- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Ipiwi1 expression in adults, during
Ipiwi1 expression in adults, during regeneration and during development
Next, we analyzed the expression dynamics of piwi-like genes in Isodiametra pulchra in adults, during development, regeneration, starvation and after irradiation. From I. pulchra, we have isolated two piwi-like genes, ipiwi1 and ipiwi2 (Additional files 1 and 2, Figures. S1, S2), both comprising the conserved Piwi and Paz domains (Additional file 3, Figure. S3), which are characteristic for members of the Piwi/Ago family [46,47]. Comparable to most organisms studied so far, ipiwi2 appeared to have a germ line specific expression (Additional file 4, Figures. S4A-C). Interestingly, ipiwi1 showed in addition to the germ line, an expression pattern extended to somatic stem cells (Figure. 2), a situation only known from rhabditophoran flatworms, sponges and cnidarians [33,36,37,43-45]. Therefore we focussed in this study on ipiwi1. To localize Ipiwi1 protein, we have generated a specific polyclonal antibody (Additional file 4, Figure. S4F).
Additional file 1. Figure S1: Nucleotide sequence and predicted protein product of Ipiwi1. Conserved PAZ and PIWI domains highlighted in blue (PAZ) and green (PIWI). The piwi box within the piwi domain is marked in red. Start and stop codon are underlined and marked in bold. ISH primers are underlined within the sequence. Accession number for Ipiwi1 (AM942741).
Format: JPEG Size: 3.2MB Download fileOpen Data
Additional file 2. Figure S2: Nucleotide sequence and predicted protein product of Ipiwi2. Conserved PAZ and PIWI domains are highlighted in blue (PAZ) and green (PIWI). The piwi box within the piwi domain is marked in red. Start and stop codon are underlined and marked in bold. ISH primers are underlined within the sequence. Accession number for Ipiwi2 (AM942742).
Format: JPEG Size: 3.2MB Download fileOpen Data
Additional file 3. Figure S3:. Alignment of predicted piwi-like genes from I. pulchra with piwi-like genes from other species. (A) Amino acid alignment of the conserved PAZ domain. (B) Amino acid alignment of the conserved PIWI domain. The PIWI box is highlighted in purple. Amino acids indicated with green asterisks are supposed to create a binding pocket for the 5'phosphate group of binding RNA. Red asterisks indicate putative RNase active site carboxylate residues. Amino acids indicated in purple can distinguish members of the piwi and argonaute subfamily. The Genbank accession numbers: Isodiametra pulchra Ipiwi1 (AM942741); Isodiametra pulchra Ipiwi2 (AM942742); Macrostomum lignano Macpiwi (AM942740); Schmidtea mediterranea Smedwi1 (DQ186985) Smedwi2 (DQ186986); Dugesia japonica DjPiwi1 (AJ865376); Podocoryne carnea Cniwi (AAS01181); Caenorhabditis elegans PRG1 (NP492121); Drosophila melanogaster DmPiwi (AF104354); Strongylocentrotus purpuratus Seawi (AY014899); Homo sapiens Hiwi (AF104260).
Format: JPEG Size: 4MB Download fileOpen Data
Additional file 4. Figure S4: Ipiwi2 expression, Ipiwi1 and Ipiwi2 control sense probes, Ipiwi1 Western Blot and radiation controls. Ipiwi2 whole mount in situ hybridization (A) with detail of expression in testes (t) (B) and in developing eggs (de) (C). (D) Ipiwi1 sense control. (E) Ipiwi2 sense control. (F) Western blot of Ipiwi1 polyclonal antibody, showing a signal at the expected size (100 kDa). (G-I) Hard X ray radiation of 60 Gray did not result in a significant downregulation of the housekeeping gene Isodiametra pulchra elongation factor alpha (IpEfα). IpEfα Control (G); IpEfα expression after one day (H) and one week (I) postirradiation. Scale bars 100 μm in (A, D, E, G, H, I), 50 μm in (B) and 25 μm in (C).
Format: JPEG Size: 767KB Download fileOpen Data
thumbnailFigure 2. Ipiwi1 mRNA expression (A-C) and protein localization (D-G) and BrdU/ipiwi1 (H) double labelling in I. pulchra. (A) Whole mount ipiwi1 in situ hybridization of an adult specimen. (B) Detail of developing eggs (de) and testes (t). (C) Dorsal focal plane showing ipiwi1 mRNA expressed in neoblasts (open arrowheads). (D, E) Confocal projections of Ipiwi1 protein localisation in testes and developing eggs (D) and in neoblasts (nb) (E). (F) Detail of the anterior region of (E) demonstrating Ipiwi1 positive cells (open arrowheads). (G) Detail of the posterior region of (D) demonstrating Ipiwi1 positive cells (open arrowheads). (H) Double staining of stem cells in S-phase (green) and ipiwi1 positive cells (red). Confocal projection (1,02 μm) shows the presence of BrdU-only labelled cells (green arrows), ipiwi1-only labelled cells (red arrows) as well as BrdU/piwi double labelled stem cells (yellow arrows). In all figures, anterior is to the top. Scale bars (A, D, E) 100 μm; (B, C, F-H) 50 μm.
In adult animals, ipiwi1 mRNA and protein were localized in a subpopulation of somatic stem cells and gonads (Figure. 2) while the sense probe did not show any signal (Additional file 4, Figure. S4D). Ipiwi1 positive cells in testes comprised two bands on the lateral sides of the animal which consisted of spermatogonia and spermatocytes (Figures. 2A, B, D). All stages of female germ cells expressed ipiwi1 including oogonia, oocytes and mature eggs (Figures. 2A, B, D). We further localized ipiwi1 mRNA expression in neoblasts in the region posterior to the statocyst but not in the posterior end of the animal (Figures. 2A, C). In contrast, few Ipiwi1 protein positive cells were also found anterior to the statocyst (Figures. 2E, F) and in the tail region (Figure. 2G). These data suggest that Ipiwi1 protein functions also in differentiating neoblasts, a situation similar to triclad flatworms [33,34,37]. Double labelling of ipiwi1 with BrdU revealed ipiwi1-only labelled cells, BrdU-only labelled cells as well as ipiwi1/BrdU double labelled stem cells (Figure. 2H). These data suggest that ipiwi1 was restricted to only a subpopulation of neoblasts.
The process of regeneration in acoel flatworms was earlier examined on both morphological and immunohistochemical level but no molecular analyses have been performed to date [23,24,26,30,48,49]. Here we show ipiwi1 expression dynamics during successive stages of tail regeneration (Figure. 3, Additional file 5, Figure. S5) (this species is not able to perform anterior regeneration). One hour after initial amputation, ipiwi1 could not be detected at the regeneration site (Figures. 3A, A'). 10 hours postamputation however, a small rim of ipiwi1 positive cells became visible below the epidermis (Figures. 3B, B'). At 25 hours after amputation, ipiwi1 was upregulated within the small blastema (Figures. 3C, C'). From 48 to 68 hours of regeneration, ipiwi1 expression was detected in neoblasts that were organized in a ring-shaped structure (Figures. 3D-F') and outlining the subsequent developing reproductive organs. Ipiwi1 expression was upregulated only locally within the regeneration blastema but not in anterior regions of the animals (Additional file 5, Figure. S5). As regeneration proceeded, blastemal cell differentiation was paralleled by a gradual decrease in ipiwi1 expression (Figures. 3F-G').
Additional file 5. Figure S5: . Overview of Ipiwi1 expression and dynamics during posterior regeneration in Isodiametra pulchra. This whole mount overview clearly demonstrates that Ipiwi1 is only locally upregulated within the regeneration blastema (for details see Figure. 4). Expression of Ipiwi1 mRNA (A-I) and protein localization (J-R). One hour after cutting (A; J) and up to five hours postamputation (B, K) Ipiwi1 could not be detected at the regeneration site by in situ hybridization. Ipiwi1 was upregulated in the regeneration blastema (arrow) after 10 hours (C, L) and 25 hours postamputation (D, M). From 42 hours onwards Ipiwi1 remained downregulated in the regeneration blastema (E-R) and Ipiwi1 expression and protein were only present in the differentiating genital blastema (open arrows in E-Q). Scale bars 100 μm.
Format: JPEG Size: 2MB Download fileOpen Data
thumbnailFigure 3. Ipiwi1 mRNA expression (A-G) and protein localization (A'-G') during posterior regeneration. One hour after cutting (A, A'), ipiwi1 expression could not be detected at the regeneration site. After 10 hours, ipiwi1 was upregulated below the epidermis (arrows) (B, B'). At 25 hours postamputation (C, C') a significant proportion of cells within the regeneration blastema were ipiwi1 positive. From 48 hours onwards ipiwi1 expression and protein were present in the differentiating genital blastema (open arrows in D-F'). (G, G') After 76 h, ipiwi1 expression reached default levels. Scale bars 50 μm.
We next examined the expression of ipiwi1 throughout different stages of postembryonic development (Figure. 4). In freshly hatched I. pulchra, small parenchymally located somatic neoblasts and several larger ipiwi1 positive primordial germ cells were present in the central region of the animal (Figures. 4A, F). Those larger ipiwi1 positive cells gave rise to testes and ovaries and we confirmed the nature of these cells by double-labelling with an I. pulchra specific nanos probe (De Mulder, unpublished). The presence of primordial germ cells in freshly hatched I. pulchra suggested an embryonic segregation of the germ line in this species. The number of ipiwi1 positive cells increased up to four days post hatching (Figures. 4B, G) and distinct ipiwi1 stained testes were present after one week (Figures. 4C, H). Chains of developing eggs could be discerned after 10 days of postembryonic development (Figures. 4D, I). The number of ipiwi1 expressing somatic stem cells gradually increased during postembryonic development. A ring shaped structure of ipiwi1 positive cells accounted for the genital blastema (Figure. 4E), a structure identical to the differentiating genital blastema after 42 hours to 68 hours of regeneration (compare with Figure. 3G). The critical role of neoblasts became apparent by treatment with ipiwi1 dsRNA during development. The functional knock-down of ipiwi1 in developing worms re
Next, we analyzed the expression dynamics of piwi-like genes in Isodiametra pulchra in adults, during development, regeneration, starvation and after irradiation. From I. pulchra, we have isolated two piwi-like genes, ipiwi1 and ipiwi2 (Additional files 1 and 2, Figures. S1, S2), both comprising the conserved Piwi and Paz domains (Additional file 3, Figure. S3), which are characteristic for members of the Piwi/Ago family [46,47]. Comparable to most organisms studied so far, ipiwi2 appeared to have a germ line specific expression (Additional file 4, Figures. S4A-C). Interestingly, ipiwi1 showed in addition to the germ line, an expression pattern extended to somatic stem cells (Figure. 2), a situation only known from rhabditophoran flatworms, sponges and cnidarians [33,36,37,43-45]. Therefore we focussed in this study on ipiwi1. To localize Ipiwi1 protein, we have generated a specific polyclonal antibody (Additional file 4, Figure. S4F).
Additional file 1. Figure S1: Nucleotide sequence and predicted protein product of Ipiwi1. Conserved PAZ and PIWI domains highlighted in blue (PAZ) and green (PIWI). The piwi box within the piwi domain is marked in red. Start and stop codon are underlined and marked in bold. ISH primers are underlined within the sequence. Accession number for Ipiwi1 (AM942741).
Format: JPEG Size: 3.2MB Download fileOpen Data
Additional file 2. Figure S2: Nucleotide sequence and predicted protein product of Ipiwi2. Conserved PAZ and PIWI domains are highlighted in blue (PAZ) and green (PIWI). The piwi box within the piwi domain is marked in red. Start and stop codon are underlined and marked in bold. ISH primers are underlined within the sequence. Accession number for Ipiwi2 (AM942742).
Format: JPEG Size: 3.2MB Download fileOpen Data
Additional file 3. Figure S3:. Alignment of predicted piwi-like genes from I. pulchra with piwi-like genes from other species. (A) Amino acid alignment of the conserved PAZ domain. (B) Amino acid alignment of the conserved PIWI domain. The PIWI box is highlighted in purple. Amino acids indicated with green asterisks are supposed to create a binding pocket for the 5'phosphate group of binding RNA. Red asterisks indicate putative RNase active site carboxylate residues. Amino acids indicated in purple can distinguish members of the piwi and argonaute subfamily. The Genbank accession numbers: Isodiametra pulchra Ipiwi1 (AM942741); Isodiametra pulchra Ipiwi2 (AM942742); Macrostomum lignano Macpiwi (AM942740); Schmidtea mediterranea Smedwi1 (DQ186985) Smedwi2 (DQ186986); Dugesia japonica DjPiwi1 (AJ865376); Podocoryne carnea Cniwi (AAS01181); Caenorhabditis elegans PRG1 (NP492121); Drosophila melanogaster DmPiwi (AF104354); Strongylocentrotus purpuratus Seawi (AY014899); Homo sapiens Hiwi (AF104260).
