Bioluminescence Animal Imaging. All

Bioluminescence Animal Imaging. All animal handling was performed in accordance with Stanford University's Animal Research Committee guidelines. HT1080 cells constitutively overexpressing a BRET fusion protein, RLuc8 or RLuc8.6, were trypsinized, pelleted, and resuspended in PBS at 3 × 106 cells in 150 μL. The PBS cell suspension was injected through the tail vein in a set of anesthetized (2% isoflurane oxygen) female nude mice (Nu/Nu; Charles River). After cell injection, mice were removed from the anesthesia. CLZ or CLZ-v (35 μg/mouse) diluted in PBS (150 μL total volume) was injected through the tail vein 1.5 h after cell suspension injection. Mice were imaged immediately using an IVIS-200 or IVIS-Spectrum equipped with a charge-coupled device camera. Imaging was performed in sequence luminescence scan mode using either open or 20-nm bandwidth spectral filters appropriate for each donor/acceptor system, with 1 min acquisition time at each filter. Regions of interest were drawn over the mice lungs area for each image. The signal from control mice injected only with the luciferase substrate was subtracted from the total signal. All data were analyzed using Living Image 3.1 software. For experiments using various cell numbers of reporter cells, imaging was preformed as described above. Although the reporter cell number was varied, the total number of cells injected in mice was kept constant (3 × 106) by adding regular HT1080 cells. Detailed procedures for imaging the rapamycin-induced FRB/FKBP12 interaction in mice are given in SI Materials and Methods.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Bioluminescence สัตว์ภาพ การจัดการสัตว์ทั้งหมดที่ดำเนินการตามแนวทางกรรมการวิจัยสัตว์มหาวิทยาลัยสแตนฟอร์ด มี trypsinized เซลล์ HT1080 overexpressing เบรตฟิวชั่นโปรตีน RLuc8 หรือ RLuc8.6, constitutively, PBS pelleted และ resuspended ในที่ 3 × 106 เซลล์ใน 150 μL ระงับเซลล์ PBS ถูกฉีดผ่านหลอดเลือดดำหางในชุดด้วย (ออกซิเจน isoflurane 2%) หญิงเปลือยหนู (Nu Nu ชาร์ลส์แม่น้ำ) หลังจากที่ฉีดเซลล์ หนูถูกเอาออกจากยา CLZ หรือ CLZ-v (35 μg/เมาส์) ยกเว้นใน PBS (150 μL รวมปริมาตร) ถูกฉีดผ่านหลอดเลือดดำหาง 1.5 h หลังจากฉีดยาระงับเซลล์ หนูถูก imaged ทันทีใช้ IVIS 200 การพร้อมกล้องอุปกรณ์จุ–ค่าสเปกตรัม IVIS ทำภาพในโหมดการสแกน luminescence ลำดับใดแบนด์วิธเปิด หรือ 20 nm สเปกตรัมตัวกรองที่เหมาะสมสำหรับแต่ละระบบผู้ บริจาค/acceptor ด้วยเวลา 1 นาทีซื้อที่กรองแต่ละ ภูมิภาคที่น่าสนใจได้ออกไปบริเวณปอดหนูแต่ละรูป สัญญาณจากเมาส์ควบคุมที่ฉีด ด้วยพื้นผิว luciferase ถูกหักออกจากสัญญาณรวม ข้อมูลทั้งหมดถูกวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ 3.1 รูปอาศัยอยู่ สำหรับการทดลองใช้ต่าง ๆ ตัวเลขเซลล์เซลล์โปรแกรมรายงาน ภาพถูก preformed ที่อธิบายข้างต้น แม้ว่าจำนวนเซลล์โปรแกรมรายงานแตกต่าง จำนวนของเซลล์ที่ฉีดในหนูเก็บค่าคง (3 × 106) โดยการเพิ่มเซลล์ HT1080 ปกติ ขั้นตอนโดยละเอียดสำหรับภาพโต้ FRB/FKBP12 เกิด rapamycin ในหนูได้ SI วัสดุและวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชีวิตเรืองแสงการถ่ายภาพสัตว์ การจัดการสัตว์ทั้งหมดที่ได้ดำเนินการให้สอดคล้องกับมหาวิทยาลัยสแตนฟอแนวทางคณะกรรมการวิจัยสัตว์ เซลล์ HT1080 constitutively overexpressing โปรตีน BRET ฟิวชั่น, RLuc8 หรือ RLuc8.6 ถูก trypsinized, เม็ดและ resuspended ในพีบีเอสที่ 3 × 106 เซลล์ใน 150 ไมโครลิตร เซลล์แขวนลอยพีบีเอสถูกฉีดผ่านทางหลอดเลือดดำหางในชุดของดมยาสลบ (2% ออกซิเจน Isoflurane) หนูเปลือยหญิง (Nu / Nu; ชาร์ลส์ริเวอร์) หลังจากการฉีดเซลล์หนูที่ถูกถอดออกจากการระงับความรู้สึก CLZ หรือ CLZ-V (35 ไมโครกรัม / mouse) เจือจางในพีบีเอส (150 ไมโครลิตรปริมาณรวม) ถูกฉีดผ่านทางหลอดเลือดดำหาง 1.5 ชั่​​วโมงหลังจากการฉีดเซลล์แขวนลอย หนูถูกถ่ายภาพได้ทันทีโดยใช้ Ivis-200 หรือ Ivis-Spectrum พร้อมกับกล้องอุปกรณ์ค่าใช้จ่ายควบคู่ ได้ดำเนินการถ่ายภาพในโหมดแสงเรืองลำดับสแกนโดยใช้เปิดหรือ 20 นาโนเมตรแบนด์วิดธ์กรองสเปกตรัมที่เหมาะสมสำหรับแต่ละผู้บริจาค / ระบบตัวรับกับการเข้าซื้อกิจการครั้งที่ 1 นาทีที่แต่ละตัวกรอง ภูมิภาคท​​ี่น่าสนใจถูกดึงมากกว่าหนูพื้นที่ปอดแต่ละภาพ สัญญาณการควบคุมจากหนูฉีดเฉพาะกับพื้นผิว luciferase ถูกหักออกจากสัญญาณทั้งหมด ข้อมูลทั้งหมดที่ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ชีวิตภาพที่ 3.1 ซอฟแวร์ สำหรับการทดลองใช้จำนวนเซลล์ต่างๆของเซลล์นักข่าวถ่ายภาพถูก preformed ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น แม้ว่าจำนวนเซลล์ผู้สื่อข่าวได้รับแตกต่างกันจำนวนของเซลล์ที่ฉีดในหนูที่ถูกเก็บไว้คงที่ (3 × 106) โดยการเพิ่มเซลล์ HT1080 ปกติ ขั้นตอนอย่างละเอียดสำหรับการถ่ายภาพปฏิสัมพันธ์ FRB rapamycin ที่เกิด / FKBP12 ในหนูที่จะได้รับใน SI วัสดุและวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไบโอลูมิเนสเซนภาพสัตว์ การจัดการสัตว์ทั้งหมดในการปฏิบัติตามแนวทางที่คณะกรรมการวิจัยสัตว์ของมหาวิทยาลัยสแตนฟอร์ด ht1080 เซลล์ constitutively overexpressing เป็นโปรตีน Bret rluc8 , หรือ rluc8.6 , trypsinized เม็ด , และ resuspended ใน PBS 3 × 106 เซลล์ใน 150 μ Lดู ทีวีช่องเซลล์แขวนลอยถูกฉีดผ่านทางหลอดเลือดดำหางในชุดของยาสลบ ( 2% Isoflurane ออกซิเจน ) หนูหญิงเปลือย ( nu / นู ; แม่น้ำชาร์ลส์ ) หลังการฉีดเซลล์ หนูถูกเอาออกจากยาชา clz หรือ clz-v ( 35 μกรัม / เมาส์ ) เจือจางใน PBS ( ปริมาณ 150 μ L ทั้งหมด ) ถูกฉีดผ่านทางหลอดเลือดดำ 1.5 ชม. เซลล์แขวนลอยหางหลังฉีดหนูรีบใช้ หรืออื่นๆ ivis-200 and สเปกตรัมพร้อมกับชาร์จคู่กล้องอุปกรณ์ ภาพถ่ายแสดงในลำดับการใช้ให้เปิดโหมดการสแกนหรือ 20 nm แบนด์สเปกตรัมตัวกรองที่เหมาะสมสำหรับแต่ละระบบผู้บริจาค / พระนาสิก กับ 1 นาที เวลาที่ได้มาแต่ละตัวกรอง ภูมิภาคของความสนใจถูกดึงไปทั่วบริเวณปอดหนูในแต่ละภาพสัญญาณจากการควบคุมเมาส์ฉีดด้วยสารลูซิเฟอเรสถูกหักออกจากสัญญาณทั้งหมด ข้อมูลที่ได้นำมาวิเคราะห์โดยใช้ชีวิตภาพ 3.1 ซอฟต์แวร์ สำหรับการทดลองใช้จำนวนเซลล์ต่าง ๆของนักข่าว เซลล์ , ภาพถูก preformed ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ถึงแม้ว่านักข่าวเบอร์มือถือได้หลากหลายจำนวนเซลล์ที่ฉีดในหนูที่ถูกเก็บไว้คงที่ ( 3 × 106 ) โดยการเพิ่มประ ht1080 เซลล์ ขั้นตอนรายละเอียดสำหรับ imaging ราปามัยซิน ) frb / fkbp12 ปฏิสัมพันธ์ในหนูที่ได้รับในวัสดุศรีและวิธีการ