In this work, the specific identifi

In this work, the specific identification of cow was based on the design of new primers (Bos-F/Bos-R) to amplify small DNA sequences of cytb gene (99 bp) as an adequate approach to test processed foods. Since Alheira sausages are fermented and smoked meat products, where DNA can be degraded, it is particularly advised to detect short sequences to enable amplification of fragmented DNA. The in silico analysis confirmed the specificity of the designed primers for the selected B. taurus sequence with 100% identity.

To further assess specificity of the designed primers for B. taurus, as well as the other tested species, each set of primers was assayed by PCR amplification against other animal species commonly used as food, including game and domestic animal meats (DNA extracts from wild boar, duck, partridge, quail, pheasant, chicken, turkey, ostrich, goat and sheep meats) and ingredients generally used in the manufacture of Alheira (DNA extracted from wheat bread, rye bread, garlic, parsley, paprika, onions, white pepper, laurel, chilli, corn and soybean). The results clearly indicated that the primers were only able to produce the expected fragments when the corresponding DNA for which they were designed was present, demonstrating their specificity (data not shown). To confirm that all extracts contained amplifiable DNA, they were submitted to PCR amplification using the universal primers (18SEU-F/18SEU-R) to target the nuclear 18S rRNA gene for eukaryotic DNA, which produced positive amplifications with all extracts (data not shown).