Format: JPEG Size: 4MB Download fileOpen Data
Additional file 4. Figure S4: Ipiwi2 expression, Ipiwi1 and Ipiwi2 control sense probes, Ipiwi1 Western Blot and radiation controls. Ipiwi2 whole mount in situ hybridization (A) with detail of expression in testes (t) (B) and in developing eggs (de) (C). (D) Ipiwi1 sense control. (E) Ipiwi2 sense control. (F) Western blot of Ipiwi1 polyclonal antibody, showing a signal at the expected size (100 kDa). (G-I) Hard X ray radiation of 60 Gray did not result in a significant downregulation of the housekeeping gene Isodiametra pulchra elongation factor alpha (IpEfα). IpEfα Control (G); IpEfα expression after one day (H) and one week (I) postirradiation. Scale bars 100 μm in (A, D, E, G, H, I), 50 μm in (B) and 25 μm in (C).
Format: JPEG Size: 767KB Download fileOpen Data
thumbnailFigure 2. Ipiwi1 mRNA expression (A-C) and protein localization (D-G) and BrdU/ipiwi1 (H) double labelling in I. pulchra. (A) Whole mount ipiwi1 in situ hybridization of an adult specimen. (B) Detail of developing eggs (de) and testes (t). (C) Dorsal focal plane showing ipiwi1 mRNA expressed in neoblasts (open arrowheads). (D, E) Confocal projections of Ipiwi1 protein localisation in testes and developing eggs (D) and in neoblasts (nb) (E). (F) Detail of the anterior region of (E) demonstrating Ipiwi1 positive cells (open arrowheads). (G) Detail of the posterior region of (D) demonstrating Ipiwi1 positive cells (open arrowheads). (H) Double staining of stem cells in S-phase (green) and ipiwi1 positive cells (red). Confocal projection (1,02 μm) shows the presence of BrdU-only labelled cells (green arrows), ipiwi1-only labelled cells (red arrows) as well as BrdU/piwi double labelled stem cells (yellow arrows). In all figures, anterior is to the top. Scale bars (A, D, E) 100 μm; (B, C, F-H) 50 μm.
In adult animals, ipiwi1 mRNA and protein were localized in a subpopulation of somatic stem cells and gonads (Figure. 2) while the sense probe did not show any signal (Additional file 4, Figure. S4D). Ipiwi1 positive cells in testes comprised two bands on the lateral sides of the animal which consisted of spermatogonia and spermatocytes (Figures. 2A, B, D). All stages of female germ cells expressed ipiwi1 including oogonia, oocytes and mature eggs (Figures. 2A, B, D). We further localized ipiwi1 mRNA expression in neoblasts in the region posterior to the statocyst but not in the posterior end of the animal (Figures. 2A, C). In contrast, few Ipiwi1 protein positive cells were also found anterior to the statocyst (Figures. 2E, F) and in the tail region (Figure. 2G). These data suggest that Ipiwi1 protein functions also in differentiating neoblasts, a situation similar to triclad flatworms [33,34,37]. Double labelling of ipiwi1 with BrdU revealed ipiwi1-only labelled cells, BrdU-only labelled cells as well as ipiwi1/BrdU double labelled stem cells (Figure. 2H). These data suggest that ipiwi1 was restricted to only a subpopulation of neoblasts.
The process of regeneration in acoel flatworms was earlier examined on both morphological and immunohistochemical level but no molecular analyses have been performed to date [23,24,26,30,48,49]. Here we show ipiwi1 expression dynamics during successive stages of tail regeneration (Figure. 3, Additional file 5, Figure. S5) (this species is not able to perform anterior regeneration). One hour after initial amputation, ipiwi1 could not be detected at the regeneration site (Figures. 3A, A'). 10 hours postamputation however, a small rim of ipiwi1 positive cells became visible below the epidermis (Figures. 3B, B'). At 25 hours after amputation, ipiwi1 was upregulated within the small blastema (Figures. 3C, C'). From 48 to 68 hours of regeneration, ipiwi1 expression was detected in neoblasts that were organized in a ring-shaped structure (Figures. 3D-F') and outlining the subsequent developing reproductive organs. Ipiwi1 expression was upregulated only locally within the regeneration blastema but not in anterior regions of the animals (Additional file 5, Figure. S5). As regeneration proceeded, blastemal cell differentiation was paralleled by a gradual decrease in ipiwi1 expression (Figures. 3F-G').
Additional file 5. Figure S5: . Overview of Ipiwi1 expression and dynamics during posterior regeneration in Isodiametra pulchra. This whole mount overview clearly demonstrates that Ipiwi1 is only locally upregulated within the regeneration blastema (for details see Figure. 4). Expression of Ipiwi1 mRNA (A-I) and protein localization (J-R). One hour after cutting (A; J) and up to five hours postamputation (B, K) Ipiwi1 could not be detected at the regeneration site by in situ hybridization. Ipiwi1 was upregulated in the regeneration blastema (arrow) after 10 hours (C, L) and 25 hours postamputation (D, M). From 42 hours onwards Ipiwi1 remained downregulated in the regeneration blastema (E-R) and Ipiwi1 expression and protein were only present in the differentiating genital blastema (open arrows in E-Q). Scale bars 100 μm.
Format: JPEG Size: 2MB Download fileOpen Data
thumbnailFigure 3. Ipiwi1 mRNA expression (A-G) and protein localization (A'-G') during posterior regeneration. One hour after cutting (A, A'), ipiwi1 expression could not be detected at the regeneration site. After 10 hours, ipiwi1 was upregulated below the epidermis (arrows) (B, B'). At 25 hours postamputation (C, C') a significant proportion of cells within the regeneration blastema were ipiwi1 positive. From 48 hours onwards ipiwi1 expression and protein were present in the differentiating genital blastema (open arrows in D-F'). (G, G') After 76 h, ipiwi1 expression reached default levels. Scale bars 50 μm.
We next examined the expression of ipiwi1 throughout different stages of postembryonic development (Figure. 4). In freshly hatched I. pulchra, small parenchymally located somatic neoblasts and several larger ipiwi1 positive primordial germ cells were present in the central region of the animal (Figures. 4A, F). Those larger ipiwi1 positive cells gave rise to testes and ovaries and we confirmed the nature of these cells by double-labelling with an I. pulchra specific nanos probe (De Mulder, unpublished). The presence of primordial germ cells in freshly hatched I. pulchra suggested an embryonic segregation of the germ line in this species. The number of ipiwi1 positive cells increased up to four days post hatching (Figures. 4B, G) and distinct ipiwi1 stained testes were present after one week (Figures. 4C, H). Chains of developing eggs could be discerned after 10 days of postembryonic development (Figures. 4D, I). The number of ipiwi1 expressing somatic stem cells gradually increased during postembryonic development. A ring shaped structure of ipiwi1 positive cells accounted for the genital blastema (Figure. 4E), a structure identical to the differentiating genital blastema after 42 hours to 68 hours of regeneration (compare with Figure. 3G). The critical role of neoblasts became apparent by treatment with ipiwi1 dsRNA during development. The functional knock-down of ipiwi1 in developing worms re
0/5000
