Leaves and grain sucrose and starch were quantified as
described (Smith and Zeeman, 2006) with some modifications.
Flag leaves were sampled from WW and after 3 days of WS
and immediately frozen in liquid-N. Grains were harvested at
the end of the experiment. Then 0.25 g of grain powder was
incubated in ethanol (80%) for 3 min at 95 C and centrifuged
‡3000 g 10 min, keeping supernatant (soluble carbohydrate
fraction). For sucrose quantification, the soluble
carbohydrate fraction dissolved in ethanol (80%) was evaporated
using a rotary evaporator. The samples were dissolved in
ddH2O and subsequently the sucrose was analysed by highperformance
anion-exchange chromatography (HPAEC) on
HPLC using a CarboPac PA 1 column (4 · 250 mm diameter)
and determined by pulsed amperometric detection (Dionex,
Sunnyvale, CA). For starch quantification, the yellowish pellet
(insoluble carbohydrate fraction) was incubated allowing ethanol
to evaporate and dissolved in ddH2O 10 min at 95 C.
0.5 mL of the gelatinized starch granules was transferred to a
tube with 0.5 mL 200 mM Na acetate (pH 5.5) and was
digested with six units of a-amyloglucosidase and two units of
a-amylase for 4 or 24 h at 37 C, for leaf or grain, respectively.
A solution of equivalent volume and composition was
incubated without the enzymes and used as control samples.
The release of glucose was determined at 340 nm using a
Glucose Assay (GAHK20; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) with a
spectrophotometer (DU-640; Beckman Coulter, Brea, CA,
USA). Starch content was calculated as 90% of glucose
content.
ใบ และเมล็ดซูโครส และแป้งถูก quantified เป็นอธิบาย (สมิธและ Zeeman, 2006) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่างใบธงได้ตัวอย่าง จาก WW และ หลัง 3 วันของ WSและทันทีที่น้ำแข็งใน N. ของเหลว มีการเก็บเกี่ยวธัญพืชที่สิ้นสุดการทดลอง แล้ว 0.25 g ผงเมล็ดincubated ในเอทานอล (80%) ใน 3 นาทีที่ 95 C และ centrifuged‡3000 g 10 นาที รักษา supernatant (คาร์โบไฮเดรตละลายเศษส่วน) สำหรับนับซูโครส การละลายน้ำเศษส่วนคาร์โบไฮเดรตที่ละลายในเอทานอล (80%) ถูกหายไปใช้ evaporator โรตารี่ ตัวอย่างถูกละลายในddH2O และต่อมาซูโครสจะถูก analysed โดย highperformanceanion exchange chromatography (HPAEC) ในHPLC ที่ใช้คอลัมน์ CarboPac PA 1 (4 · 250 มม.เส้นผ่าศูนย์กลาง)และกำหนด โดยตรวจสอบการ amperometric พัล (DionexSunnyvale, CA) สำหรับนับแป้ง เม็ดสีเหลือง(คาร์โบไฮเดรตละลายเศษ) เป็น incubated ทำให้เอทานอลการระเหย และละลายใน 10 นาทีที่ 95 C. ddH2O0.5 mL ของเม็ดแป้ง gelatinized ได้โอนย้ายไปหลอดกับ 0.5 mL 200 mM acetate นา (pH 5.5) และไม่ต้องเป็น amyloglucosidase 6 หน่วยและหน่วยที่สองของa-amylase 4 หรือ 24 h ที่ 37 C ใบหรือเมล็ด ตามลำดับวิธีเทียบเท่าปริมาณและองค์ประกอบincubated ไม่ มีเอนไซม์ และใช้เป็นตัวอย่างควบคุมกำหนดของกลูโคสที่ 340 nm ใช้เป็นทดสอบกลูโคส (GAHK20 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) มีการเครื่องทดสอบกรดด่าง (ดู 640 Beckman Coulter, Brea, CAสหรัฐอเมริกา) เนื้อหาแป้งถูกคำนวณเป็น 90% ของกลูโคสเนื้อหา
การแปล กรุณารอสักครู่..
ใบและเมล็ดและแป้งมีปริมาณซูโครสเป็น
อธิบาย ( สมิ ธและซีแมน , 2006 ) กับการปรับเปลี่ยนบางอย่าง .
ใบธง สุ่ม ตัวอย่างจาก WW และหลัง 3 วันของ WS
ทันทีและแช่แข็งใน liquid-n. ธัญพืชถูกเก็บเกี่ยว
สิ้นสุดการทดลอง แล้ว 0.25 กรัมผงธัญพืชเป็น
) เอทานอล ( 80% ) สำหรับ 3 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและระดับ
‡ 3000 กรัม 10 นาทีการรักษาสูง ( สัดส่วนคาร์โบไฮเดรต
ละลาย ) สำหรับปริมาณปริมาณ สัดส่วนคาร์โบไฮเดรตละลาย
ละลายในเอทานอล ( 80% ) คือระเหย
ใช้เครื่องระเหยแบบหมุน จำนวนละลาย
ddh2o และต่อมาโดยวิเคราะห์โดยเทคนิคแลกเปลี่ยนไอออน highperformance
( hpaec ) และใช้ carbopac PA 1 คอลัมน์ ( 4 ด้วย 250 มม. เส้นผ่าศูนย์กลาง )
และที่สำคัญกำหนดโดยการตรวจสอบ ( DIONEX
, Sunnyvale , CA ) สำหรับปริมาณแป้ง
เม็ดเหลือง ( ที่ไม่ละลายน้ำ ส่วนคาร์โบไฮเดรต ) คือ บ่มให้ระเหยและละลายในเอทานอล
ddh2o 10 นาทีที่ 95 C .
0.5 ml ของวุ้นแป้งเม็ดถูกส่งไป
หลอด 0.5 ml 200 มม. นาเทต ( pH 5.5 และ
ย่อย 6 หน่วย และ 2 หน่วย a-amyloglucosidase
a-amylase 4 หรือ 24 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สำหรับใบหรือเมล็ดตามลำดับ
โซลูชั่นของปริมาณเทียบเท่าและองค์ประกอบคือ
บ่มโดยเอนไซม์และใช้คนควบคุม
ปล่อยกลูโคส มุ่งมั่นที่ 340 nm ใช้
ใช้กลูโคส gahk20 ; ซิกม่า Aldrich St . Louis , MO ) ด้วย
du-640 ; Beckman Coulter Spectrophotometer ( ,
เบรีย , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา แป้ง คือคิดเป็น 90% ของปริมาณกลูโคส
การแปล กรุณารอสักครู่..