For each species under evaluation, binary model mixtures were prepared containing known amounts of rabbit, red deer or cow meat in pork meat. In the case of pork species, the mixtures were formerly prepared by adding known amounts of pork meat to poultry meat (Soares et al., 2010). Binary mixtures containing hare meat in pork meat were also previously prepared by Santos et al. (2012). The DNA extracts obtained from reference binary mixtures were used to optimise the amplification conditions of each species-specific PCR assay. The optimised PCR conditions allowed achieving a sensitivity of 0.01% for rabbit, cow (Fig. 1A and C) and hare (Santos et al., 2012), and of 0.1% for red deer (Fig. 1B) and pork (Soares et al., 2010).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในงานนี้ รหัสเฉพาะของวัวเป็นไปตามการออกแบบไพรเมอร์ใหม่ (บอส-F/บอส-R) ขยายขนาดเล็กลำดับดีเอ็นเอของยีน cytb (99 bp) เป็นวิธีการเพียงพอในการทดสอบอาหารแปรรูป เนื่องจาก Alheira ไส้กรอกหมัก และรมควันผลิตภัณฑ์เนื้อสัตว์ ที่ดีเอ็นเอสามารถจะเสื่อมโทรม โดยเฉพาะอย่างยิ่งฑูตอสืบลำดับย่อให้ขยายดีเอ็นเอที่มีการกระจายตัว ที่ใน silico วิเคราะห์ยืนยัน specificity ของการออกแบบไพรเมอร์สำหรับราศีพฤษภเกิดเลือกลำดับมี 100%การประเมิน specificity ของไพรเมอร์ที่ออกแบบมาสำหรับราศีพฤษภเกิด เป็นสายพันธุ์ที่ผ่านการทดสอบอื่น ๆ ต่อไป แต่ละชุดของไพรเมอร์ถูก assayed โดย PCR ขยายพันธุ์สัตว์ที่ใช้เป็นอาหาร รวมเกมและอาหารสัตว์ภายในประเทศ (ดีเอ็นเอแยกจากหมูป่า เป็ด partridge กระทา ไก่ฟ้าสี ไก่ ไก่งวง นกกระจอกเทศ เนื้อแพะและแกะสัตว์) และวัตถุดิบที่ใช้ในการผลิตของ Alheira (DNA สกัดจากข้าวสาลีขนมปังโดยทั่วไปอื่น ๆขนมปังข้าวไรย์ กระเทียม ผักชีฝรั่ง พริกขี้หนู หอม พริกไทยขาว ลอเรล พริก ข้าวโพด และถั่วเหลือง) ผลลัพธ์ชัดเจนระบุว่า ไพรเมอร์ที่ได้ในการผลิตชิ้นส่วนที่คาดไว้เมื่อดีเอ็นเอสอดคล้องกันที่ถูกออกแบบเป็นปัจจุบัน เห็นของ specificity (ข้อมูลไม่แสดง) ยืนยันว่า สารสกัดทั้งหมดประกอบด้วยดีเอ็นเอ amplifiable พวกเขาถูกส่งไปขยาย PCR ที่ใช้ไพรเมอร์สากล (18SEU-F/18SEU-R) เป้าหมายยีน rRNA 18S นิวเคลียร์สำหรับ DNA eukaryotic ซึ่งผลิต amplifications บวกกับสารสกัดจากทั้งหมด (ข้อมูลไม่แสดง)สำหรับแต่ละชนิดภายใต้การประเมิน น้ำยาผสมรูปแบบไบนารีเตรียมไว้ที่มีชื่อเสียงจำนวนกระต่าย กวางแดง หรือเนื้อวัวเนื้อหมูใน ในกรณีของหมูพันธุ์ น้ำยาผสมถูกเตรียมไว้ โดยการเพิ่มจำนวนรู้จักหมูเนื้อเนื้อสัตว์ปีก (Soares et al., 2010) ชื่อเดิม น้ำยาผสมไบนารีที่ประกอบด้วยกระต่ายเนื้อในเนื้อหมูก่อนหน้านี้ยังได้เตรียมพร้อมโดย Santos et al. (2012) สารสกัดจาก DNA ที่ได้จากน้ำยาผสมไบนารีใช้เงื่อนไขขยายการวิเคราะห์แต่ละ PCR species-specific อินพุทอ้างอิง เงื่อนไข PCR บวมได้บรรลุความไวของ 0.01% สำหรับกระต่าย วัว (Fig. 1A และ C) และกระต่าย (ซานโตส et al., 2012), และ 0.1% กวางแดง (Fig. 1B) และหมู (Soares et al., 2010)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในงานนี้โดยเฉพาะวัวก็ขึ้นอยู่กับการออกแบบของไพรเมอร์ใหม่ (Bos-F / Bos-R) จะขยายลำดับดีเอ็นเอเล็ก ๆ ของยีน cytb (99 bp) เป็นวิธีการที่เหมาะสมในการทดสอบอาหารแปรรูป ตั้งแต่ Alheira ไส้กรอกหมักและผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์รมควันที่ดีเอ็นเอสามารถสลายตัวก็ควรอย่างยิ่งที่จะตรวจสอบลำดับสั้นเพื่อให้การขยายของดีเอ็นเอแยกส่วน ในการวิเคราะห์ silico ยืนยันความจำเพาะของไพรเมอร์ที่ออกแบบมาสำหรับการเลือกลำดับ taurus บีที่มีตัวตน 100%. เพื่อเป็นการประเมินความจำเพาะของไพรเมอร์ที่ออกแบบมาสำหรับบีราศีพฤษภเช่นเดียวกับการทดสอบสายพันธุ์อื่น ๆ ชุดของไพรเมอร์แต่ละคนได้รับการวิเคราะห์ โดยขยาย PCR กับสัตว์ชนิดอื่น ๆ ที่ใช้กันทั่วไปว่าเป็นอาหารรวมถึงเกมและเนื้อสัตว์สัตว์เลี้ยง (สารสกัดดีเอ็นเอจากหมูป่า, เป็ด, นกกระทา, นกกระทา, ไก่ฟ้า, ไก่, ไก่งวง, นกกระจอกเทศ, แพะแกะและเนื้อสัตว์) และส่วนผสมที่ใช้โดยทั่วไปใน การผลิตของ Alheira (ดีเอ็นเอที่สกัดจากข้าวสาลีขนมปัง, ขนมปังข้าวไรย์, กระเทียม, ผักชีฝรั่ง, พริกหยวก, หัวหอม, พริกไทยขาว, ลอเรล, พริกข้าวโพดและถั่วเหลือง) ผลอย่างชัดเจนแสดงให้เห็นว่าไพรเมอร์เท่านั้นที่จะสามารถในการผลิตชิ้นส่วนที่คาดหวังเมื่อดีเอ็นเอตรงที่พวกเขาได้รับการออกแบบในปัจจุบันแสดงให้เห็นถึงความจำเพาะของพวกเขา (ไม่ได้แสดงข้อมูล) เพื่อยืนยันว่าสารสกัดจากทั้งหมดที่มีดีเอ็นเอ amplifiable พวกเขาถูกส่งไปยังขยาย PCR โดยใช้ไพรเมอร์สากล (18SEU-F / 18SEU-R) ในการกำหนดเป้าหมายนิวเคลียร์ 18S rRNA ยีนดีเอ็นเอ eukaryotic ซึ่งผลิตเครื่องขยายเสียงบวกด้วยสารสกัดจากทั้งหมด (ไม่ได้แสดงข้อมูล ). แต่ละสายพันธุ์ภายใต้การประเมินผลการผสมรูปแบบไบนารีได้จัดทำที่มีจำนวนเป็นที่รู้จักกันของกระต่ายกวางสีแดงหรือเนื้อวัวเนื้อหมู ในกรณีของสายพันธุ์หมูผสมได้จัดทำก่อนโดยการเพิ่มจำนวนเงินที่เป็นที่รู้จักกันของเนื้อหมูเนื้อสัตว์ปีก (Soares et al., 2010) ผสมไบนารีที่มีเนื้อกระต่ายในเนื้อหมูก็ยังจัดทำโดยก่อนหน้านี้ซานโตสและคณะ (2012) สารสกัดดีเอ็นเอที่ได้จากการผสมไบนารีอ้างอิงถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการขยายเงื่อนไขของแต่ละสายพันธุ์เฉพาะวิธี PCR เงื่อนไข PCR ที่ดีที่สุดที่ได้รับอนุญาตให้บรรลุความไวของ 0.01% สำหรับกระต่ายวัว (รูป. 1A และ C) และกระต่าย (ซาน et al., 2012) และ 0.1% สำหรับกวางแดง (รูป. 1B) และเนื้อหมู (Soares และ al., 2010)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในงานนี้ เฉพาะเจาะจงของวัว ขึ้นอยู่กับการออกแบบไพรเมอร์ใหม่ ( bos-f / bos-r ) เพื่อขยายขนาดเล็กลำดับดีเอ็นเอของยีน cytb ( 99 BP ) เป็นวิธีการที่เพียงพอที่จะทดสอบอาหารแปรรูป ตั้งแต่ alheira เป็นไส้กรอกหมักและผลิตภัณฑ์เนื้อรมควันที่ดีเอ็นเอสามารถย่อยสลาย มันเป็นโดยเฉพาะอย่างยิ่งควรตรวจหาลำดับให้สั้นแบบแยกส่วนดีเอ็นเอในการวิเคราะห์สำหรับการยืนยันความจำเพาะของการออกแบบไพรเมอร์เพื่อเลือก B . ราศีพฤษภดับ 100% ตัว

เพิ่มเติม ประเมินความจำเพาะของการออกแบบไพรเมอร์สำหรับ B . ราศีพฤษภ , รวมทั้งอื่น ๆทดสอบสายพันธุ์ แต่ละชุดของดีเอ็นเอซีรั่มโดยขยาย PCR กับชนิดอื่น ๆของสัตว์ที่ใช้เป็นอาหารรวมถึงเกมและเนื้อสัตว์ ( DNA ที่สกัดมาจากหมูป่า , เป็ด , นกกระทา , นกกระทา , ไก่ฟ้า , ไก่ , ไก่งวง , นกกระจอกเทศแพะและเนื้อแกะ ) และวัสดุที่ใช้โดยทั่วไปในการผลิต alheira ( DNA ที่สกัดจากขนมปัง , ขนมปังกระเทียม , ผักชีฝรั่ง , พริกหยวก , หัวหอม , พริกไทยขาว , ลอเรล , พริก ข้าวโพด และถั่วเหลือง ข้าวไรย์ข้าวสาลี )ผลอย่างชัดเจน พบว่าไพรเมอร์ เพียงสามารถผลิตชิ้นส่วนดีเอ็นเอ คาดว่าเมื่อที่ซึ่งพวกเขาถูกออกแบบมาเป็นปัจจุบัน แสดงให้เห็นถึงความจำเพาะของพวกเขา ( ข้อมูลไม่แสดง ) เพื่อยืนยันว่าสารสกัดทั้งหมดที่มีอยู่ amplifiable ดีเอ็นเอพวกเขาถูกส่งมาแบบ PCR โดยใช้ primers สากล ( 18seu-f / 18seu-r ) เป้าหมายนิวเคลียร์ 18S rRNA ยีนสำหรับดีเอ็นเอ eukaryotic ซึ่งผลิต amplifications บวกกับสารสกัดทั้งหมด ( ข้อมูลไม่แสดง ) .

สำหรับแต่ละชนิด ภายใต้การประเมินผสมรูปแบบไบนารีเตรียมที่มีรู้จักปริมาณของกระต่าย กวางแดง หรือเนื้อวัวใน เนื้อหมู ในกรณีของสายพันธุ์หมูผสมเตรียมโดยการเพิ่มที่รู้จักเดิมเป็นปริมาณเนื้อหมูเนื้อไก่ ( Soares et al . , 2010 ) ผสมไบนารีที่มีกระต่ายเนื้อ หมูก็เตรียมไว้ก่อนหน้านี้โดยซานโตส et al . ( 2012 ) สารสกัดที่ได้จากผลการอ้างอิงแบบผสมมาใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการเพิ่มเงื่อนไขของแต่ละเผ่าพันธุ์ - เฉพาะโดยการทดสอบวิธีที่ดีที่สุดบรรลุเงื่อนไขได้รับความไวของ 0.01 % สำหรับกระต่าย , วัว ( รูปที่ 1A และ C ) และกระต่ายป่า ( ซานโตส et al . , 2012 ) และ 0.1 % สำหรับกวางแดง ( รูปที่ 1A ) และหมู ( Soares et al . , 2010 )