Ipiwi1 นิพจน์ในผู้ใหญ่ ฟื้นฟู และใน ระหว่างการพัฒนาถัดไป เราวิเคราะห์เปลี่ยนแปลงนิพจน์ของยีนเช่น piwi ใน Isodiametra pulchra ในผู้ใหญ่ พัฒนา ฟื้นฟู ความอดอยาก และ หลังวิธีการฉายรังสี จาก I. pulchra เราได้แยกต่างหากสองยีนเช่น piwi, ipiwi1 และ ipiwi2 (เพิ่มเติมไฟล์ 1 และ 2 ตัวเลข S1, S2), นำ Piwi และ Paz โดเมน (เพิ่มเติมไฟล์ 3 ตัวเลขทั้งสองประกอบด้วย S3), ซึ่งมีลักษณะเฉพาะสำหรับสมาชิกของครอบครัว Piwi/ผ่าน มา [46,47] เทียบได้กับสิ่งมีชีวิตส่วนใหญ่ที่ศึกษาเพื่อให้ห่างไกล ipiwi2 ปรากฏให้เป็นจมูกบรรทัดระบุนิพจน์ (เพิ่มเติมไฟล์ 4 ตัวเลข S4A-C) เป็นเรื่องน่าสนใจ ipiwi1 แสดงให้เห็นว่านอกจากรายการจมูก รูปแบบนิพจน์การขยาย somatic สเต็มเซลล์ (รูปที่ 2), สถานการณ์รู้จัก rhabditophoran flatworms ฟองน้ำ และ cnidarians [33,36,37,43-45] ดังนั้น เรา focussed ในการศึกษานี้ใน ipiwi1 ต้องแปล Ipiwi1 โปรตีน เรามีสร้างแอนติบอดี polyclonal เฉพาะ (เพิ่มเติมไฟล์ 4 รูป S4F)เพิ่มเติมไฟล์ 1 รูป S1: ลำดับนิวคลีโอไทด์และโปรตีนคาดการณ์ผลิตภัณฑ์ของ Ipiwi1 โดนำ PAZ และ PIWI ที่เน้นสีน้ำเงิน (PAZ) และเขียว (PIWI) กล่อง piwi ภายในโดเมน piwi จะทำเครื่องหมายสีแดง เริ่มต้น และรหัสพันธุกรรมหยุดขีดเส้นใต้ และทำเครื่องหมายเป็นตัวหนา ไพรเมอร์อิชโบจะขีดเส้นใต้ในลำดับที่ หมายเลขทะเบียนสำหรับ Ipiwi1 (AM942741)รูปแบบ: JPEG ขนาด: 3.2MB ดาวน์โหลด fileOpen ข้อมูลเพิ่มเติมไฟล์ 2 รูป S2: ลำดับนิวคลีโอไทด์และโปรตีนคาดการณ์ผลิตภัณฑ์ของ Ipiwi2 นำ PAZ และ PIWI โดเมนจะถูกเน้นสีน้ำเงิน (PAZ) และเขียว (PIWI) กล่อง piwi ภายในโดเมน piwi จะทำเครื่องหมายสีแดง เริ่มต้น และรหัสพันธุกรรมหยุดขีดเส้นใต้ และทำเครื่องหมายเป็นตัวหนา ไพรเมอร์อิชโบจะขีดเส้นใต้ในลำดับที่ หมายเลขทะเบียนสำหรับ Ipiwi2 (AM942742)รูปแบบ: JPEG ขนาด: 3.2MB ดาวน์โหลด fileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 3 รูป S3: การจัดตำแหน่งของคาดการณ์ piwi เหมือนยีนจาก I. pulchra กับยีน piwi เหมือนพันธุ์อื่น ๆ (A) ตำแหน่งกรดอะมิโนของโดเมน PAZ นำ (ข) กรดอะมิโนตำแหน่งของโดเมน PIWI นำ กล่อง PIWI จะถูกเน้นด้วยสีม่วง กรดอะมิโนที่แสดง ด้วยเครื่องหมายดอกจันสีเขียวควรจะสร้างกระเป๋าผูก 5' ฟอสเฟตกลุ่มของอาร์เอ็นเอรวม เครื่องหมายดอกจันสีแดงบ่งชี้ putative RNase ใช้ carboxylate ตก กรดอะมิโนที่แสดงในสีม่วงสามารถแยกความแตกต่างของ subfamily piwi และ argonaute หมายเลขทะเบียน Genbank: Isodiametra pulchra Ipiwi1 (AM942741); Isodiametra pulchra Ipiwi2 (AM942742); Macrostomum lignano Macpiwi (AM942740); Schmidtea mediterranea Smedwi1 Smedwi2 (DQ186985) (DQ186986); Dugesia japonica DjPiwi1 (AJ865376); Carnea Podocoryne Cniwi (AAS01181); Caenorhabditis elegans PRG1 (NP492121); แมลงวันทอง (AF104354); DmPiwi Strongylocentrotus purpuratus Seawi (AY014899); Sapiens ตุ๊ด Hiwi (AF104260)รูปแบบ: JPEG ขนาด: 4MB ดาวน์โหลด fileOpen ข้อมูลเพิ่มเติมไฟล์ 4 รูป S4: Ipiwi2 นิพจน์ Ipiwi1 และ Ipiwi2 คลิปปากตะเข้รู้สึกควบคุม Ipiwi1 ตะวันตกทำลาย และควบคุมรังสี ทั้งหมด Ipiwi2 เม้าท์ใน situ hybridization (A) กับรายละเอียดของนิพจน์ ในลิ้ม (t) (B) และ ในการพัฒนาไข่ (de) (C) (D) ควบคุมความรู้สึก Ipiwi1 (E) Ipiwi2 ความรู้สึกควบคุม (F) ตะวันตกคืนในตาของแอนติบอดี polyclonal Ipiwi1 แสดงสัญญาณขนาดที่คาดไว้ (100 kDa) (G-ฉัน) ไม่ได้เกิดรังสีรังสี X หนักของสีเทา 60 ใน downregulation สำคัญของการทำความสะอาดยีน Isodiametra pulchra elongation ปัจจัยอัลฟา (IpEfα) ควบคุม IpEfα (G); นิพจน์ IpEfα หลังจากหนึ่งวัน (H) และสัปดาห์ที่หนึ่ง (I) postirradiation สเกลบาร์ μm 100 ใน (A, D, E, G, H ฉัน), μm 50 ใน (B) และ μm 25 (C)รูปแบบ: JPEG ขนาด: fileOpen 767KB ดาวน์โหลดข้อมูลthumbnailFigure 2 Ipiwi1 mRNA นิพจน์ (A-C) และโปรตีนแปล (D-G) และ BrdU/ipiwi1 (H) คู่ฉลากใน I. pulchra (A) ipiwi1 เมาท์ทั้งหมดในซิ hybridization เป็นของผู้ใหญ่ (ข) รายละเอียดของการพัฒนาลิ้ม (t) และไข่ (de) (ค) Dorsal โฟกัสเครื่องบินแสดง ipiwi1 mRNA ใน neoblasts (เปิดหัวลูกศร) (D, E) ประมาณ confocal ของสังคมธุรกิจโปรตีน Ipiwi1 ในลิ้มและไข่พัฒนา (D) และ neoblasts (nb) (E) (F) รายละเอียดภาคแอนทีเรียร์ (E) เห็น Ipiwi1 บวกเซลล์ (เปิดหัวลูกศร) (G) รายละเอียดของแคว้น (D) หลังเห็น Ipiwi1 บวกเซลล์ (เปิดหัวลูกศร) (H) คู่ย้อมสีของเซลล์ต้นกำเนิดในเฟส S (สีเขียว) และ ipiwi1 บวกเซลล์ (สีแดง) ฉาย confocal (1,02 μm) แสดงสถานะของ BrdU เดียวมันเซลล์ (ศรสีเขียว), ipiwi1 เดียวมันเซลล์ (ลูกศรสีแดง) และ BrdU/piwi คู่มันเซลล์ต้นกำเนิด (ลูกศรสีเหลือง) ในตัวเลขทั้งหมด แอนทีเรียร์ได้ด้านบน ขนาด μm; 100 บาร์ (A, D, E) (B, C, F-H) 50 μmสัตว์ผู้ใหญ่ ipiwi1 mRNA และโปรตีนได้รับการแปลใน subpopulation somatic สเต็มเซลล์และต่อมบ่งเพศ (รูป. 2) ในขณะที่ความรู้สึก โพรบได้ไม่แสดงสัญญาณใด ๆ (เพิ่มเติมไฟล์ 4 รูป S4D) Ipiwi1 ลิ้มบวกเซลล์ประกอบด้วยแถบสองด้านด้านข้างของสัตว์ซึ่งประกอบด้วย spermatogonia และ spermatocytes (ตัวเลข. 2A, B, D) ทุกขั้นตอน ipiwi1 หญิงเจิร์มเซลล์แสดง oogonia แช่สารละลาย และไข่สุก (เลข. 2A, B, D) เราเพิ่มเติมภาษาท้องถิ่น ipiwi1 mRNA นิพจน์ใน neoblasts ในภูมิภาคหลังการใน statocyst แต่ไม่ ในสุดหลังของสัตว์ (ตัวเลข. 2A, C) ในทางตรงกันข้าม ไม่กี่ Ipiwi1 โปรตีนบวกนอกจากนี้ยังพบเซลล์ anterior to statocyst (เลข. 2E, F) และ ในภูมิภาคหาง (รูป. 2 กรัม) ข้อมูลเหล่านี้แนะนำว่า โปรตีน Ipiwi1 ทำงานยังในขึ้นต้น neoblasts สถานการณ์ที่คล้ายคลึงกับ triclad flatworms [33,34,37] คู่ฉลากของ ipiwi1 กับ BrdU เปิดเผย ipiwi1 เดียวมันเซลล์ BrdU เดียวมันเซลล์เช่นเป็น ipiwi1/BrdU คู่มันสเต็มเซลล์ (รูปที่ 2H) ข้อมูลเหล่านี้แนะนำ ipiwi1 ที่ถูกจำกัดเฉพาะ subpopulation ของ neoblastsกระบวนการฟื้นฟูใน acoel flatworms ถูกตรวจสอบทั้งสองอย่างของก่อนหน้านี้ และได้ปฏิบัติระดับ immunohistochemical แต่ไม่วิเคราะห์โมเลกุลวันที่ [23,24,26,30,48,49] ที่นี่เราแสดง ipiwi1 dynamics นิพจน์ในระหว่างขั้นตอนที่ต่อเนื่องของหางฟื้นฟู (รูป 3 เพิ่มเติมแฟ้ม 5 รูป S5) (พันธุ์นี้จะไม่สามารถทำการฟื้นฟูแอนทีเรียร์) หนึ่งชั่วโมงหลังจากเริ่มต้น amputation, ipiwi1 ไม่พบไซต์ฟื้นฟู (เลข. 3A, A') 10 ชั่วโมง postamputation อย่างไรก็ตาม ริมเล็ก ipiwi1 บวกเซลล์กลายเป็นเห็นอยู่ใต้หนังกำพร้า (เลข. 3B, B') ใน 25 ชั่วโมงหลังจาก amputation, ipiwi1 คือ upregulated ภายใน blastema ขนาดเล็ก (ตัวเลข 3C, C') จาก 48 ชั่วโมง 68 ของฟื้นฟู นิพจน์ ipiwi1 พบใน neoblasts ที่ถูกจัดระเบียบในโครงสร้างรูปวงแหวน (เลข. 3D-F') และเค้าร่างภายหลังพัฒนาระบบอวัยวะสืบพันธุ์ นิพจน์ Ipiwi1 ได้ upregulated เฉพาะเครื่องภาย ใน blastema ฟื้นฟู แต่ไม่ใช่ ในแคว้นแอนทีเรียร์ (เพิ่มเติมไฟล์ 5 รูปสัตว์ S5) เป็นฟื้นฟูครอบครัว สร้างความแตกต่างของเซลล์ blastemal ถูกแห่งดวง โดยค่อย ๆ ลดลงในนิพจน์ ipiwi1 (ตัวเลขการ 3F-G')เพิ่มเติมไฟล์ 5 รูป S5: ภาพรวมของนิพจน์ Ipiwi1 และพลศาสตร์ในระหว่างการฟื้นฟูหลังใน Isodiametra pulchra ภาพนี้รวมทั้งภูเขาชัดเจนแสดงให้เห็น Ipiwi1 ว่าเฉพาะเครื่อง upregulated ใน blastema ฟื้นฟู (สำหรับรายละเอียดดูรูป 4) ของ Ipiwi1 mRNA (A-ฉัน) และโปรตีนแปล (J-R) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัด (A J) และขึ้นอยู่กับ postamputation ห้าชั่วโมง (B, K) Ipiwi1 ไม่พบไซต์ฟื้นฟู โดยใน situ hybridization Ipiwi1 ถูก upregulated ใน blastema ฟื้นฟู (ลูกศร) 10 ชั่วโมง (C, L) และ postamputation 25 ชั่วโมง (D, M) จาก 42 ชั่วโมงเป็นต้นไป Ipiwi1 ยังคง downregulated ใน blastema ฟื้นฟู (E-R) และนิพจน์ Ipiwi1 และโปรตีนได้เฉพาะอยู่ใน blastema อวัยวะเพศ differentiating (เปิดศรใน E-Q) สเกลบาร์ 100 μmรูปแบบ: JPEG ขนาด: fileOpen 2MB ดาวน์โหลดข้อมูลthumbnailFigure 3 Ipiwi1 mRNA นิพจน์ (A-G) และโปรตีนแปล (A'-G') ในระหว่างการฟื้นฟูหลังการ หนึ่งชั่วโมงหลังจากตัด (A, A') ไม่สามารถตรวจพบ ipiwi1 นิพจน์ที่จะฟื้นฟูได้ หลังจากชั่วโมงที่ 10, ipiwi1 ก็ upregulated อยู่ใต้หนังกำพร้า (ศร) (B, B') ที่ postamputation 25 ชั่วโมง (C, C') สัดส่วนสำคัญของเซลล์ภายใน blastema ฟื้นฟูได้ ipiwi1 บวก 48 ชั่วโมงนับจาก นิพจน์ ipiwi1 และโปรตีนมีอยู่ใน blastema อวัยวะเพศ differentiating (เปิดลูกศร D F') (G, G') หลังจาก 76 h นิพจน์ ipiwi1 ถึงระดับเริ่มต้น สเกลบาร์ 50 μmเราตรวจสอบค่าของ ipiwi1 ตลอดระยะต่าง ๆ ของ postembryonic การพัฒนา (รูป 4) ต่อไป ใน I. สดขีด pulchra เล็ก parenchymally อยู่ somatic neoblasts และหลายขนาดใหญ่ ipiwi1 บวก primordial เจิร์มเซลล์มีอยู่ในภาคกลางของสัตว์ (ตัวเลข 4A, F) ผู้ใหญ่ ipiwi1 บวกเซลล์ให้ลิ้มลอง และรังไข่และเรายืนยันลักษณะของเซลล์เหล่านี้จากคู่ฉลากกับการ I. pulchra nanos เฉพาะโพรบ (เด Mulder ยกเลิกประกาศ) ของเซลล์จมูก primordial pulchra I. สดขีดแนะนำแบ่งแยกบรรทัดจมูกในนกชนิดนี้เป็นตัวอ่อน จำนวนบวกเซลล์เพิ่มขึ้นถึงสี่วันลงฟัก (เลข. 4B, G) และสีลิ้ม ipiwi1 ทั้งหมดมีอยู่หลังหนึ่งสัปดาห์ (ตัวเลข 4C, H) ipiwi1 สามารถเข้าใจห่วงโซ่ของการพัฒนาไข่หลังจาก 10 วันของการพัฒนา postembryonic (ตัวเลขได้ 4D ฉัน) หมายเลขของ ipiwi1 แสดง somatic สเต็มเซลล์ค่อย ๆ เพิ่มขึ้นในระหว่างการพัฒนา postembryonic แหวนรูปโครงสร้างของ ipiwi1 บวกเซลล์คิด blastema อวัยวะเพศ (รูป. 4e-fe กลไก), โครงสร้างเหมือนกับ blastema อวัยวะเพศ differentiating หลัง 42 ชั่วโมงชั่วโมงฟื้นฟู (เปรียบเทียบกับตัวเลข 3G) 68 บทบาทสำคัญของ neoblasts เป็นที่ชัดเจน โดยรักษาด้วย ipiwi1 dsRNA ในระหว่างการพัฒนา การทำงานเคาะลงของ ipiwi1 ในการพัฒนาหนอนอีกครั้ง
การแปล กรุณารอสักครู่..
การแสดงออก Ipiwi1 ในผู้ใหญ่ในระหว่างการฟื้นฟูและในระหว่างการพัฒนา
ต่อไปเราวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีน Piwi เหมือนใน Isodiametra สวยงามในผู้ใหญ่ในระหว่างการพัฒนาฟื้นฟูความอดอยากและหลังจากการฉายรังสี จากรวี I. เราได้แยกสองยีน Piwi เหมือน ipiwi1 และ ipiwi2 (แฟ้มเพิ่มเติมที่ 1 และ 2 รูป. S1, S2) ทั้งที่ประกอบไปด้วยป่าสงวนโดเมน Piwi และลาปาซ (แฟ้มเพิ่มเติม 3 รูป. S3) ซึ่ง เป็นลักษณะเฉพาะสำหรับสมาชิกของ Piwi / ครอบครัวที่ผ่านมา [46,47] เปรียบได้กับชีวิตการศึกษามากที่สุดเพื่อให้ห่างไกล ipiwi2 ดูเหมือนจะมีการแสดงออกสายเชื้อโรคเฉพาะ (แฟ้มเพิ่มเติม 4 ตัวเลข. S4A-C) ที่น่าสนใจ ipiwi1 แสดงให้เห็นว่านอกเหนือไปจากเส้นจมูก, รูปแบบการแสดงออกขยายไปยังเซลล์ต้นกำเนิดจากร่างกาย (รูปที่ 2). สถานการณ์ที่รู้จักจาก rhabditophoran flatworms ฟองน้ำและ cnidarians [33,36,37,43-45] ดังนั้นเราจึงเพ่งความสนใจในการศึกษาเกี่ยวกับ ipiwi1 นี้ เพื่อ จำกัด โปรตีน Ipiwi1 เราได้สร้างแอนติบอดีโพลีเฉพาะ (แฟ้มเพิ่มเติม 4 รูป S4F.). แฟ้มเพิ่มเติมที่ 1 รูปที่ S1: ลำดับเบสและคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน Ipiwi1 โดเมนอนุรักษ์ PAZ และ Piwi ไฮไลต์สีฟ้า (PAZ) และสีเขียว (Piwi) กล่อง Piwi ภายในโดเมน Piwi ถูกทำเครื่องหมายสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีการขีดเส้นใต้และกล้าได้กล้าเสีย ไพร ISH มีการขีดเส้นใต้ที่อยู่ในลำดับ จำนวนการเข้าสำหรับ Ipiwi1 (AM942741). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 3.2 ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 2 รูปที่ S2: ลำดับเบสและคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน Ipiwi2 โดเมนอนุรักษ์ PAZ และ Piwi จะถูกเน้นด้วยสีฟ้า (PAZ) และสีเขียว (Piwi) กล่อง Piwi ภายในโดเมน Piwi ถูกทำเครื่องหมายสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีการขีดเส้นใต้และกล้าได้กล้าเสีย ไพร ISH มีการขีดเส้นใต้ที่อยู่ในลำดับ จำนวนการเข้าสำหรับ Ipiwi2 (AM942742). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 3.2 ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 3 รูปที่ S3 :. การจัดตำแหน่งของยีนที่คาดการณ์ Piwi เหมือนจากรวี I. กับยีน Piwi เหมือนจากสายพันธุ์อื่น ๆ (A) อะมิโนกรดจัดตำแหน่งของโดเมน PAZ อนุรักษ์ (B) อะมิโนกรดจัดตำแหน่งของโดเมน Piwi อนุรักษ์ กล่อง Piwi เป็นไฮไลต์สีม่วง กรดอะมิโนแสดงด้วยเครื่องหมายดอกจันสีเขียวควรจะสร้างกระเป๋าผูกพันสำหรับกลุ่ม 5'phosphate ของอาร์เอ็นเอที่มีผลผูกพัน ดอกจันสีแดงบ่งบอกถึงสารตกค้าง carboxylate ใช้งานเว็บไซต์สมมุติ RNase กรดอะมิโนที่ระบุไว้ในสีม่วงสามารถแยกแยะความแตกต่างของสมาชิก Piwi และ Argonaute อนุวงศ์ หมายเลขภาคยานุวัติ Genbank: Isodiametra รวี Ipiwi1 (AM942741); Isodiametra รวี Ipiwi2 (AM942742); macrostomum lignano Macpiwi (AM942740); Schmidtea Mediterranea Smedwi1 (DQ186985) Smedwi2 (DQ186986); Dugesia japonica DjPiwi1 (AJ865376); Podocoryne carnea Cniwi (AAS01181); Caenorhabditis elegans PRG1 (NP492121); แมลงวันทอง DmPiwi (AF104354); Strongylocentrotus purpuratus Seawi (AY014899); ตุ๊ด sapiens Hiwi (AF104260). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 4MB ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 4 รูปที่ S4: นิพจน์ Ipiwi2, Ipiwi1 และ Ipiwi2 ยานสำรวจความรู้สึกควบคุม Ipiwi1 ดวงตะวันและการควบคุมการฉายรังสี Ipiwi2 ทั้งติดในแหล่งกำเนิดพันธุ์ (A) ที่มีรายละเอียดในการแสดงออกในอัณฑะ (t) (B) และในไข่พัฒนา (DE) (C) (D) การควบคุมความรู้สึก Ipiwi1 (E) การควบคุมความรู้สึก Ipiwi2 (F) ดวงตะวันแอนติบอดีโพลี Ipiwi1 แสดงสัญญาณที่คาดว่าขนาด (100 กิโลดาลตัน) (GI) รังสีฮาร์ด X ray 60 สีเทาไม่ได้ผลใน downregulation อย่างมีนัยสำคัญของยีนทำความสะอาดห้อง Isodiametra รวียืดตัวอัลฟาปัจจัย (IpEfα) IpEfα Control (G); การแสดงออกIpEfαหลังจากหนึ่งวัน (H) และหนึ่งสัปดาห์ (I) postirradiation บาร์ขนาด 100 ไมโครเมตร (A, D, E, G, H, I), 50 ไมครอนใน (B) และ 25 ไมครอน (C). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 767KB ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลthumbnailFigure 2. การแสดงออก Ipiwi1 mRNA (AC ) และท้องถิ่นโปรตีน (DG) และ BrdU / ipiwi1 (H) การติดฉลากคู่ใน I. สวยงาม (A) ติดทั้ง ipiwi1 ในแหล่งกำเนิดพันธุ์ของตัวอย่างที่เป็นผู้ใหญ่ (B) รายละเอียดของไข่พัฒนา (DE) และอัณฑะ (t) (C) ระนาบโฟกัสครีบหลังแสดง ipiwi1 mRNA แสดงใน neoblasts (หี่เปิด) (D, E) ประมาณการ Confocal ของการแปลโปรตีน Ipiwi1 ในอัณฑะและไข่พัฒนา (D) และใน neoblasts (NB) (E) (F) รายละเอียดของภาคหน้าของ (E) แสดงให้เห็นถึง Ipiwi1 เซลล์บวก (หี่เปิด) (G) รายละเอียดของภูมิภาคหลังของ (D) แสดงให้เห็นถึง Ipiwi1 เซลล์บวก (เปิดหี่) (H) การย้อมสีคู่ของเซลล์ต้นกำเนิดใน S เฟส (สีเขียว) และเซลล์บวก ipiwi1 (สีแดง) ฉาย Confocal (1.02 ไมโครเมตร) แสดงให้เห็นการปรากฏตัวของ BrdU เฉพาะเซลล์ที่มีข้อความ (ลูกศรสีเขียว), ipiwi1 เฉพาะเซลล์ที่มีข้อความ (ลูกศรสีแดง) เช่นเดียวกับ BrdU / Piwi ติดป้ายคู่เซลล์ต้นกำเนิด (ลูกศรสีเหลือง) ตัวเลขทั้งหมดก่อนเป็นไปด้านบน บาร์สเกล (A, D, E) 100 ไมครอน; (B, C, FH) 50 ไมครอน. ในสัตว์ผู้ใหญ่ ipiwi1 mRNA และโปรตีนได้รับการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นใน subpopulation ของเซลล์ต้นกำเนิดร่างกายและอวัยวะสืบพันธุ์ (รูปที่. 2) ในขณะที่การสอบสวนความรู้สึกไม่ได้แสดงสัญญาณใด ๆ (แฟ้มเพิ่มเติม 4 รูป S4D) Ipiwi1 เซลล์ในเชิงบวกในอัณฑะประกอบด้วยสองวงในด้านข้างของสัตว์ซึ่งประกอบด้วย spermatogonia และ spermatocytes (รูป. 2A, B, D) ทุกขั้นตอนของเซลล์สืบพันธุ์หญิงแสดง ipiwi1 รวมทั้ง oogonia, เซลล์ไข่และไข่สุก (รูป. 2A, B, D) เรามีการแปลเพิ่มเติม ipiwi1 แสดงออกใน neoblasts หลังในภูมิภาคเพื่อ statocyst แต่ไม่ได้อยู่ในส่วนท้ายหลังของสัตว์ (รูป. 2A, C) ในทางตรงกันข้ามไม่กี่ Ipiwi1 โปรตีนเซลล์บวกนอกจากนี้ยังพบได้รับก่อนที่จะ statocyst (รูป. 2E, F) และในภูมิภาคหาง (รูป. 2G) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการทำงานของโปรตีน Ipiwi1 ยังอยู่ในความแตกต่าง neoblasts สถานการณ์คล้ายกับ triclad flatworms [33,34,37] การติดฉลากคู่ของ ipiwi1 กับ BrdU เปิดเผย ipiwi1 เฉพาะเซลล์ติดป้ายเซลล์ที่มีข้อความ BrdU เท่านั้นเช่นเดียวกับ ipiwi1 / BrdU ติดป้ายคู่เซลล์ต้นกำเนิด (รูป. 2H) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ipiwi1 ถูก จำกัด ให้เพียง subpopulation ของ neoblasts. กระบวนการของการฟื้นฟูใน flatworms Acoel ถูกตรวจสอบก่อนหน้านี้ทั้งในระดับก้านและ Immunohistochemical แต่ไม่มีการวิเคราะห์โมเลกุลได้รับการดำเนินการถึงวันที่ [23,24,26,30,48, 49] ที่นี่เราแสดงการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออก ipiwi1 ในระหว่างขั้นตอนต่อเนื่องของการฟื้นฟูหาง (รูปที่. 3, แฟ้มเพิ่มเติม 5 รูป. S5) (สปีชีส์นี้จะไม่สามารถที่จะดำเนินการฟื้นฟูก่อน) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัดแขนขาเริ่มต้น ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบได้ที่เว็บไซต์การฟื้นฟู (รูป. 3A, ') 10 ชั่วโมง postamputation แต่ขอบเล็ก ๆ ของเซลล์บวก ipiwi1 กลายเป็นมองเห็นด้านล่างหนังกำพร้า (รูป. 3B, B ') ใน 25 ชั่วโมงหลังจากการตัดแขนขา, ipiwi1 ถูก upregulated ภายใน Blastema ขนาดเล็ก (รูป. 3C, C ') จาก 48-68 ชั่วโมงของการฟื้นฟูการแสดงออก ipiwi1 ถูกตรวจพบใน neoblasts ที่ถูกจัดอยู่ในโครงสร้างแหวนรูป (รูป. 3D-F) และสรุปภายหลังการพัฒนาอวัยวะสืบพันธุ์ การแสดงออก Ipiwi1 ถูก upregulated เฉพาะในท้องถิ่นภายใน Blastema ฟื้นฟู แต่ไม่ได้อยู่ในภูมิภาคด้านหน้าของสัตว์ (แฟ้มเพิ่มเติม 5 รูป. S5) ในขณะที่การฟื้นฟูดำเนินการแตกต่างของเซลล์ blastemal ถูกขนานค่อยๆลดลงในการแสดงออกของ ipiwi1 (ตัวเลข 3F-G '.). แฟ้มเพิ่มเติม 5 รูป S5: ภาพรวมของการแสดงออก Ipiwi1 และการเปลี่ยนแปลงในช่วงการฟื้นฟูหลังใน Isodiametra สวยงาม นี้ภาพรวมทั้งภูเขาอย่างชัดเจนแสดงให้เห็นว่าเป็นเพียงการ Ipiwi1 upregulated ท้องถิ่นภายใน Blastema ฟื้นฟู (สำหรับรายละเอียดดูรูปที่. 