที่สี่) เพื่อป้องกันนิวเคลียร์ดีเอ็นเอหลบหนีในระหว่างการสลายของเซลล์และอิเล็ก การบ่มหนึ่งชั่วโมงในบัฟเฟอร์สลายตามอัลคาไลน์ สไลด์จมอยู่ใต้น้ำในบัฟเฟอร์อิเลค (pH> 13) ที่จะผ่อนคลายดีเอ็นเอนิวเคลียร์ 1 ชั่วโมงและจากนั้นภายใต้อิเล็กในบัฟเฟอร์เดียวกัน ข่าวคราวที่ไ​​ด้รับการดำเนินการที่ 2V / ซม. และ 300 มิลลิแอมป์; เป็นเวลา 30 นาที ต่อไปนี้ electrophoresis เจลถูกเป็นกลางใน 400 มิลลิ Tris-HCl pH 7.5 สำหรับ 15 นาที ดีเอ็นเอเสียหายเดินทางไปยังขั้วบวกระหว่างอิเล็กและเกิดภาพของ "ดาวหาง" หาง หลังจากการย้อมสีสไลด์ด้วย ethidium bromide (20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ดาวหางที่ถูกตรวจพบและปริมาณตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คือก้อนน้ำแข็งและเก็บเซลล์มะเร็งตับถูกตรึงในชั้นสาม ประมาณ 2 × 104 เซลล์ผสม 0.7% จุดหลอมเหลวต่ําเดี่ยว ( lmp ) และการแพร่กระจายมากกว่าภาพนิ่งเป็นชั้นที่สาม หลังจากถอดฝาแก้ว , ภาพนิ่งที่ถูกปกคลุมด้วย 500 μ L 0.5% lmp โรส ( ชั้น 4 ) เพื่อป้องกันการหลบหนีในระหว่างการสลายนิวเคลียสของเซลล์และเรสการบ่มหนึ่งชั่วโมงในการสลายบัฟเฟอร์ด่างคือ ภาพนิ่งถูกแช่ในการตรวจวัดบัฟเฟอร์ pH > 13 ) ผ่อนคลายดีเอ็นเอนิวเคลียร์ 1hr แล้วภายใต้ electrophoresis ในบัฟเฟอร์เดียวกัน ส่วนวิธีดำเนินการ ที่ 80 / ซม. มา 300 ; เป็นเวลา 30 นาที ตามวิธีเจลอยู่เป็นกลางในบริษัท 400 มม. กรดไฮโดรคลอริก pH 7.5 และ 15 นาทีความเสียหายของดีเอ็นเอในระหว่างเดินทางต่อโดยวิธีขึ้นรูปของ " ดาวหาง " หาง หลังจากการย้อมสไลด์กับทิเดียมโบรไมด์ ( 20 μ g / ml ) ดาวหางถูกตรวจพบและปริมาณตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง