An enzyme-linked immunosorbent assa

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect antibodies in the serum and intestinal fluid samples. Each well of a 96-well plate (MaxiSorp, Nunc, Waltham, MA, USA) was coated with 0.1 mL of nCDMF diluted appropriately with PBS (protein content, 0.001 mg/mL) and incubated overnight at room temperature. Wells were subsequently washed three times with PBS containing 0.05% (v/v) Tween 20 (PBST). The remaining sites on the well surface were blocked with a blocking reagent for 1 h at room temperature, followed by three washes with PBST. The serum and prepared intestinal fluid samples were diluted serially in the blocking reagent at 3-fold intervals, and 0.1 mL of dilutions was added to each well. The plate was then incubated for 1 h at room temperature. After washing with PBS, 0.1 mL of horseradish peroxidase (HRP)-conjugated goat anti-mouse IgG (dilution,1:5000; Medical and Biological Laboratories Co., Ltd, Aichi, Japan) or HRP-conjugated goat anti-mouse IgA (dilution, 1:1000; Abcam Plc., Cambridge, UK) were added to the wells containing serum and intestinal fluid samples, respectively, followed by a 1-h incubation at room temperature. Reactions were then visualized using the ELISA POD substrate TMB kit (Nacalai Tesque). The enzymatic reaction was stopped with 1 M H2SO4 and absorbance was measured at 450 nm by using a microplate reader (Varioskan Flash; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Titers are expressed as the dilution of serum or intestinal fluid samples that offered halfmaximal binding (optical density, OD50%) ± standard deviation (SD) of the mean [20]. All ELISA experiments were performed in duplicate and mean valuewas used to determine titer of serum and intestinal fluid of each mouse.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้การวิเคราะห์เอนไซม์ลิงค์ immunosorbent (ELISA) เพื่อตรวจหาแอนตี้ในซีรั่มและตัวอย่างของเหลวลำไส้ ดีแต่ละจานดี 96 (MaxiSorp, Nunc, Waltham, MA สหรัฐอเมริกา) ถูกเคลือบ ด้วย 0.1 mL ของ nCDMF ทำให้เหมาะสมกับ PBS (โปรตีน 0.001 mg/mL) และ incubated ข้ามคืนที่อุณหภูมิห้อง บ่อต่อมาถูกล้างสามครั้ง ด้วย PBS ประกอบด้วย 0.05% (v/v) Tween 20 (PBST) อเมริกาที่เหลือบนพื้นผิวดีถูกบล็อก ด้วยรีเอเจนต์บล็อกสำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง ตาม washes สามกับ PBST เซรั่มและตัวอย่างของเหลวลำไส้ที่เตรียมไว้ได้ยกเว้น serially ในรีเอเจนต์ที่บล็อกในช่วง 3-fold และเพิ่ม 0.1 mL ของ dilutions ให้ดีละกัน จานได้แล้ว incubated สำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากล้างด้วย PBS, 0.1 mL ของ horseradish peroxidase (HRP) -แพะกลวงป้องกันเมาส์ IgG (เจือจาง 1:5000 ทางการแพทย์ และชีวภาพปฏิบัติ Co., Ltd ไอจิ ญี่ปุ่น) หรือแพะ HRP กลวงป้องกันเมาส์อิกะ (เจือจาง 1:1000 Abcam จำกัด(มหาชน). เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) ถูกเพิ่มลงในบ่อที่ประกอบด้วยเซรั่มและตัวอย่างของเหลวลำไส้ ตามลำดับ ตาม ด้วยการบ่ม 1 h ที่อุณหภูมิห้อง ปฏิกิริยาได้แล้ว visualized ใช้ชุดทหารไทยพื้นผิวฝัก ELISA (Nacalai Tesque) หยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบ 1 M กำมะถัน และมีวัด absorbance ที่ 450 nm โดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Varioskan แฟลช เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ Waltham, MA สหรัฐอเมริกา) Titers ที่ยึดตามการเจือจางซีรั่ม หรือน้ำมันลำไส้ตัวอย่างที่ halfmaximal ผูก (ความหนาแน่นออปติคอล OD50%) ±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ของมัชฌิม [20] ทั้งหมด ELISA ทดลองได้ดำเนินการใน valuewas ซ้ำ และหมายถึงใช้เพื่อดู titer ของซีรั่มและน้ำมันลำไส้ของเมาส์แต่ละ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน (ELISA) ถูกนำมาใช้ในการตรวจหาแอนติบอดีในซีรั่มและตัวอย่างของเหลวในลำไส้ แต่ละคนกันดีของแผ่น 96 หลุม (MaxiSorp, ตอน, เคมบริดจ์, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ถูกเคลือบด้วย 0.1 มล nCDMF เจือจางเหมาะสมกับพีบีเอส (โปรตีนเนื้อหา 0.001 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) และบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิห้อง เวลส์ถูกล้างต่อมาสามครั้งกับพีบีเอสที่มี 0.05% (v / v) Tween 20 (PBST) เว็บไซต์ที่เหลืออยู่บนพื้นผิวได้ดีถูกบล็อกด้วยการปิดกั้นสารเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องตามด้วยสามล้างด้วย PBST ซีรั่มและเตรียมความพร้อมตัวอย่างของเหลวในลำไส้ถูกเจือจางน้ำยาลำดับในการปิดกั้นในช่วงเวลา 3 เท่าและ 0.1 มิลลิลิตรเจือจางถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดี แผ่นถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากล้างด้วยพีบีเอส 0.1 มิลลิลิตร peroxidase มะรุม (HRP) -conjugated แพะต่อต้านเมาส์ IgG (เจือจาง 1: 5000; ทางการแพทย์และห้องปฏิบัติการทางชีวภาพ จำกัด , จังหวัดไอชิญี่ปุ่น) หรือแพะ HRP-ผันต่อต้านเมาส์ IgA ( เจือจาง 1:. 1000; Abcam บมจเคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) ถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมที่มีซีรั่มและตัวอย่างของเหลวในลำไส้ตามลำดับตามด้วยฟักตัว 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ปฏิกิริยาถูกมองเห็นแล้วใช้วิธี ELISA POD พื้นผิวทหารไทยชุด (Nacalai Tesque) ปฏิกิริยาของเอนไซม์ก็หยุด 1 M H2SO4 และการดูดกลืนแสงวัดที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Varioskan แฟลช; Thermo Fisher Scientific, เคมบริดจ์, ประเทศสหรัฐอเมริกา) titers จะแสดงเป็นเจือจางซีรั่มหรือตัวอย่างของเหลวในลำไส้ที่นำเสนอการ halfmaximal ผูกพัน (ความหนาแน่นแสง OD50%) ±ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) ของค่าเฉลี่ย [20] ทดลองวิธี ELISA ทั้งหมดถูกดำเนินการในที่ซ้ำกันและ valuewas เฉลี่ยใช้ในการกำหนด titer ของซีรั่มและของเหลวในลำไส้ของเมาส์แต่ละ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็น enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) คือใช้ตรวจหาแอนติบอดีในซีรั่มและตัวอย่างของเหลวในลำไส้ แต่ละคนดีของ 96 ดีจาน ( maxisorp , ขณะนี้ , วอลแทม , MA , USA ) ถูกเคลือบด้วย 0.1 มิลลิลิตร ncdmf เจือจางอย่างเหมาะสมกับ PBS ( ปริมาณโปรตีน 0.001 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิห้อง เวลส์ จัดการล้างสามครั้งกับ PBS ที่มี 05 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Tween 20 ( pbst ) อีกเว็บไซต์ที่ถูกบล็อกด้วยพื้นผิวด้วยการปิดกั้นรีเอเจนต์ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ตามด้วยสามตัวกับ pbst . เซรั่มและเตรียมตัวอย่างของเหลวในลำไส้ลดในบล็อกเป็นรีเอเจนต์ที่ 3-fold ช่วงเวลาและ 0.1 มิลลิลิตรวิธีการที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละครั้งได้อีกด้วย จานแล้วบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องหลังจากล้างด้วย pbs , 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์มะรุม ( HRP ) และ IgG anti เมาส์แพะ ( เจือจาง 1:5000 ด้านการแพทย์และชีวภาพห้องปฏิบัติการ Co . , Ltd , ไอจิ , ญี่ปุ่น ) หรือ HRP และแพะป้องกันเมาส์กะ ( 11 , 000 ; ABCAM PLC . , Cambridge , UK ) ที่ถูกประกอบด้วย เซรั่ม และ เวลส์ ตัวอย่างของเหลวในลำไส้ ตามลำดับ ตามด้วย 1-h บ่มที่อุณหภูมิห้องปฏิกิริยาแล้วมองเห็นโดยใช้วิธีพื้นผิวฝัก ( Kit ( nacalai tesque ) ปฏิกิริยาของเอนไซม์ถูกหยุดด้วยกรดซัลฟิวริก 1 M และค่าวัด 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( varioskan แฟลช ; เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , วอลแทม , MA , USA ) โดยจะแสดงเป็น 2 เซรั่มหรือตัวอย่างของเหลวในลำไส้ที่เสนอ halfmaximal มัด ( ความหนาแน่นของแสงod50 % ) ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD ) ของ±ค่าเฉลี่ย [ 20 ] วิธีทดลองมีการปฏิบัติในที่ซ้ำกันและกันใช้เพื่อกำหนดระดับของซีรั่มและของเหลวในลำไส้ของแต่ละเมาส์