4) การแสดงออกของ mRNA Ipiwi1 (AI) และท้องถิ่นโปรตีน (JR) หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่ตัด (; J) และถึงห้าชั่วโมง postamputation (B, K) Ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบได้ที่เว็บไซต์การฟื้นฟูโดยในแหล่งกำเนิดพันธุ์ Ipiwi1 ถูก upregulated ใน Blastema ฟื้นฟู (ลูกศร) หลังจาก 10 ชั่วโมง (C, L) และ 25 ชั่วโมง postamputation (D, M) จาก 42 ชั่วโมงเป็นต้นไป Ipiwi1 ยังคงอยู่ใน downregulated Blastema ฟื้นฟู (ER) และการแสดงออก Ipiwi1 และโปรตีนเพียงอยู่ใน Blastema อวัยวะเพศแตกต่าง (ลูกศรที่เปิดอยู่ใน EQ) เครื่องชั่งน้ำหนักแท่ง 100 ไมโครเมตร. รูปแบบ: JPEG ขนาด: 2MB ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลthumbnailFigure 3. การแสดงออก Ipiwi1 mRNA (AG) และท้องถิ่นโปรตีน (a'-G ') ในระหว่างการฟื้นฟูหลัง หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่ตัด (, '), การแสดงออก ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบได้ที่เว็บไซต์การฟื้นฟู หลังจาก 10 ชั่วโมง ipiwi1 ถูก upregulated ด้านล่างหนังกำพร้า (ลูกศร) (B, B ') 25 ชั่วโมงที่ postamputation (C, C ') สัดส่วนที่สำคัญของเซลล์ภายใน Blastema ฟื้นฟูเป็นบวก ipiwi1 จาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไปการแสดงออก ipiwi1 และโปรตีนที่อยู่ในอวัยวะเพศ Blastema ความแตกต่าง (ลูกศรที่เปิดอยู่ใน D-F ') (G, G ') หลังจาก 76 ชั่วโมง, การแสดงออก ipiwi1 ถึงระดับเริ่มต้น บาร์ขนาด 50 ไมครอน. ต่อไปเราตรวจสอบการแสดงออกของ ipiwi1 ตลอดขั้นตอนที่แตกต่างกันของการพัฒนา postembryonic (รูปที่ 4). ในรวี I. ฟักสด parenchymally เล็ก ๆ ตั้งอยู่ neoblasts ร่างกายและหลายขนาดใหญ่ ipiwi1 บวกเซลล์สืบพันธุ์แรกที่ถูกนำเสนอในภาคกลางของสัตว์ (รูป. 4A, F) ที่มีขนาดใหญ่ ipiwi1 เซลล์บวกให้สูงขึ้นเพื่ออัณฑะและรังไข่และเราได้รับการยืนยันลักษณะของเซลล์เหล่านี้โดยการติดฉลากคู่กับ I. รวีสอบสวนนาโนที่เฉพาะเจาะจง (De Mulder, ไม่ถูกเผยแพร่) การปรากฏตัวของเซลล์สืบพันธุ์แรกในฟักสด I. รวีแนะแยกตัวอ่อนของสายเชื้อโรคในสายพันธุ์นี้ จำนวน ipiwi1 เซลล์บวกเพิ่มขึ้นถึงสี่วันโพสต์ฟัก (รูป. 4B, G) และ ipiwi1 ที่แตกต่างอัณฑะเปื้อนอยู่ในปัจจุบันหลังจากหนึ่งสัปดาห์ (รูป. 4C, H) โซ่ของไข่พัฒนาจะไม่สามารถแยกแยะหลังจาก 10 วันของการพัฒนา postembryonic (รูป. 4D ผม) จำนวน ipiwi1 แสดงเซลล์ต้นกำเนิดจากร่างกายเพิ่มขึ้นเรื่อย ๆ ในระหว่างการพัฒนา postembryonic แหวนโครงสร้างรูป ipiwi1 เซลล์บวกคิดเป็นอวัยวะเพศ Blastema (รูป. 4E) โครงสร้างเหมือนกับ Blastema อวัยวะเพศแตกต่างหลังจาก 42 ชั่วโมงถึง 68 ชั่วโมงของการฟื้นฟู (เปรียบเทียบกับรูป. 3G) บทบาทที่สำคัญของ neoblasts ก็เห็นได้ชัดจากการรักษาด้วย ipiwi1 dsRNA ในระหว่างการพัฒนา ทำงานเคาะลงของ ipiwi1 ในการพัฒนาหนอนอีกครั้ง
ต่อไปเราวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีน Piwi เหมือนใน Isodiametra สวยงามในผู้ใหญ่ในระหว่างการพัฒนาฟื้นฟูความอดอยากและหลังจากการฉายรังสี จากรวี I. เราได้แยกสองยีน Piwi เหมือน ipiwi1 และ ipiwi2 (แฟ้มเพิ่มเติมที่ 1 และ 2 รูป. S1, S2) ทั้งที่ประกอบไปด้วยป่าสงวนโดเมน Piwi และลาปาซ (แฟ้มเพิ่มเติม 3 รูป. S3) ซึ่ง เป็นลักษณะเฉพาะสำหรับสมาชิกของ Piwi / ครอบครัวที่ผ่านมา [46,47] เปรียบได้กับชีวิตการศึกษามากที่สุดเพื่อให้ห่างไกล ipiwi2 ดูเหมือนจะมีการแสดงออกสายเชื้อโรคเฉพาะ (แฟ้มเพิ่มเติม 4 ตัวเลข. S4A-C) ที่น่าสนใจ ipiwi1 แสดงให้เห็นว่านอกเหนือไปจากเส้นจมูก, รูปแบบการแสดงออกขยายไปยังเซลล์ต้นกำเนิดจากร่างกาย (รูปที่ 2). สถานการณ์ที่รู้จักจาก rhabditophoran flatworms ฟองน้ำและ cnidarians [33,36,37,43-45] ดังนั้นเราจึงเพ่งความสนใจในการศึกษาเกี่ยวกับ ipiwi1 นี้ เพื่อ จำกัด โปรตีน Ipiwi1 เราได้สร้างแอนติบอดีโพลีเฉพาะ (แฟ้มเพิ่มเติม 4 รูป S4F.). แฟ้มเพิ่มเติมที่ 1 รูปที่ S1: ลำดับเบสและคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน Ipiwi1 โดเมนอนุรักษ์ PAZ และ Piwi ไฮไลต์สีฟ้า (PAZ) และสีเขียว (Piwi) กล่อง Piwi ภายในโดเมน Piwi ถูกทำเครื่องหมายสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีการขีดเส้นใต้และกล้าได้กล้าเสีย ไพร ISH มีการขีดเส้นใต้ที่อยู่ในลำดับ จำนวนการเข้าสำหรับ Ipiwi1 (AM942741). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 3.2 ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 2 รูปที่ S2: ลำดับเบสและคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน Ipiwi2 โดเมนอนุรักษ์ PAZ และ Piwi จะถูกเน้นด้วยสีฟ้า (PAZ) และสีเขียว (Piwi) กล่อง Piwi ภายในโดเมน Piwi ถูกทำเครื่องหมายสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีการขีดเส้นใต้และกล้าได้กล้าเสีย ไพร ISH มีการขีดเส้นใต้ที่อยู่ในลำดับ จำนวนการเข้าสำหรับ Ipiwi2 (AM942742). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 3.2 ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 3 รูปที่ S3 :. การจัดตำแหน่งของยีนที่คาดการณ์ Piwi เหมือนจากรวี I. กับยีน Piwi เหมือนจากสายพันธุ์อื่น ๆ (A) อะมิโนกรดจัดตำแหน่งของโดเมน PAZ อนุรักษ์ (B) อะมิโนกรดจัดตำแหน่งของโดเมน Piwi อนุรักษ์ กล่อง Piwi เป็นไฮไลต์สีม่วง กรดอะมิโนแสดงด้วยเครื่องหมายดอกจันสีเขียวควรจะสร้างกระเป๋าผูกพันสำหรับกลุ่ม 5'phosphate ของอาร์เอ็นเอที่มีผลผูกพัน ดอกจันสีแดงบ่งบอกถึงสารตกค้าง carboxylate ใช้งานเว็บไซต์สมมุติ RNase กรดอะมิโนที่ระบุไว้ในสีม่วงสามารถแยกแยะความแตกต่างของสมาชิก Piwi และ Argonaute อนุวงศ์ หมายเลขภาคยานุวัติ Genbank: Isodiametra รวี Ipiwi1 (AM942741); Isodiametra รวี Ipiwi2 (AM942742); macrostomum lignano Macpiwi (AM942740); Schmidtea Mediterranea Smedwi1 (DQ186985) Smedwi2 (DQ186986); Dugesia japonica DjPiwi1 (AJ865376); Podocoryne carnea Cniwi (AAS01181); Caenorhabditis elegans PRG1 (NP492121); แมลงวันทอง DmPiwi (AF104354); Strongylocentrotus purpuratus Seawi (AY014899); ตุ๊ด sapiens Hiwi (AF104260). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 4MB ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 4 รูปที่ S4: นิพจน์ Ipiwi2, Ipiwi1 และ Ipiwi2 ยานสำรวจความรู้สึกควบคุม Ipiwi1 ดวงตะวันและการควบคุมการฉายรังสี Ipiwi2 ทั้งติดในแหล่งกำเนิดพันธุ์ (A) ที่มีรายละเอียดในการแสดงออกในอัณฑะ (t) (B) และในไข่พัฒนา (DE) (C) (D) การควบคุมความรู้สึก Ipiwi1 (E) การควบคุมความรู้สึก Ipiwi2 (F) ดวงตะวันแอนติบอดีโพลี Ipiwi1 แสดงสัญญาณที่คาดว่าขนาด (100 กิโลดาลตัน) (GI) รังสีฮาร์ด X ray 60 สีเทาไม่ได้ผลใน downregulation อย่างมีนัยสำคัญของยีนทำความสะอาดห้อง Isodiametra รวียืดตัวอัลฟาปัจจัย (IpEfα) IpEfα Control (G); การแสดงออกIpEfαหลังจากหนึ่งวัน (H) และหนึ่งสัปดาห์ (I) postirradiation บาร์ขนาด 100 ไมโครเมตร (A, D, E, G, H, I), 50 ไมครอนใน (B) และ 25 ไมครอน (C). รูปแบบ: JPEG ขนาด: 767KB ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลthumbnailFigure 2. การแสดงออก Ipiwi1 mRNA (AC ) และท้องถิ่นโปรตีน (DG) และ BrdU / ipiwi1 (H) การติดฉลากคู่ใน I. สวยงาม (A) ติดทั้ง ipiwi1 ในแหล่งกำเนิดพันธุ์ของตัวอย่างที่เป็นผู้ใหญ่ (B) รายละเอียดของไข่พัฒนา (DE) และอัณฑะ (t) (C) ระนาบโฟกัสครีบหลังแสดง ipiwi1 mRNA แสดงใน neoblasts (หี่เปิด) (D, E) ประมาณการ Confocal ของการแปลโปรตีน Ipiwi1 ในอัณฑะและไข่พัฒนา (D) และใน neoblasts (NB) (E) (F) รายละเอียดของภาคหน้าของ (E) แสดงให้เห็นถึง Ipiwi1 เซลล์บวก (หี่เปิด) (G) รายละเอียดของภูมิภาคหลังของ (D) แสดงให้เห็นถึง Ipiwi1 เซลล์บวก (เปิดหี่) (H) การย้อมสีคู่ของเซลล์ต้นกำเนิดใน S เฟส (สีเขียว) และเซลล์บวก ipiwi1 (สีแดง) ฉาย Confocal (1.02 ไมโครเมตร) แสดงให้เห็นการปรากฏตัวของ BrdU เฉพาะเซลล์ที่มีข้อความ (ลูกศรสีเขียว), ipiwi1 เฉพาะเซลล์ที่มีข้อความ (ลูกศรสีแดง) เช่นเดียวกับ BrdU / Piwi ติดป้ายคู่เซลล์ต้นกำเนิด (ลูกศรสีเหลือง) ตัวเลขทั้งหมดก่อนเป็นไปด้านบน บาร์สเกล (A, D, E) 100 ไมครอน; (B, C, FH) 50 ไมครอน. ในสัตว์ผู้ใหญ่ ipiwi1 mRNA และโปรตีนได้รับการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นใน subpopulation ของเซลล์ต้นกำเนิดร่างกายและอวัยวะสืบพันธุ์ (รูปที่. 2) ในขณะที่การสอบสวนความรู้สึกไม่ได้แสดงสัญญาณใด ๆ (แฟ้มเพิ่มเติม 4 รูป S4D) Ipiwi1 เซลล์ในเชิงบวกในอัณฑะประกอบด้วยสองวงในด้านข้างของสัตว์ซึ่งประกอบด้วย spermatogonia และ spermatocytes (รูป. 2A, B, D) ทุกขั้นตอนของเซลล์สืบพันธุ์หญิงแสดง ipiwi1 รวมทั้ง oogonia, เซลล์ไข่และไข่สุก (รูป. 2A, B, D) เรามีการแปลเพิ่มเติม ipiwi1 แสดงออกใน neoblasts หลังในภูมิภาคเพื่อ statocyst แต่ไม่ได้อยู่ในส่วนท้ายหลังของสัตว์ (รูป. 2A, C) ในทางตรงกันข้ามไม่กี่ Ipiwi1 โปรตีนเซลล์บวกนอกจากนี้ยังพบได้รับก่อนที่จะ statocyst (รูป. 2E, F) และในภูมิภาคหาง (รูป. 2G) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการทำงานของโปรตีน Ipiwi1 ยังอยู่ในความแตกต่าง neoblasts สถานการณ์คล้ายกับ triclad flatworms [33,34,37] การติดฉลากคู่ของ ipiwi1 กับ BrdU เปิดเผย ipiwi1 เฉพาะเซลล์ติดป้ายเซลล์ที่มีข้อความ BrdU เท่านั้นเช่นเดียวกับ ipiwi1 / BrdU ติดป้ายคู่เซลล์ต้นกำเนิด (รูป. 2H) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ipiwi1 ถูก จำกัด ให้เพียง subpopulation ของ neoblasts. กระบวนการของการฟื้นฟูใน flatworms Acoel ถูกตรวจสอบก่อนหน้านี้ทั้งในระดับก้านและ Immunohistochemical แต่ไม่มีการวิเคราะห์โมเลกุลได้รับการดำเนินการถึงวันที่ [23,24,26,30,48, 49] ที่นี่เราแสดงการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออก ipiwi1 ในระหว่างขั้นตอนต่อเนื่องของการฟื้นฟูหาง (รูปที่. 3, แฟ้มเพิ่มเติม 5 รูป. S5) (สปีชีส์นี้จะไม่สามารถที่จะดำเนินการฟื้นฟูก่อน) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัดแขนขาเริ่มต้น ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบได้ที่เว็บไซต์การฟื้นฟู (รูป. 3A, ') 10 ชั่วโมง postamputation แต่ขอบเล็ก ๆ ของเซลล์บวก ipiwi1 กลายเป็นมองเห็นด้านล่างหนังกำพร้า (รูป. 3B, B ') ใน 25 ชั่วโมงหลังจากการตัดแขนขา, ipiwi1 ถูก upregulated ภายใน Blastema ขนาดเล็ก (รูป. 3C, C ') จาก 48-68 ชั่วโมงของการฟื้นฟูการแสดงออก ipiwi1 ถูกตรวจพบใน neoblasts ที่ถูกจัดอยู่ในโครงสร้างแหวนรูป (รูป. 3D-F) และสรุปภายหลังการพัฒนาอวัยวะสืบพันธุ์ การแสดงออก Ipiwi1 ถูก upregulated เฉพาะในท้องถิ่นภายใน Blastema ฟื้นฟู แต่ไม่ได้อยู่ในภูมิภาคด้านหน้าของสัตว์ (แฟ้มเพิ่มเติม 5 รูป. S5) ในขณะที่การฟื้นฟูดำเนินการแตกต่างของเซลล์ blastemal ถูกขนานค่อยๆลดลงในการแสดงออกของ ipiwi1 (ตัวเลข 3F-G '.). แฟ้มเพิ่มเติม 5 รูป S5: ภาพรวมของการแสดงออก Ipiwi1 และการเปลี่ยนแปลงในช่วงการฟื้นฟูหลังใน Isodiametra สวยงาม นี้ภาพรวมทั้งภูเขาอย่างชัดเจนแสดงให้เห็นว่าเป็นเพียงการ Ipiwi1 upregulated ท้องถิ่นภายใน Blastema ฟื้นฟู (สำหรับรายละเอียดดูรูปที่. 4) การแสดงออกของ mRNA Ipiwi1 (AI) และท้องถิ่นโปรตีน (JR) หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่ตัด (; J) และถึงห้าชั่วโมง postamputation (B, K) Ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบได้ที่เว็บไซต์การฟื้นฟูโดยในแหล่งกำเนิดพันธุ์ Ipiwi1 ถูก upregulated ใน Blastema ฟื้นฟู (ลูกศร) หลังจาก 10 ชั่วโมง (C, L) และ 25 ชั่วโมง postamputation (D, M) จาก 42 ชั่วโมงเป็นต้นไป Ipiwi1 ยังคงอยู่ใน downregulated Blastema ฟื้นฟู (ER) และการแสดงออก Ipiwi1 และโปรตีนเพียงอยู่ใน Blastema อวัยวะเพศแตกต่าง (ลูกศรที่เปิดอยู่ใน EQ) เครื่องชั่งน้ำหนักแท่ง 100 ไมโครเมตร. รูปแบบ: JPEG ขนาด: 2MB ดาวน์โหลด FileOpen ข้อมูลthumbnailFigure 3. การแสดงออก Ipiwi1 mRNA (AG) และท้องถิ่นโปรตีน (a'-G ') ในระหว่างการฟื้นฟูหลัง หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่ตัด (, '), การแสดงออก ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบได้ที่เว็บไซต์การฟื้นฟู หลังจาก 10 ชั่วโมง ipiwi1 ถูก upregulated ด้านล่างหนังกำพร้า (ลูกศร) (B, B ') 25 ชั่วโมงที่ postamputation (C, C ') สัดส่วนที่สำคัญของเซลล์ภายใน Blastema ฟื้นฟูเป็นบวก ipiwi1 จาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไปการแสดงออก ipiwi1 และโปรตีนที่อยู่ในอวัยวะเพศ Blastema ความแตกต่าง (ลูกศรที่เปิดอยู่ใน D-F ') (G, G ') หลังจาก 76 ชั่วโมง, การแสดงออก ipiwi1 ถึงระดับเริ่มต้น บาร์ขนาด 50 ไมครอน. ต่อไปเราตรวจสอบการแสดงออกของ ipiwi1 ตลอดขั้นตอนที่แตกต่างกันของการพัฒนา postembryonic (รูปที่ 4). ในรวี I. ฟักสด parenchymally เล็ก ๆ ตั้งอยู่ neoblasts ร่างกายและหลายขนาดใหญ่ ipiwi1 บวกเซลล์สืบพันธุ์แรกที่ถูกนำเสนอในภาคกลางของสัตว์ (รูป. 4A, F) ที่มีขนาดใหญ่ ipiwi1 เซลล์บวกให้สูงขึ้นเพื่ออัณฑะและรังไข่และเราได้รับการยืนยันลักษณะของเซลล์เหล่านี้โดยการติดฉลากคู่กับ I. รวีสอบสวนนาโนที่เฉพาะเจาะจง (De Mulder, ไม่ถูกเผยแพร่) การปรากฏตัวของเซลล์สืบพันธุ์แรกในฟักสด I. รวีแนะแยกตัวอ่อนของสายเชื้อโรคในสายพันธุ์นี้ จำนวน ipiwi1 เซลล์บวกเพิ่มขึ้นถึงสี่วันโพสต์ฟัก (รูป. 4B, G) และ ipiwi1 ที่แตกต่างอัณฑะเปื้อนอยู่ในปัจจุบันหลังจากหนึ่งสัปดาห์ (รูป. 4C, H) โซ่ของไข่พัฒนาจะไม่สามารถแยกแยะหลังจาก 10 วันของการพัฒนา postembryonic (รูป. 4D ผม) จำนวน ipiwi1 แสดงเซลล์ต้นกำเนิดจากร่างกายเพิ่มขึ้นเรื่อย ๆ ในระหว่างการพัฒนา postembryonic แหวนโครงสร้างรูป ipiwi1 เซลล์บวกคิดเป็นอวัยวะเพศ Blastema (รูป. 4E) โครงสร้างเหมือนกับ Blastema อวัยวะเพศแตกต่างหลังจาก 42 ชั่วโมงถึง 68 ชั่วโมงของการฟื้นฟู (เปรียบเทียบกับรูป. 3G) บทบาทที่สำคัญของ neoblasts ก็เห็นได้ชัดจากการรักษาด้วย ipiwi1 dsRNA ในระหว่างการพัฒนา ทำงานเคาะลงของ ipiwi1 ในการพัฒนาหนอนอีกครั้ง
การแปล กรุณารอสักครู่..
ipiwi1 การแสดงออกในผู้ใหญ่ ในช่วงฟื้นฟูและในระหว่างการพัฒนา
ต่อไป เราวิเคราะห์การแสดงออกของยีนในการ piwi เหมือน isodiametra พัลชราในผู้ใหญ่ในระหว่างการพัฒนา ฟื้นฟู ความอดอยากและหลังการฉายรังสี จากผมพัลชรา เราได้แยกสอง piwi เหมือนยีน และ ipiwi1 ipiwi2 เพิ่มเติม ( ไฟล์ที่ 1 และ 2 ตัวเลข S1 , S2 )ทั้งอนุรักษ์ และประกอบด้วย piwi ปาซโดเมน ( เพิ่มเติมไฟล์ 3 รูป S3 ) ซึ่งเป็นลักษณะสำหรับสมาชิกของ piwi / ที่ผ่านมาครอบครัว [ 46,47 ] เปรียบได้กับสิ่งมีชีวิตมากที่สุด เรียนจน ipiwi2 ปรากฏว่ามีสายเชื้อเฉพาะการแสดงออก ( เพิ่มเติมไฟล์ 4 , ตัวเลข s4a-c ) น่าสนใจ ipiwi1 พบนอกจากเชื้อโรคบรรทัดการแสดงออกแบบขยายโซมาติกสเต็มเซลล์ ( รูปที่ 2 ) สถานการณ์ที่รู้จักกันเท่านั้น จาก rhabditophoran flatworms sponges 33,36,37,43-45 เลอาโคอัน [ และ ] ดังนั้นเราจึงเน้นในการศึกษา ipiwi1 . การจำกัดโปรตีน ipiwi1 เราได้สร้างขึ้นโดยใช้แอนติบอดี ( เพิ่มเติมไฟล์ 4 รูป s4f ) .
เพิ่มเติมไฟล์ 1 . รูปที่ : :ลำดับนิวคลีโอไทด์และคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน ipiwi1 . อนุรักษ์ ปาซ piwi โดเมนและเน้นสีฟ้า ( ปาส ) และสีเขียว ( piwi ) การ piwi กล่องภายใน piwi โดเมนมีการทำเครื่องหมายในสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีขีดเส้นใต้ และเครื่องหมายในตัวหนา ไพรเมอร์ที่อังกฤษ ที่ขีดเส้นใต้ไว้ในลำดับ เปลี่ยนเบอร์ ipiwi1 ( am942741 ) .
รูปแบบ : ขนาดภาพ JPEG : 3.2mb fileopen
ดาวน์โหลดข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 2 รูป S2 : ลำดับนิวคลีโอไทด์และคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน ipiwi2 . และอนุรักษ์ ปาซ piwi โดเมนมีการเน้นสีฟ้า ( ปาส ) และสีเขียว ( piwi ) การ piwi กล่องภายใน piwi โดเมนมีการทำเครื่องหมายในสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีขีดเส้นใต้ และเครื่องหมายในตัวหนา ไพรเมอร์ที่อังกฤษ ที่ขีดเส้นใต้ไว้ในลำดับ เปลี่ยนเบอร์ ipiwi2 ( am942742 ) .
รูปแบบ JPEG : ขนาด : 3ดาวน์โหลดข้อมูลเพิ่มเติม fileopen 2
3 ไฟล์ รูป S3 : . แนวคาดคะเน piwi เหมือนยีนจากฉันพัลชรากับ piwi เหมือนยีนจากชนิดอื่น ๆ ( ก ) ตำแหน่งของกรดอะมิโนที่ป่าสงวน ปาซโดเมน ( ข ) ตำแหน่งของกรดอะมิโนที่สามารถ piwi โดเมน การ piwi กล่องเน้นสีม่วงกรดอะมิโนที่พบกับดอกจันสีเขียวควรจะสร้างกระเป๋าผูกสำหรับ 5'phosphate กลุ่มผูก RNA ดอกจันสีแดงบ่งบอกถึงการแสดงออกเลสงานเว็บไซต์คาร์บอกซิเลตที่ตกค้าง กรดอะมิโนที่พบในสีม่วงสามารถแยกแยะและสมาชิกของ piwi argonaute subfamily . ขนาดหนังสือเลข isodiametra พัลชรา ipiwi1 ( am942741 ) ; isodiametra พัลชรา ipiwi2 ( am942742 )macrostomum 30% macpiwi ( am942740 ) ; schmidtea Mediterranea smedwi1 ( dq186985 ) smedwi2 ( dq186986 ) ; dugesia จาป djpiwi1 ( aj865376 ) ; podocoryne carnea cniwi ( aas01181 ) ; C ³ prg1 ( np492121 ) ; แมลงวันทอง dmpiwi ( af104354 ) ; strongylocentrotus purpuratus seawi ( ay014899 ) ; Homo sapiens hiwi ( af104260 ) .
รูปแบบ : ขนาด JPEG : 4 MB ดาวน์โหลด fileopen ข้อมูล
แฟ้มเพิ่มเติม 4 . รูป ipiwi2 S4 : การแสดงออก , และควบคุมความรู้สึกและ ipiwi1 ipiwi2 ipiwi1 , Western blot และรังสีการควบคุม ipiwi2 ทั้งภูเขาใน situ hybridization ( ) มีรายละเอียดของการแสดงออกในอัณฑะ ( T ) ( B ) และในการพัฒนาไข่ ( de ) ( C ) ( D ) ipiwi1 ควบคุมความรู้สึก ( E ) ipiwi2 ควบคุมความรู้สึก ( F ) ใช้ ipiwi1 blot ตะวันตกของแอนติบอดี ,แสดงสัญญาณที่คาดว่าขนาด 100 กิโล ) ( g-i ) หนัก x ray รังสี 60 สีเทาไม่ได้ส่งผลใน downregulation สําคัญของแม่บ้านยีน isodiametra พัลชรายืดตัวปัจจัย Alpha ( ipef α ) ipef αควบคุม ( g ) ; ipef αแสดงออกหลังจากหนึ่งวัน ( H ) และหนึ่งสัปดาห์ ( ฉัน ) postirradiation . ขนาดแท่ง 100 μ M ( A , D , E , G , H , I ) , 50 μ M ( B ) และ 25 μ M ( C )
: ขนาดภาพ JPEG : รูปแบบ767kb ดาวน์โหลด fileopen ข้อมูล
thumbnailfigure 2 การแสดงออกของยีน ipiwi1 ( แอร์ ) และจำกัดโปรตีน ( d-g ) และ brdu / ipiwi1 ( H ) คู่ฉลากในฉันพัลชรา . ( ) ipiwi1 ภูเขาทั้งในชนิดของตัวอย่างผู้ใหญ่ ( ข ) รายละเอียดของการพัฒนาไข่ ( de ) และอัณฑะ ( T ) ( C ) บนระนาบโฟกัสแสดง ipiwi1 mRNA แสดงออกใน neoblasts ( เปิดหัวลูกศร ) ( De ) การประมาณการของ ipiwi1 การแปลด้วยโปรตีนในอัณฑะและการพัฒนาไข่ ( D ) และใน neoblasts ( NB ) ( E ) ( ฉ ) รายละเอียดของส่วนหน้า ( E ) แสดงให้เห็นถึงเซลล์บวก ipiwi1 ( เปิดหัวลูกศร ) ( G ) รายละเอียดของด้านหลังของภูมิภาค ( D ) แสดงให้เห็นถึงเซลล์บวก ipiwi1 ( เปิดหัวลูกศร ) ( H ) คู่ staining สเต็มเซลล์ใน s-phase ( สีเขียว ) และเซลล์บวก ipiwi1 ( สีแดง )ฉายด้วย ( 1,02 μ M ) แสดงตนของ brdu แค่ป้ายเซลล์ ( ลูกศรสีเขียว ) , ipiwi1 แค่ป้ายเซลล์ ( ลูกศรสีแดง ) รวมทั้ง brdu / piwi คู่ labelled สเต็มเซลล์ ( ลูกศรสีเหลือง ) ตัวเลขทั้งหมดก่อน คือ ด้านบน แถบสเกล ( A , D , E ) 100 μ m ( B , C , f-h ) 50 เมตร
μสัตว์ในผู้ใหญ่ipiwi1 mRNA และโปรตีนเป็นภาษาท้องถิ่นใน subpopulation สเต็มเซลล์ทางกายและพัฒนา ( รูปที่ 2 ) ในขณะที่ความรู้สึกสอบสวนไม่ได้แสดงสัญญาณใด ๆเพิ่มเติม ( ไฟล์ 4 รูป s4d ) ipiwi1 บวกเซลล์ในอัณฑะประกอบด้วยสองแถบด้านข้างของสัตว์ซึ่งประกอบด้วย อัณฑะ และเจริญ ( ตัวเลข 2A , B , D )ขั้นตอนทั้งหมดของเซลล์สืบพันธุ์หญิงแสดง ipiwi1 กรัมและผู้ใหญ่รวมทั้งไข่ , ไข่ ( ตัวเลข 2A , B , D ) เราเพิ่มปริมาณ mRNA ของ ipiwi1 ในถิ่น neoblasts ในภูมิภาค หลังการ statocyst แต่ไม่ใช่ในปลายด้านหลังของสัตว์ ( ตัวเลข 2A , C ) ในทางตรงกันข้าม , บาง ipiwi1 บวกโปรตีนเซลล์พบว่า ก่อนการ statocyst ( ตัวเลข 2 ,F ) และหางภูมิภาค ( รูปที่ 2G ) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ipiwi1 โปรตีนหน้าที่ในการ neoblasts สถานการณ์คล้ายกับ triclad flatworms [ 33,34,37 ] คู่กับการติดฉลาก ipiwi1 brdu เปิดเผย ipiwi1 แค่ป้ายเซลล์ brdu เพียงติดป้ายเซลล์ ตลอดจน ipiwi1 / brdu คู่ labelled สเต็มเซลล์ ( รูปที่ 2H )ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ipiwi1 คือจำกัดเพียง subpopulation ของ neoblasts
กระบวนการของการฟื้นฟูใน acoel flatworms เมื่อตรวจสอบทั้งในลักษณะทางสัณฐานวิทยาและในระดับโมเลกุล แต่ไม่ได้ทำการวิเคราะห์ถึงวันที่ [ 23,24,26,30,48,49 ] ที่นี่เราแสดงสีหน้า ipiwi1 เปลี่ยนแปลงในระหว่างขั้นตอนต่อเนื่องของการฟื้นฟูหาง ( รูปที่ 3 แฟ้มเพิ่มเติม 5รูป ( S5 ) ชนิดนี้ไม่สามารถดำเนินการก่อนการฟื้นฟู ) หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่เริ่มต้นการตัดแขนขา , ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบในระบบเว็บไซต์ ( ตัวเลข 3A , ' ) 10 ชั่วโมง postamputation แต่ขอบขนาดเล็กเซลล์บวก ipiwi1 กลายเป็นมองเห็นด้านล่างผิวหนังชั้นนอก ( ตัวเลข 3B , B ' ) ที่ 25 ชั่วโมงหลังการผ่าตัด ipiwi1 คือ upregulated ภายในบลาสทีมาขนาดเล็ก ( ตัวเลข 3 C ,C ' ) จาก 48 68 ชั่วโมงของการฟื้นฟู การแสดงออก ipiwi1 ถูกตรวจพบใน neoblasts ที่จัดใน ring-shaped โครงสร้าง ( ตัวเลข 3d-f ' ) และสรุปภายหลังการพัฒนาอวัยวะสืบพันธุ์ . การแสดงออก ipiwi1 คือ upregulated เท่านั้นภายในภายในการฟื้นฟูบลาสทีมาแต่ไม่ใช่ในด้านหน้าภูมิภาคของสัตว์ ( เพิ่มเติมไฟล์ 5 รูป S5 ) ขณะที่การดำเนินไปการ blastemal เป็นเซลล์ได้โดยการลดลงทีละน้อยในการแสดงออก ipiwi1 ( ตัวเลข 3f-g ' )
เพิ่มเติมไฟล์ 5 . รูป S5 : . ภาพรวมของการแสดงออกและการเปลี่ยนแปลงในระหว่างการ ipiwi1 ด้านหลังใน isodiametra พัลชรา . ทั้งหมดนี้แสดงให้เห็นว่า ภาพรวมที่ชัดเจนขึ้น ipiwi1 เป็นเพียงในประเทศ upregulated ภายในเซลล์บลาสทีมา ( รายละเอียด ดูรูป 4 )การแสดงออกของยีน ( ipiwi1 a-i ) และจำกัดโปรตีน ( j-r ) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัด ( J ) และถึงห้าชั่วโมง postamputation ( B , K ) ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบในการเว็บไซต์โดยใน situ hybridization . ipiwi1 คือ upregulated ในการฟื้นฟูบลาสทีมา ( ลูกศร ) หลังจาก 10 ชั่วโมง ( C , L ) และ 25 ชั่วโมง postamputation ( D , M )จาก 42 ชั่วโมงเป็นต้นไป ipiwi1 ยังคง downregulated ในเซลล์บลาสทีมา ( E-R ) และการแสดงออก ipiwi1 และโปรตีนเป็นเพียงอยู่ในความแตกต่างของอวัยวะเพศบลาสทีมา ( ลูกศรเปิดใน e-q ) ขนาดแท่ง 100 μเมตร
รูปแบบ JPEG : : ขนาด 2MB ดาวน์โหลด fileopen ข้อมูล
thumbnailfigure 3 การแสดงออกของยีน ( ipiwi1 a-g ) และจำกัดโปรตีน ( ' - G ' ) ในช่วงของการฟื้นฟู .หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัด ( ' , ' ) , การแสดงออก ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบใหม่เว็บไซต์ หลังจาก 10 ชั่วโมง ipiwi1 คือ upregulated ใต้หนังกำพร้า ( ลูกศร ) ( B , B ' ) ที่ 25 ชั่วโมง postamputation ( C , C ' ) สัดส่วนที่สําคัญของเซลล์ภายในเซลล์บลาสทีมาเป็นบวก ipiwi1 .จาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไป ipiwi1 การแสดงออกและโปรตีนอยู่ในความแตกต่างของอวัยวะเพศบลาสทีมา ( ลูกศรเปิด D-F ) ( G G ' H ) หลังจาก 76 , ipiwi1 การแสดงออกถึงระดับเริ่มต้น บาร์ขนาด 50 μ M .
เราต่อไปตรวจสอบการแสดงออกของ ipiwi1 ตลอดขั้นตอนต่างๆของการพัฒนา postembryonic ( รูปที่ 4 ) ในสด . พัลชราฟัก ,เล็ก parenchymally ตั้งอยู่โซมา neoblasts และหลาย ipiwi1 ขนาดใหญ่บวกเซลล์สืบพันธุ์แรกอยู่ในภาคกลางของสัตว์ ( ตัวเลข 4 F ) ผู้ ipiwi1 ขนาดใหญ่บวกเซลล์ให้สูงขึ้นเพื่ออัณฑะและรังไข่ และเรายืนยันลักษณะของเซลล์เหล่านี้โดยคู่ฉลากกับผมพัลชราเฉพาะนาโนโพรบ ( เดอ มัลเดอร์ , พิมพ์ )เซลล์สืบพันธุ์แรกในการแสดงสดฟักผมพัลชราแนะนำเป็นแบบแยกของสายเชื้อ ในสายพันธุ์นี้ จำนวนเซลล์ ipiwi1 บวกเพิ่มขึ้นถึงสี่วันโพสต์ฟัก ( ตัวเลข 4B , G ) และ ipiwi1 แตกต่างกันเปื้อนตัวปัจจุบัน หลังจากหนึ่งสัปดาห์ ( ตัวเลข 4C , H )โซ่ของการพัฒนาไข่อาจจะเข้าใจหลังจาก 10 วันของการพัฒนา postembryonic ( ตัวเลข 4D ผม ) จำนวน ipiwi1 แสดงโซมาติกสเต็มเซลล์เพิ่มขึ้นในระหว่างการพัฒนา postembryonic . แหวนรูปโครงสร้างของเซลล์ บวก ipiwi1 สัดส่วนสำหรับบลาสทีมาอวัยวะเพศ ( รูปที่ จอฟ้า )โครงสร้างเหมือนกันกับความแตกต่างของอวัยวะเพศบลาสทีมาหลัง 42 ชั่วโมง 68 ชั่วโมงของการฟื้นฟู ( เปรียบเทียบกับรูป 3G ) บทบาทที่สำคัญของ neoblasts กลายเป็นชัดเจนโดยการรักษาด้วย ipiwi1 dsRNA ในระหว่างการพัฒนา หน้าที่เคาะลงของ ipiwi1 หนอนอีกครั้งในการพัฒนา
ต่อไป เราวิเคราะห์การแสดงออกของยีนในการ piwi เหมือน isodiametra พัลชราในผู้ใหญ่ในระหว่างการพัฒนา ฟื้นฟู ความอดอยากและหลังการฉายรังสี จากผมพัลชรา เราได้แยกสอง piwi เหมือนยีน และ ipiwi1 ipiwi2 เพิ่มเติม ( ไฟล์ที่ 1 และ 2 ตัวเลข S1 , S2 )ทั้งอนุรักษ์ และประกอบด้วย piwi ปาซโดเมน ( เพิ่มเติมไฟล์ 3 รูป S3 ) ซึ่งเป็นลักษณะสำหรับสมาชิกของ piwi / ที่ผ่านมาครอบครัว [ 46,47 ] เปรียบได้กับสิ่งมีชีวิตมากที่สุด เรียนจน ipiwi2 ปรากฏว่ามีสายเชื้อเฉพาะการแสดงออก ( เพิ่มเติมไฟล์ 4 , ตัวเลข s4a-c ) น่าสนใจ ipiwi1 พบนอกจากเชื้อโรคบรรทัดการแสดงออกแบบขยายโซมาติกสเต็มเซลล์ ( รูปที่ 2 ) สถานการณ์ที่รู้จักกันเท่านั้น จาก rhabditophoran flatworms sponges 33,36,37,43-45 เลอาโคอัน [ และ ] ดังนั้นเราจึงเน้นในการศึกษา ipiwi1 . การจำกัดโปรตีน ipiwi1 เราได้สร้างขึ้นโดยใช้แอนติบอดี ( เพิ่มเติมไฟล์ 4 รูป s4f ) .
เพิ่มเติมไฟล์ 1 . รูปที่ : :ลำดับนิวคลีโอไทด์และคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน ipiwi1 . อนุรักษ์ ปาซ piwi โดเมนและเน้นสีฟ้า ( ปาส ) และสีเขียว ( piwi ) การ piwi กล่องภายใน piwi โดเมนมีการทำเครื่องหมายในสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีขีดเส้นใต้ และเครื่องหมายในตัวหนา ไพรเมอร์ที่อังกฤษ ที่ขีดเส้นใต้ไว้ในลำดับ เปลี่ยนเบอร์ ipiwi1 ( am942741 ) .
รูปแบบ : ขนาดภาพ JPEG : 3.2mb fileopen
ดาวน์โหลดข้อมูลแฟ้มเพิ่มเติม 2 รูป S2 : ลำดับนิวคลีโอไทด์และคาดการณ์ผลิตภัณฑ์โปรตีน ipiwi2 . และอนุรักษ์ ปาซ piwi โดเมนมีการเน้นสีฟ้า ( ปาส ) และสีเขียว ( piwi ) การ piwi กล่องภายใน piwi โดเมนมีการทำเครื่องหมายในสีแดง เริ่มต้นและหยุด codon มีขีดเส้นใต้ และเครื่องหมายในตัวหนา ไพรเมอร์ที่อังกฤษ ที่ขีดเส้นใต้ไว้ในลำดับ เปลี่ยนเบอร์ ipiwi2 ( am942742 ) .
รูปแบบ JPEG : ขนาด : 3ดาวน์โหลดข้อมูลเพิ่มเติม fileopen 2
3 ไฟล์ รูป S3 : . แนวคาดคะเน piwi เหมือนยีนจากฉันพัลชรากับ piwi เหมือนยีนจากชนิดอื่น ๆ ( ก ) ตำแหน่งของกรดอะมิโนที่ป่าสงวน ปาซโดเมน ( ข ) ตำแหน่งของกรดอะมิโนที่สามารถ piwi โดเมน การ piwi กล่องเน้นสีม่วงกรดอะมิโนที่พบกับดอกจันสีเขียวควรจะสร้างกระเป๋าผูกสำหรับ 5'phosphate กลุ่มผูก RNA ดอกจันสีแดงบ่งบอกถึงการแสดงออกเลสงานเว็บไซต์คาร์บอกซิเลตที่ตกค้าง กรดอะมิโนที่พบในสีม่วงสามารถแยกแยะและสมาชิกของ piwi argonaute subfamily . ขนาดหนังสือเลข isodiametra พัลชรา ipiwi1 ( am942741 ) ; isodiametra พัลชรา ipiwi2 ( am942742 )macrostomum 30% macpiwi ( am942740 ) ; schmidtea Mediterranea smedwi1 ( dq186985 ) smedwi2 ( dq186986 ) ; dugesia จาป djpiwi1 ( aj865376 ) ; podocoryne carnea cniwi ( aas01181 ) ; C ³ prg1 ( np492121 ) ; แมลงวันทอง dmpiwi ( af104354 ) ; strongylocentrotus purpuratus seawi ( ay014899 ) ; Homo sapiens hiwi ( af104260 ) .
รูปแบบ : ขนาด JPEG : 4 MB ดาวน์โหลด fileopen ข้อมูล
แฟ้มเพิ่มเติม 4 . รูป ipiwi2 S4 : การแสดงออก , และควบคุมความรู้สึกและ ipiwi1 ipiwi2 ipiwi1 , Western blot และรังสีการควบคุม ipiwi2 ทั้งภูเขาใน situ hybridization ( ) มีรายละเอียดของการแสดงออกในอัณฑะ ( T ) ( B ) และในการพัฒนาไข่ ( de ) ( C ) ( D ) ipiwi1 ควบคุมความรู้สึก ( E ) ipiwi2 ควบคุมความรู้สึก ( F ) ใช้ ipiwi1 blot ตะวันตกของแอนติบอดี ,แสดงสัญญาณที่คาดว่าขนาด 100 กิโล ) ( g-i ) หนัก x ray รังสี 60 สีเทาไม่ได้ส่งผลใน downregulation สําคัญของแม่บ้านยีน isodiametra พัลชรายืดตัวปัจจัย Alpha ( ipef α ) ipef αควบคุม ( g ) ; ipef αแสดงออกหลังจากหนึ่งวัน ( H ) และหนึ่งสัปดาห์ ( ฉัน ) postirradiation . ขนาดแท่ง 100 μ M ( A , D , E , G , H , I ) , 50 μ M ( B ) และ 25 μ M ( C )
: ขนาดภาพ JPEG : รูปแบบ767kb ดาวน์โหลด fileopen ข้อมูล
thumbnailfigure 2 การแสดงออกของยีน ipiwi1 ( แอร์ ) และจำกัดโปรตีน ( d-g ) และ brdu / ipiwi1 ( H ) คู่ฉลากในฉันพัลชรา . ( ) ipiwi1 ภูเขาทั้งในชนิดของตัวอย่างผู้ใหญ่ ( ข ) รายละเอียดของการพัฒนาไข่ ( de ) และอัณฑะ ( T ) ( C ) บนระนาบโฟกัสแสดง ipiwi1 mRNA แสดงออกใน neoblasts ( เปิดหัวลูกศร ) ( De ) การประมาณการของ ipiwi1 การแปลด้วยโปรตีนในอัณฑะและการพัฒนาไข่ ( D ) และใน neoblasts ( NB ) ( E ) ( ฉ ) รายละเอียดของส่วนหน้า ( E ) แสดงให้เห็นถึงเซลล์บวก ipiwi1 ( เปิดหัวลูกศร ) ( G ) รายละเอียดของด้านหลังของภูมิภาค ( D ) แสดงให้เห็นถึงเซลล์บวก ipiwi1 ( เปิดหัวลูกศร ) ( H ) คู่ staining สเต็มเซลล์ใน s-phase ( สีเขียว ) และเซลล์บวก ipiwi1 ( สีแดง )ฉายด้วย ( 1,02 μ M ) แสดงตนของ brdu แค่ป้ายเซลล์ ( ลูกศรสีเขียว ) , ipiwi1 แค่ป้ายเซลล์ ( ลูกศรสีแดง ) รวมทั้ง brdu / piwi คู่ labelled สเต็มเซลล์ ( ลูกศรสีเหลือง ) ตัวเลขทั้งหมดก่อน คือ ด้านบน แถบสเกล ( A , D , E ) 100 μ m ( B , C , f-h ) 50 เมตร
μสัตว์ในผู้ใหญ่ipiwi1 mRNA และโปรตีนเป็นภาษาท้องถิ่นใน subpopulation สเต็มเซลล์ทางกายและพัฒนา ( รูปที่ 2 ) ในขณะที่ความรู้สึกสอบสวนไม่ได้แสดงสัญญาณใด ๆเพิ่มเติม ( ไฟล์ 4 รูป s4d ) ipiwi1 บวกเซลล์ในอัณฑะประกอบด้วยสองแถบด้านข้างของสัตว์ซึ่งประกอบด้วย อัณฑะ และเจริญ ( ตัวเลข 2A , B , D )ขั้นตอนทั้งหมดของเซลล์สืบพันธุ์หญิงแสดง ipiwi1 กรัมและผู้ใหญ่รวมทั้งไข่ , ไข่ ( ตัวเลข 2A , B , D ) เราเพิ่มปริมาณ mRNA ของ ipiwi1 ในถิ่น neoblasts ในภูมิภาค หลังการ statocyst แต่ไม่ใช่ในปลายด้านหลังของสัตว์ ( ตัวเลข 2A , C ) ในทางตรงกันข้าม , บาง ipiwi1 บวกโปรตีนเซลล์พบว่า ก่อนการ statocyst ( ตัวเลข 2 ,F ) และหางภูมิภาค ( รูปที่ 2G ) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ipiwi1 โปรตีนหน้าที่ในการ neoblasts สถานการณ์คล้ายกับ triclad flatworms [ 33,34,37 ] คู่กับการติดฉลาก ipiwi1 brdu เปิดเผย ipiwi1 แค่ป้ายเซลล์ brdu เพียงติดป้ายเซลล์ ตลอดจน ipiwi1 / brdu คู่ labelled สเต็มเซลล์ ( รูปที่ 2H )ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ipiwi1 คือจำกัดเพียง subpopulation ของ neoblasts
กระบวนการของการฟื้นฟูใน acoel flatworms เมื่อตรวจสอบทั้งในลักษณะทางสัณฐานวิทยาและในระดับโมเลกุล แต่ไม่ได้ทำการวิเคราะห์ถึงวันที่ [ 23,24,26,30,48,49 ] ที่นี่เราแสดงสีหน้า ipiwi1 เปลี่ยนแปลงในระหว่างขั้นตอนต่อเนื่องของการฟื้นฟูหาง ( รูปที่ 3 แฟ้มเพิ่มเติม 5รูป ( S5 ) ชนิดนี้ไม่สามารถดำเนินการก่อนการฟื้นฟู ) หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่เริ่มต้นการตัดแขนขา , ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบในระบบเว็บไซต์ ( ตัวเลข 3A , ' ) 10 ชั่วโมง postamputation แต่ขอบขนาดเล็กเซลล์บวก ipiwi1 กลายเป็นมองเห็นด้านล่างผิวหนังชั้นนอก ( ตัวเลข 3B , B ' ) ที่ 25 ชั่วโมงหลังการผ่าตัด ipiwi1 คือ upregulated ภายในบลาสทีมาขนาดเล็ก ( ตัวเลข 3 C ,C ' ) จาก 48 68 ชั่วโมงของการฟื้นฟู การแสดงออก ipiwi1 ถูกตรวจพบใน neoblasts ที่จัดใน ring-shaped โครงสร้าง ( ตัวเลข 3d-f ' ) และสรุปภายหลังการพัฒนาอวัยวะสืบพันธุ์ . การแสดงออก ipiwi1 คือ upregulated เท่านั้นภายในภายในการฟื้นฟูบลาสทีมาแต่ไม่ใช่ในด้านหน้าภูมิภาคของสัตว์ ( เพิ่มเติมไฟล์ 5 รูป S5 ) ขณะที่การดำเนินไปการ blastemal เป็นเซลล์ได้โดยการลดลงทีละน้อยในการแสดงออก ipiwi1 ( ตัวเลข 3f-g ' )
เพิ่มเติมไฟล์ 5 . รูป S5 : . ภาพรวมของการแสดงออกและการเปลี่ยนแปลงในระหว่างการ ipiwi1 ด้านหลังใน isodiametra พัลชรา . ทั้งหมดนี้แสดงให้เห็นว่า ภาพรวมที่ชัดเจนขึ้น ipiwi1 เป็นเพียงในประเทศ upregulated ภายในเซลล์บลาสทีมา ( รายละเอียด ดูรูป 4 )การแสดงออกของยีน ( ipiwi1 a-i ) และจำกัดโปรตีน ( j-r ) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัด ( J ) และถึงห้าชั่วโมง postamputation ( B , K ) ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบในการเว็บไซต์โดยใน situ hybridization . ipiwi1 คือ upregulated ในการฟื้นฟูบลาสทีมา ( ลูกศร ) หลังจาก 10 ชั่วโมง ( C , L ) และ 25 ชั่วโมง postamputation ( D , M )จาก 42 ชั่วโมงเป็นต้นไป ipiwi1 ยังคง downregulated ในเซลล์บลาสทีมา ( E-R ) และการแสดงออก ipiwi1 และโปรตีนเป็นเพียงอยู่ในความแตกต่างของอวัยวะเพศบลาสทีมา ( ลูกศรเปิดใน e-q ) ขนาดแท่ง 100 μเมตร
รูปแบบ JPEG : : ขนาด 2MB ดาวน์โหลด fileopen ข้อมูล
thumbnailfigure 3 การแสดงออกของยีน ( ipiwi1 a-g ) และจำกัดโปรตีน ( ' - G ' ) ในช่วงของการฟื้นฟู .หนึ่งชั่วโมงหลังจากการตัด ( ' , ' ) , การแสดงออก ipiwi1 ไม่สามารถตรวจพบใหม่เว็บไซต์ หลังจาก 10 ชั่วโมง ipiwi1 คือ upregulated ใต้หนังกำพร้า ( ลูกศร ) ( B , B ' ) ที่ 25 ชั่วโมง postamputation ( C , C ' ) สัดส่วนที่สําคัญของเซลล์ภายในเซลล์บลาสทีมาเป็นบวก ipiwi1 .จาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไป ipiwi1 การแสดงออกและโปรตีนอยู่ในความแตกต่างของอวัยวะเพศบลาสทีมา ( ลูกศรเปิด D-F ) ( G G ' H ) หลังจาก 76 , ipiwi1 การแสดงออกถึงระดับเริ่มต้น บาร์ขนาด 50 μ M .
เราต่อไปตรวจสอบการแสดงออกของ ipiwi1 ตลอดขั้นตอนต่างๆของการพัฒนา postembryonic ( รูปที่ 4 ) ในสด . พัลชราฟัก ,เล็ก parenchymally ตั้งอยู่โซมา neoblasts และหลาย ipiwi1 ขนาดใหญ่บวกเซลล์สืบพันธุ์แรกอยู่ในภาคกลางของสัตว์ ( ตัวเลข 4 F ) ผู้ ipiwi1 ขนาดใหญ่บวกเซลล์ให้สูงขึ้นเพื่ออัณฑะและรังไข่ และเรายืนยันลักษณะของเซลล์เหล่านี้โดยคู่ฉลากกับผมพัลชราเฉพาะนาโนโพรบ ( เดอ มัลเดอร์ , พิมพ์ )เซลล์สืบพันธุ์แรกในการแสดงสดฟักผมพัลชราแนะนำเป็นแบบแยกของสายเชื้อ ในสายพันธุ์นี้ จำนวนเซลล์ ipiwi1 บวกเพิ่มขึ้นถึงสี่วันโพสต์ฟัก ( ตัวเลข 4B , G ) และ ipiwi1 แตกต่างกันเปื้อนตัวปัจจุบัน หลังจากหนึ่งสัปดาห์ ( ตัวเลข 4C , H )โซ่ของการพัฒนาไข่อาจจะเข้าใจหลังจาก 10 วันของการพัฒนา postembryonic ( ตัวเลข 4D ผม ) จำนวน ipiwi1 แสดงโซมาติกสเต็มเซลล์เพิ่มขึ้นในระหว่างการพัฒนา postembryonic . แหวนรูปโครงสร้างของเซลล์ บวก ipiwi1 สัดส่วนสำหรับบลาสทีมาอวัยวะเพศ ( รูปที่ จอฟ้า )โครงสร้างเหมือนกันกับความแตกต่างของอวัยวะเพศบลาสทีมาหลัง 42 ชั่วโมง 68 ชั่วโมงของการฟื้นฟู ( เปรียบเทียบกับรูป 3G ) บทบาทที่สำคัญของ neoblasts กลายเป็นชัดเจนโดยการรักษาด้วย ipiwi1 dsRNA ในระหว่างการพัฒนา หน้าที่เคาะลงของ ipiwi1 หนอนอีกครั้งในการพัฒนา
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Don't worry
- Deputy Prime Minister Pridiyathorn Devak
- You may remember the soothsayer’s warnin
- โรงเรียนมีการประกวดไอดอล ทำให้วันนี้ตอนบ
- ร้านปรากฎขี้นครั้งแรกที่ ทะเล
- Conclusions
- จู่ๆน้ำก็ไม่ไหล
- สุนทรพจน์เรื่อง...เพื่อนรักของฉัน...“เพื
- The lives of most people are determined
- ตอนนี้ชั้นเรียนจบแล้ว
- Number of others
- We were waiting for the bus when a car c
- In Thailand,Tourist Information Centers
- ฉันเหนื่อยกับการตามหาความรัก มันทำให้เจ็
- การกลับมาครั้งนี้
- ก่อนที่ฉันจะแก่
- All the other connecting flights you had
- แดดดี้ดุ แดดดี้ทำโทษ เพราะถ้าปีเตอร์ทิ้ง
- ความหวัง
- Nothing much I have just been staying at
- สุนทรพจน์เรื่อง...เพื่อนรักของฉัน...“เพื
- ฉันตั้งใจลดน้ำหนักมาได้เดือนนึงแล้ว เข้ส
- their
- ทศพร
